Trattamento parodontale non chirurgico e livelli di periostina

Lo studio prospettico osservazionale è stato progettato per caratterizzare i cambiamenti della periostina nel tempo dopo il trattamento parodontale non chirurgico nel siero e GCF presso il Dipartimento di Parodontologia della Facoltà di Odontoiatria dell'Università Hatay Mustafa Kemal, Hatay, Turchia. Il protocollo di studio è stato approvato dal Comitato etico per l'uso di soggetti umani nella ricerca dell'Università Hatay Mustafa Kemal (Protocollo n.: 2019/118). Lo studio è stato condotto in conformità con i principi della Dichiarazione di Helsinki e condotto secondo le linee guida CONSORT (Schulz, Altman e Moher, 2010). Questo progetto di studio è stato sostenuto finanziariamente dal coordinatore dei progetti di ricerca scientifica dell'Università Hatay Mustafa Kemal (19M051).

Gli individui sono stati inclusi nello studio da dicembre 2019 ad agosto 2021. Il consenso informato scritto è stato ottenuto da ciascun partecipante prima dell'esame clinico parodontale.

Popolazione di studio

Quarantotto individui adulti sono stati arruolati nello studio. I partecipanti sono stati reclutati in 2 gruppi abbinati per sesso con 24 partecipanti ciascuno: gruppi parodontalmente sani (PH) e parodontite (P). In accordo con le variabili demografiche dei pazienti inclusi nel gruppo P, sono stati inclusi i pazienti nei gruppi PH.

Parametri parodontali

I parametri clinici parodontali sono stati registrati da un singolo esaminatore calibrato (k = 0,95) (autore AS). L'accordo intra-esaminatore è stato determinato per CAL. La riproducibilità intra-esaminatore è stata determinata attraverso esami ripetuti di 10 soggetti con un intervallo di un'ora. Le misurazioni parodontali cliniche sono state valutate utilizzando le seguenti misurazioni parodontali per la diagnosi parodontale in entrambi i gruppi e anche al 1° mese, 3° mese dopo il trattamento parodontale non chirurgico nel gruppo parodontale.

Le misurazioni sono state eseguite utilizzando una sonda parodontale Williams (Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) e includevano profondità della tasca di sondaggio (PPD), livello di attacco clinico (CAL), indice di placca (PI) (Silness & Loe, 1964), livello gengivale indice (GI) (Loe & Silness, 1963) e percentuale di sanguinamento al sondaggio (BOP) (Ainamo & Bay, 1975) in sei siti per dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, mesio-linguale, linguale e disto -linguale) su ciascun dente.

La diagnosi delle malattie e delle condizioni parodontali è stata effettuata secondo i criteri diagnostici radiografici e clinici proposti dal World Workshop 2017 sulla classificazione delle malattie e condizioni parodontali e perimplantari (Caton et al., 2018). Gli individui con BOP < 10% senza perdita di attacco e perdita ossea radiografica sono stati considerati in salute parodontale (Tonetti & Sanz, 2019). I criteri per la parodontite includevano pazienti con CAL ≥ 5 mm in due o più siti interprossimali e PPD ≥ 6 mm in uno o più siti interprossimali. Nel presente studio è stata inclusa solo la parodontite di stadio III-IV (grave) (Tonetti, Greenwell e Kornman, 2018).

Intervento parodontale

I pazienti con parodontite sono stati trattati con disinfezione a bocca intera in una fase. La disinfezione dell'intera bocca includeva il ridimensionamento dell'intera bocca e le procedure di pianificazione delle radici entro 24 ore in due sessioni. Ogni sessione è stata praticata per 60 minuti in due giorni consecutivi. L'irrigazione sottogengivale e lo spazzolamento della lingua sono stati effettuati con gel CHX all'1% per 1 minuto. Sono stati eseguiti collutori con CHX allo 0,12% per 30 s all'inizio e alla fine di ogni sessione e due volte al giorno per 2 settimane (Quirynen et al., 1995).

Raccolta di campioni GCF

I campioni di GCF sono stati raccolti dopo 8 ore di digiuno notturno e una settimana dopo le misurazioni parodontali cliniche al basale in due gruppi e poi alla 24a, 48a ora, 14° giorno 1° mese, 3° mese dopo il trattamento parodontale non chirurgico (Akalin, Baltacioglu , Alver, & Karabulut, 2007). I campioni sono stati prelevati dal lato dei denti con PPD ≥6 mm e BOP positivi in ​​pazienti con parodontite. Sono stati prelevati sei campioni GCF per partecipante. I campioni sono stati raccolti da un sito mesiale e distale su ciascuno dei tre denti (incisivi, premolari e molari). La contaminazione della saliva è stata prevenuta isolando con rulli di cotone e asciugando delicatamente all'aria l'area di campionamento. I campioni contaminati da saliva o sangue non sono stati inclusi. La placca è stata delicatamente rimossa dall'area di campionamento mediante la curette parodontale. I campioni sono stati raccolti entro 30 secondi con strisce di carta standardizzate (Periopaper; Oraflow Inc., Plainview, NY) con il metodo dell'orifizio. (Rudin, Overdiek, & Rateitschak, 1970) I volumi sono stati misurati su un dispositivo elettronico precalibrato per la misurazione del fluido gengivale (Oraflow Inc., Plainview, NY)|| (Chapple, Landini, Griffiths, Patel e Ward, 1999). I valori del dispositivo elettronico sono stati riferiti a una curva standard e convertiti in un volume effettivo (µl). Tutte le strisce Periopaper sono state raggruppate in provette per microcentrifuga Eppendorf in plastica. Sono stati conservati a -80 °C fino all'analisi biochimica.

Tutti i campioni sono stati scongelati e 375 μl di soluzione salina tamponata con fosfato (pH: 7,00, 10 mM Na2PO4, 137 mM NaCl e 2,7 mM KCl) sono stati aggiunti nelle provette eppendorf contenenti le strisce di campioni. Successivamente, i campioni sono stati eluiti per 30 minuti a temperatura ambiente e (Chapple et al., 1997) centrifugati a 11000×g per 15 minuti a 4 °C. È stata analizzata la misurazione dei livelli di periostina, IL-1β e FGF.

Raccolta di campioni di siero

Ai pazienti sono stati prelevati campioni di sangue venoso periferico. Il siero è stato separato dalle cellule mediante centrifugazione a 2000 rpm per 10 min, dopo di che è stato conservato a -80°C, fino all'esecuzione dell'analisi biochimica.

Analisi di laboratorio

I livelli di periostina, IL-1β e FGF sono stati misurati mediante il saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) utilizzando kit disponibili in commercio a una lunghezza d'onda di 450 nm in ELISA Reader (Thermo Fisher Scientific Multiscan Go-Finland).

Misurazione dei livelli di periostina nei campioni GCF

I livelli di periostina sono stati misurati mediante ELABSCIENCE Human POSTN/OSF-2 (Kit N. cat.: E-EL-H6113). Gli intervalli di dosaggio per la periostina erano 3,13-200 ng/ml; sensibilità, 1,88 ng/ml, i coefficienti di varianza intra e inter-analisi (CV%) erano < 10%.

Misurazione dei livelli di IL-1β nei campioni GCF

I livelli di IL-1β sono stati misurati mediante ELABSCIENCE Human IL-1β (Kit N. cat.: E-EL-H0149). Gli intervalli di dosaggio per IL-1β erano 7,81-500 pg/ml; sensibilità, 4,69 pg/ml, i coefficienti di varianza intra e inter-analisi (CV%) erano < 10%.

Misurazione dei livelli di FGF nei campioni GCF

I livelli di FGF sono stati misurati da ELABSCIENCE Human FGF21 (Kit N. cat.: E-EL-H0074). Gli intervalli di dosaggio per l'FGF erano 31,25-2000 pg/ml; sensibilità, 18,75 pg/ml, i coefficienti di varianza intra e inter-analisi (CV%) erano < 10%.

Analisi statistica

La normalità della distribuzione delle variabili continue è stata verificata mediante il test di Shapiro-Wilk. Le statistiche descrittive sono state presentate come media e deviazione standard (media ± sd) per le variabili distribuite parametriche e mediana (intervallo interquartile) per le variabili distribuite non parametriche.

Il test chi-quadrato è stato utilizzato per analizzare le associazioni tra variabili categoriali. Il test t di Student per variabili numeriche normalmente distribuite e il test u di Mann Whitney per variabili numeriche non distribuite normalmente sono stati eseguiti per confrontare 2 gruppi indipendenti per dati numerici. Il test di Freidman è stato eseguito per diversi punti temporali con variabili non parametriche. I test di confronto multiplo di Dunn sono stati eseguiti per analisi di confronto multiplo a coppie post hoc.

L'analisi statistica è stata eseguita con SPSS per Windows versione 24.0 e il valore P <0,05 è stato accettato come statisticamente significativo.