非外科的歯周治療とペリオスチンレベル

観察的前向き研究は、トルコのハタイにあるハタイ ムスタファ ケマル大学歯学部の歯周病学科で、血清および GCF を用いた非外科的歯周治療後の経時的なペリオスチンの変化を特徴付けるように設計されました。 研究プロトコルは、ハタイ ムスタファ ケマル大学の研究におけるヒト被験者の使用に関する倫理委員会によって承認されました (プロトコル番号: 2019/118)。 この研究は、ヘルシンキ宣言の趣旨に従って実施され、CONSORT ガイドラインに従って実施されました (Schulz, Altman, & Moher, 2010)。 この研究プロジェクトは、ハタイ ムスタファ ケマル大学科学研究プロジェクト コーディネーター (19M051) によって財政的に支援されました。

個人は、2019 年 12 月から 2021 年 8 月までの研究に含まれていました。 臨床歯周検査の前に、各参加者から書面によるインフォームド コンセントを得た。

調査対象母集団

48 人の成人がこの研究に登録されました。 参加者は、それぞれ 24 人の参加者を持つ 2 つの性が一致したグループに募集されました: 歯周病の健康な (PH) グループと歯周炎 (P) グループ。 Pグループに含まれる患者の人口統計学的変数に従って、PHグループの患者が含まれました。

歯周パラメータ

歯周病の臨床パラメーターは、校正された 1 人の検査者 (k = 0.95) によって記録されました (著者 AS)。 CAL については、審査官間合意が決定されました。 検査者内再現性は、1 時間間隔で 10 人の被験者を繰り返し検査することによって決定されました。 臨床的歯周測定値は、歯周炎群の非外科的歯周治療後 1 か月目、3 か月目に、両方のグループの歯周診断のために以下の歯周測定値を使用して評価されました。

測定は、Williams 歯周プローブ (Hu-Friedy、シカゴ、イリノイ州、米国) を使用して実行され、プローブ ポケット深さ (PPD)、臨床付着レベル (CAL)、プラーク インデックス (PI) (Silness & Loe、1964)、歯肉インデックス (GI) (Loe & Silness, 1963)、およびプロービング時の出血率 (BOP) (Ainamo & Bay, 1975) を、歯ごとに 6 つの部位 (メシオバッカル、バッカル、ディストバッカル、メシオリンガル、リンガル、ディスト) で測定します。 -舌側) 各歯に。

歯周疾患および状態の診断は、歯周およびインプラント周囲疾患および状態の分類に関する 2017 年世界ワークショップ (Caton et al., 2018) によって提案された X 線および臨床診断基準に従って行われました。 BOP が 10% 未満で、アタッチメントの喪失や X 線による骨の喪失がない人は、歯周病が健康であると見なされました (Tonetti & Sanz, 2019)。 歯周炎の基準には、2 つ以上の歯間部位で CAL ≧ 5 mm、1 つ以上の歯間部位で PPD ≧ 6 mm の患者が含まれていました。 現在の研究には、ステージ III ～ IV (重度) の歯周炎のみが含まれていました (Tonetti, Greenwell, & Kornman, 2018)。

歯周インターベンション

歯周病患者は、一段階の全口消毒によって治療されました。 口全体の消毒には、2 つのセッションで 24 時間以内に口全体のスケーリングと根の計画手順が含まれていました。 各セッションは 2 日間連続して 60 分間練習しました。 歯肉縁下の洗浄と舌のブラッシングは、1% CHX ゲルで 1 分間行いました。 0.12% CHX によるうがい薬を、各セッションの開始時と終了時に 30 秒間、1 日 2 回、2 週間実施しました (Quirynen et al., 1995)。

GCFサンプルのコレクション

GCFサンプルは、8時間の夜間絶食後、2つのグループのベースラインでの臨床歯周測定の1週間後、および非外科的歯周治療の24時間目、48時間目、14日目、1か月目、3か月目に収集されました（Akalin、Baltacioglu 、Alver、およびKarabulut、2007）。 サンプルは、PPDが6 mm以上で、歯周炎患者のBOP陽性の歯側から採取されました。 参加者ごとに 6 つの GCF サンプルが採取されました。 サンプルは、3 本の歯 (切歯、小臼歯、および大臼歯) のそれぞれの近心および遠心部位から収集されました。 唾液の混入は、コットンロールで隔離し、サンプリング領域を穏やかに風乾することで防止しました。 唾液や血液で汚染されたサンプルは含まれていません。 歯周キュレットによって試料採取領域から歯垢を静かに取り除いた。 サンプルは、標準化された紙片 (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) を使用して、オリフィス法により 30 秒以内に収集されました。 Overdiek, & Rateitschak, 1970) 容量は、事前に校正された電子歯肉液測定装置 (Oraflow Inc.、Plainview、NY) で測定されました。 (チャップル、ランディーニ、グリフィス、パテル、ワード、1999 年)。 電子デバイスの値は、標準曲線を参照し、実際の容量 (μl) に変換されました。 Periopaper ストリップはすべて、プラスチック製のエッペンドルフ微量遠心管にプールされました。 生化学分析まで-80°Cで保存しました。

すべてのサンプルを解凍し、375 μl のリン酸緩衝生理食塩水 (pH: 7.00、10 mM Na2PO4、137 mM NaCl、および 2.7 mM KCl) を、サンプル ストリップを含むエッペンドルフ チューブに加えました。 その後、サンプルを室温で 30 分間溶出し、(Chapple et al., 1997) 11000 xg で 15 分間、4 °C で遠心分離しました。 ペリオスチン、IL-1β、および FGF レベルの測定をアッセイしました。

血清サンプルの収集

患者から末梢静脈血サンプルを採取した。 血清は、2000 rpm で 10 分間の遠心分離によって細胞から分離され、その後、生化学分析が行われるまで -80 °C で保存されました。

実験室分析

ペリオスチン、IL-1β、および FGF レベルは、ELISA リーダー (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland) で波長 450 nm の市販のキットを使用して、酵素結合免疫吸着アッセイ (ELISA) によって測定されました。

GCFサンプル中のペリオスチンレベルの測定

ペリオスチンのレベルは、ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (Kit Cat No: E-EL-H6113) で測定しました。 ペリオスチンのアッセイ範囲は 3.13 ～ 200 ng/ml でした。感度、1.88 ng/ml、アッセイ内およびアッセイ間の変動係数 (CV%) は < 10% でした。

GCF サンプル中の IL-1β レベルの測定

IL-1β レベルは ELABSCIENCE Human IL-1β (キット カタログ番号: E-EL-H0149) によって測定されました。 IL-1βのアッセイ範囲は7.81～500 pg/mlでした。感度、4.69 pg/ml、アッセイ内およびアッセイ間の変動係数 (CV%) は < 10% でした。

GCF サンプル中の FGF レベルの測定

ELABSCIENCE Human FGF21 (Kit Cat No: E-EL-H0074) により FGF レベルを測定しました。 FGF のアッセイ範囲は 31.25 ～ 2000 でした pg/ml;感度、18.75 pg/ml、アッセイ内およびアッセイ間の変動係数 (CV%) は < 10% でした。

統計分析

連続変数の分布の正規性は、Shapiro-Wilk テストによってテストされました。 記述統計は、パラメトリック分布変数の平均および標準偏差（平均±標準偏差）およびノンパラメトリック分布変数の中央値（四分位範囲）として提示されました。

カイ二乗検定を使用して、カテゴリ変数間の関連性を分析しました。 正規分布数値変数のスチューデント t 検定と非正規分布数値変数のマン ホイットニー u 検定を実行して、数値データの 2 つの独立したグループを比較しました。 フリードマン検定は、ノンパラメトリック変数を使用してさまざまな時点で実行されました。 事後ペアワイズ多重比較分析のためにダン多重比較検定を行った。

SPSS for Windows バージョン 24.0 を使用して統計分析を実行し、P 値 <0.05 を統計的に有意であると認めました。