Tratamento periodontal não cirúrgico e níveis de periostina

O estudo observacional prospectivo foi projetado para caracterizar as alterações da periostina ao longo do tempo após o tratamento periodontal não cirúrgico em soro e GCF no Departamento de Periodontologia da Faculdade de Odontologia da Hatay Mustafa Kemal University, Hatay, Turquia. O protocolo do estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para Uso de Seres Humanos em Pesquisa da Hatay Mustafa Kemal University (Protocolo nº: 2019/118). O estudo foi realizado de acordo com os princípios da Declaração de Helsinque e conduzido de acordo com as diretrizes do CONSORT (Schulz, Altman, & Moher, 2010). Este projeto de estudo foi apoiado financeiramente pelo Coordenador de Projetos de Pesquisa Científica da Hatay Mustafa Kemal University (19M051).

Os indivíduos foram incluídos no estudo de dezembro de 2019 a agosto de 2021. O consentimento informado por escrito foi obtido de cada participante antes do exame clínico periodontal.

População do estudo

Quarenta e oito indivíduos adultos foram incluídos no estudo. Os participantes foram recrutados em 2 grupos pareados por sexo com 24 participantes em cada: grupos com saúde periodontal (PH) e periodontite (P). De acordo com as variáveis ​​demográficas dos pacientes incluídos no grupo P, foram incluídos os pacientes do grupo HP.

Parâmetros periodontais

Os parâmetros clínicos periodontais foram registrados por um único examinador calibrado (k = 0,95) (autor AS). A concordância intra-examinador foi determinada para CAL. A reprodutibilidade intraexaminador foi determinada por meio de exames repetidos de 10 sujeitos com intervalo de uma hora. As medidas periodontais clínicas foram avaliadas usando as seguintes medidas periodontais para diagnóstico periodontal em ambos os grupos e também no 1º mês, 3º mês após o tratamento periodontal não cirúrgico no grupo de periodontite.

As medições foram realizadas usando uma sonda periodontal Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, EUA) e incluíram profundidade de bolsa de sondagem (PPD), nível de inserção clínica (CAL), índice de placa (PI) (Silness & Loe, 1964), índice (GI) (Loe & Silness, 1963) e porcentagem de sangramento à sondagem (BOP) (Ainamo & Bay, 1975) em seis locais por dente (mésio-vestibular, vestibular, disto-vestibular, mésio-lingual, lingual e disto -lingual) em cada dente.

O diagnóstico de doenças e condições periodontais foi feito de acordo com os critérios diagnósticos radiográficos e clínicos propostos pelo Workshop Mundial de 2017 sobre Classificação de Doenças e Condições Periodontais e Peri-implantares (Caton et al., 2018). Indivíduos com BOP < 10% sem perda de inserção e perda óssea radiográfica foram considerados com saúde periodontal (Tonetti & Sanz, 2019). Os critérios para periodontite incluíram pacientes com CAL ≥ 5 mm em dois ou mais sítios interproximais e PPD ≥ 6 mm em um ou mais sítios interproximais. Apenas a periodontite estágio III-IV (grave) foi incluída no presente estudo (Tonetti, Greenwell, & Kornman, 2018).

Intervenção Periodontal

Os pacientes com periodontite foram tratados com desinfecção bucal completa em um estágio. A desinfecção bucal completa incluiu procedimentos de raspagem e alisamento radicular em 24 horas em duas sessões. Cada sessão foi praticada por 60 minutos em dois dias consecutivos. A irrigação subgengival e a escovação da língua foram feitas com gel de CHX 1% por 1 min. Bochechos com CHX 0,12% foram realizados por 30 segundos no início e no final de cada sessão e duas vezes ao dia durante 2 semanas (Quirynen et al., 1995).

Coleta de Amostras GCF

Amostras GCF foram coletadas após 8 horas de jejum noturno e uma semana após as medições periodontais clínicas no início em dois grupos e depois na 24ª h, 48ª h, 14º dia 1º mês, 3º mês após o tratamento periodontal não cirúrgico (Akalin, Baltacioglu , Alver e Karabulut, 2007). As amostras foram coletadas do lado dos dentes com PPDs ≥6 mm e BOP positivo em pacientes com periodontite. Seis amostras GCF foram coletadas por participante. As amostras foram coletadas de um local mesial e distal em cada um dos três dentes (incisivos, pré-molares e molares). A contaminação da saliva foi evitada pelo isolamento com rolos de algodão e secagem suave ao ar da área de amostragem. Amostras contaminadas com saliva ou sangue não foram incluídas. A placa foi suavemente removida da área de amostragem pela cureta periodontal. As amostras foram coletadas em 30 segundos com tiras de papel padronizado (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) pelo método do orifício. (Rudin, Overdiek, & Rateitschak, 1970) Os volumes foram medidos em um dispositivo eletrônico de medição de fluido gengival pré-calibrado (Oraflow Inc., Plainview, NY)|| (Chapple, Landini, Griffiths, Patel e Ward, 1999). Os valores do dispositivo eletrônico foram referenciados a uma curva padrão e convertidos para um volume real (µl). Todas as tiras de Periopaper foram agrupadas em tubos plásticos de microcentrífuga Eppendorf. Eles foram armazenados a -80 °C até a análise bioquímica.

Todas as amostras foram descongeladas e 375 μl de solução salina tamponada com fosfato (pH: 7,00, 10 mM Na2PO4, 137 mM NaCl e 2,7 mM KCl) foram adicionados aos tubos eppendorf contendo as tiras de amostra. Posteriormente, as amostras foram eluídas por 30 minutos à temperatura ambiente e (Chapple et al., 1997) centrifugadas a 11.000 × g por 15 minutos a 4 °C. A medição dos níveis de periostina, IL-1β e FGF foram ensaiados.

Coleta de Amostras de Soro

Amostras de sangue venoso periférico foram coletadas dos pacientes. O soro foi separado das células por centrifugação a 2.000 rpm por 10 min, após o que foi armazenado a -80°C, até a realização das análises bioquímicas.

Análises Laboratoriais

Os níveis de periostina, IL-1β e FGF foram medidos pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) usando kits disponíveis comercialmente em comprimento de onda de 450 nm em ELISA Reader (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland).

Medição dos níveis de periostina em amostras de GCF

Os níveis de periostina foram medidos por ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (Kit Cat No: E-EL-H6113). Os intervalos de ensaio para a periostina foram 3,13-200 ng/ml; sensibilidade, 1,88 ng/ml, coeficientes de variância (CV%) intra e inter-ensaio foram < 10%.

Medição dos níveis de IL-1β em amostras GCF

Os níveis de IL-1β foram medidos por ELABSCIENCE Human IL-1β (Kit Cat No: E-EL-H0149). Os intervalos de ensaio para IL-1β foram 7,81-500 pg/ml; sensibilidade, 4,69 pg/ml, coeficientes de variância (CV%) intra e inter-ensaio foram < 10%.

Medição dos níveis de FGF em amostras GCF

Os níveis de FGF foram medidos pelo ELABSCIENCE Human FGF21 (Kit Cat No: E-EL-H0074). Os intervalos de ensaio para o FGF foram 31,25-2000 pg/ml; sensibilidade, 18,75 pg/ml, coeficientes de variância (CV%) intra e inter-ensaio foram < 10%.

Análise estatística

A normalidade da distribuição das variáveis ​​contínuas foi testada pelo teste de Shapiro-Wilk. As estatísticas descritivas foram apresentadas como média e desvio padrão (média±DP) para variáveis ​​distribuídas paramétricas e mediana (intervalo interquartílico) para variáveis ​​distribuídas não paramétricas.

O teste qui-quadrado foi utilizado para analisar as associações entre as variáveis ​​categóricas. O teste t de Student para variáveis ​​numéricas normalmente distribuídas e o teste Mann Whitney u para variáveis ​​numéricas não normalmente distribuídas foram realizados para comparar 2 grupos independentes para dados numéricos. O teste de Freidman foi realizado para diferentes momentos com variáveis ​​não paramétricas. Testes de comparações múltiplas de Dunn foram realizados para análises de comparações múltiplas pareadas post hoc.

A análise estatística foi realizada com SPSS para Windows versão 24.0 e o valor P <0,05 foi aceito como estatisticamente significativo.