Tratamiento periodontal no quirúrgico y niveles de periostina

El estudio prospectivo observacional fue diseñado para caracterizar los cambios de periostina a lo largo del tiempo después del tratamiento periodontal no quirúrgico en suero y GCF en el Departamento de Periodoncia de la Facultad de Odontología de la Universidad Hatay Mustafa Kemal, Hatay, Turquía. El protocolo de estudio fue aprobado por el Comité de Ética para el Uso de Sujetos Humanos en la Investigación de la Universidad Hatay Mustafa Kemal (Protocolo No: 2019/118). El estudio se llevó a cabo de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki y se realizó según las pautas CONSORT (Schulz, Altman y Moher, 2010). Este proyecto de estudio fue apoyado financieramente por el Coordinador de Proyectos de Investigación Científica de la Universidad Hatay Mustafa Kemal (19M051).

Las personas se incluyeron en el estudio desde diciembre de 2019 hasta agosto de 2021. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de cada participante antes del examen clínico periodontal.

Población de estudio

Cuarenta y ocho personas adultas se inscribieron en el estudio. Los participantes fueron reclutados en 2 grupos emparejados por sexo con 24 participantes en cada uno: grupos periodontalmente sanos (PH) y periodontitis (P). De acuerdo con las variables demográficas de los pacientes incluidos en el grupo P, se incluyeron los pacientes de los grupos PH.

Parámetros periodontales

Los parámetros clínicos periodontales fueron registrados por un único examinador calibrado (k = 0,95) (autor AS). Se determinó la concordancia entre examinadores para CAL. La reproducibilidad intraexaminador se determinó mediante exámenes repetidos de 10 sujetos con un intervalo de una hora. Las medidas periodontales clínicas se evaluaron usando las siguientes medidas periodontales para el diagnóstico periodontal en ambos grupos y también al primer mes, tercer mes después del tratamiento periodontal no quirúrgico en el grupo de periodontitis.

Las mediciones se realizaron utilizando una sonda periodontal Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, EE. UU.) e incluyeron la profundidad de la bolsa de sondaje (PPD), el nivel de inserción clínica (CAL), el índice de placa (PI) (Silness & Loe, 1964), gingival índice (GI) (Loe & Silness, 1963), y porcentaje de sangrado al sondaje (BOP) (Ainamo & Bay, 1975) en seis sitios por diente (mesio-bucal, bucal, disto-bucal, mesio-lingual, lingual y disto -lingual) en cada diente.

El diagnóstico de enfermedades y afecciones periodontales se realizó de acuerdo con los criterios de diagnóstico clínico y radiográfico propuestos por el Taller mundial sobre clasificación de enfermedades y afecciones periodontales y periimplantarias de 2017 (Caton et al., 2018). Se consideró que los individuos con BOP < 10% sin pérdida de inserción y pérdida ósea radiográfica tenían salud periodontal (Tonetti & Sanz, 2019). Los criterios para periodontitis incluyeron pacientes con CAL ≥ 5 mm en dos o más sitios interproximales y PPD ≥ 6 mm en uno o más sitios interproximales. En el presente estudio solo se incluyó la periodontitis en estadio III-IV (grave) (Tonetti, Greenwell y Kornman, 2018).

Intervención Periodontal

Los pacientes con periodontitis fueron tratados mediante desinfección de boca completa en una etapa. La desinfección de toda la boca incluyó procedimientos de raspado y alisado radicular de toda la boca en 24 h en dos sesiones. Cada sesión se practicó durante 60 min en dos días consecutivos. Se realizó irrigación subgingival y cepillado de lengua con gel CHX al 1% durante 1 min. Se realizaron enjuagues bucales con CHX al 0,12% durante 30 s al inicio y al final de cada sesión y dos veces al día durante 2 semanas (Quirynen et al., 1995).

Colección de muestras de GCF

Las muestras de GCF se recolectaron después de 8 horas de ayuno nocturno y una semana después de las mediciones periodontales clínicas al inicio en dos grupos y luego a las 24 h, 48 h, 14 días, 1 mes, 3 meses después del tratamiento periodontal no quirúrgico (Akalin, Baltacioglu , Alver y Karabulut, 2007). Las muestras se recolectaron del lado de los dientes con PPD ≥ 6 mm y BOP positivo en pacientes con periodontitis. Se tomaron seis muestras de GCF por participante. Se recogieron muestras de un sitio mesial y distal en cada uno de los tres dientes (incisivos, premolares y molares). La contaminación por saliva se evitó mediante el aislamiento con rollos de algodón y el secado suave al aire del área de muestreo. No se incluyeron muestras contaminadas con saliva o sangre. La placa se eliminó suavemente del área de muestreo con la cureta periodontal. Las muestras se recolectaron en 30 segundos con tiras de papel estandarizadas (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) por el método del orificio. (Rudin, Overdiek, & Rateitschak, 1970) Los volúmenes se midieron en un dispositivo de medición de líquido gingival electrónico precalibrado (Oraflow Inc., Plainview, NY)|| (Chapple, Landini, Griffiths, Patel y Ward, 1999). Los valores del dispositivo electrónico se referenciaron a una curva estándar y se convirtieron a un volumen real (µl). Todas las tiras de Periopaper se agruparon en tubos de microcentrífuga Eppendorf de plástico. Se almacenaron a -80 °C hasta el análisis bioquímico.

Todas las muestras se descongelaron y se añadieron 375 μl de solución salina tamponada con fosfato (pH: 7,00, Na2PO4 10 mM, NaCl 137 mM y KCl 2,7 mM) a los tubos eppendorf que contenían las tiras de muestra. Posteriormente, las muestras se eluyeron durante 30 minutos a temperatura ambiente y (Chapple et al., 1997) se centrifugaron a 11000 × g durante 15 min a 4 °C. Se analizó la medición de los niveles de periostina, IL-1β y FGF.

Recolección de muestras de suero

Se tomaron muestras de sangre venosa periférica de los pacientes. El suero se separó de las células por centrifugación a 2000 rpm durante 10 min, luego de lo cual se almacenó a -80°C, hasta que se realizó el análisis bioquímico.

Análisis de laboratorio

Los niveles de periostina, IL-1β y FGF se midieron mediante el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) utilizando kits disponibles comercialmente a una longitud de onda de 450 nm en ELISA Reader (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland).

Medición de los niveles de periostina en muestras de GCF

Los niveles de periostina se midieron mediante ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (N.º de catálogo del kit: E-EL-H6113). Los rangos de ensayo para la periostina fueron 3,13-200 ng/ml; sensibilidad, 1,88 ng/ml, los coeficientes de variación (CV%) intra e interensayos fueron < 10 %.

Medición de los niveles de IL-1β en muestras de GCF

Los niveles de IL-1β se midieron con ELABSCIENCE Human IL-1β (n.º de catálogo del kit: E-EL-H0149). Los rangos de ensayo para la IL-1β fueron 7,81-500 pg/ml; sensibilidad, 4,69 pg/ml, los coeficientes de variación (CV%) intra e interensayos fueron < 10 %.

Medición de los niveles de FGF en muestras de GCF

Los niveles de FGF se midieron con ELABSCIENCE Human FGF21 (n.º de catálogo del kit: E-EL-H0074). Los rangos de ensayo para el FGF fueron 31.25-2000 pg/ml; sensibilidad, 18,75 pg/ml, los coeficientes de variación (CV%) intra e interensayos fueron < 10 %.

Análisis estadístico

La normalidad de la distribución de las variables continuas se probó mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Las estadísticas descriptivas se presentaron como media y desviación estándar (media±sd) para las variables distribuidas paramétricas y mediana (rango intercuartílico) para las variables distribuidas no paramétricas.

Se utilizó la prueba de chi-cuadrado para analizar las asociaciones entre variables categóricas. La prueba t de Student para variables numéricas distribuidas normalmente y la prueba u de Mann Whitney para variables numéricas no distribuidas normalmente se realizaron para comparar 2 grupos independientes para datos numéricos. Se realizó la prueba de Freidman para diferentes puntos de tiempo con variables no paramétricas. Se realizaron pruebas de comparación múltiple de Dunn para análisis de comparación múltiple por pares post hoc.

El análisis estadístico se realizó con SPSS para Windows versión 24.0 y se aceptó como estadísticamente significativo un valor de p <0,05.