Vesikulogeneze u dětí s nedostatkem GH (VESCIGHTP) (VESCIGHTP)

Metody:

V Regionálním referenčním centru pro poruchy růstu, Istituto Auxologico Italiano, IRCCS, Milán, bude přijato 10 dětí obou pohlaví postižených izolovaným nedostatkem růstového hormonu podle kritérií stanovených v poznámce AIFA 39 pro tuto patologii (nízký vzrůst: ≤ - 3 SD nebo ≤ -2 SD a rychlost růstu/rok ≤ -1,0 SD pro věk a pohlaví hodnocené s odstupem alespoň 6 měsíců a maximální GH ve dvou různých stimulačních farmakologických testech < 8 ng/ml). Vylučovacím kritériem z této studie (a z léčby rhGH) bude přítomnost organických patologií na úrovni hypotalamus-hypofýza (posouzeno pomocí MRI mozku).

V bazálních stavech (předléčení) přistoupíme ke sběru klinických a antropometrických/auxometrických dat, včetně vyhodnocení tělesného složení s bioimpedanční analýzou. Stejné zpracování bude opakováno při následném 6měsíčním sledování (viz níže).

Každý subjekt podstoupí hormonální substituční terapii s rhGH v dávce 0,025-0,035 mg/kg tělesné hmotnosti za den (nebo 0,7-1,0 mg/m2 tělesného povrchu za den).

Při hladovění (alespoň 12 hodin) se vzorky krve odebírají v T0 (tj. před zahájením hormonální substituční terapie rhGH) a v T6 (tj. po 6 měsících rhGH, přibližně 10-12 hodin po podání dávky z předchozího dne).

Ve vzorcích odebraných v T0 a T6 budou určeny rozměrové a derivační profily EV. Budou identifikovány markery pro následující buněčné subtypy: endotel (aktivovaný a neaktivovaný), monocyty, neutrofily, krevní destičky, svaly, kosti a tuková tkáň.

V bazálních stavech (T0) a v T6 budou pacientům odebrány vzorky pro stanovení následujících parametrů: kompletní krevní obraz + vzorec, glykémie, inzulín, glykovaný Hb, triglyceridy, celkový cholesterol, LDL, HDL, hsPCR, IGF-1 osteokalcin, ICTP a PIIIINP.

Kvantitativní údaje budou vyjádřeny jako průměr ± SD nebo jako medián s interkvartilním rozmezím (Q1-Q3), podle potřeby. Kategorická data budou prezentována jako frekvence a procenta, zatímco spojité proměnné budou testovány na normalitu a linearitu. Je-li to vhodné, provede se logová transformace dat. Párový Studentův t-test (nebo jiný neparametrický test) bude použit k porovnání demografických, klinických a biochemických charakteristik mezi stejnými subjekty v T0 vs. T6. EV budou dále rozděleny podle jejich velikosti (exosomy, mikrovezikuly a celkové EV) a jejich buněčného původu identifikovaného specifickými markery (např. CD14+, CD61+, CD62E+, CD105+, SCGA+, FABP+ atd.). K vyhodnocení asociace mezi EV (jako Δ% mezi T0 a T6 pro dimenzionální a také derivační profil), hladinami cirkulujícího IGF-1 (jako Δ% mezi T0 a T6) a rychlostí růstu bude použita vícenásobná lineární regresní analýza. (T0 až T6). Kromě toho bude k posouzení změny EV vyvolané rhGH (T0 vs. T6) použit párový Studentův t-test. Test bude aplikován na všechny EV populace studované s velikostním profilem a pro všechny vezikulární markery studované s derivačním profilem. Alternativně bude použit neparametrický test. Bude uvažována p-hodnota < 0,05.