Mikrofluidní čip vs centrifugace s gradientem hustoty na míře euploidie předimplantačního genetického testování

Cílem studie je prozkoumat léčbu párů podstupujících mimotělní oplodnění (IVF). Způsobilé páry budou přijaty do studie po poskytnutí informovaného písemného souhlasu po konzultaci. Protokol IVF zahrnuje různé kroky. Ženy podstoupí preimplantační genetické vyšetření (PGT), jak je klinicky indikováno. Ovariální stimulace bude prováděna pomocí gonadotropinových injekcí a bude prováděno pravidelné ultrazvukové sledování pro sledování růstu folikulů. Aby se zabránilo předčasnému nárůstu LH, bude podávána stimulace vaječníků aktivovaná progestinem nebo antagonista GnRH. Jakmile alespoň tři folikuly dosáhnou velikosti nad 17 mm, podá se spouštěcí injekce buď lidského choriového gonadotropinu nebo agonisty GnRH, aby se vyvolalo konečné zrání. Odběr oocytů bude proveden 36 hodin po spuštění pod transvaginálním ultrazvukovým vedením.

Rekrutované ženy budou náhodně rozděleny do jedné ze dvou skupin: skupina s mikrofluidními čipy nebo skupina s hustotním gradientem centrifugace. Pro zachování integrity studie bude zajištěna randomizace a zaslepení. Pouze laboratorní personál zapojený do přípravy spermatu bude vědět o přidělení skupiny, zatímco ženy a lékaři budou zaslepeni vůči léčebným skupinám.

Vzorky spermatu budou odebrány masturbací v den odběru oocytů po období 2-7 dnů sexuální abstinence. Vzorky spermatu podstoupí hodnocení podle pokynů WHO, včetně objemu spermatu, koncentrace spermií a procenta pohyblivých spermií. Poškození DNA spermií bude hodnoceno pomocí testu alkalické jednobuněčné gelové elektroforézy (Comet). Rozsah poškození DNA u spermií bude zkoumán pomocí specifických parametrů.

Příprava spermií bude provedena na základě randomizačního seznamu. Ve skupině mikrofluidních čipů bude použito zařízení pro separaci spermií a připravený vzorek bude odebrán do zkumavky. Ve skupině s centrifugací v hustotním gradientu bude příprava spermatu dokončena pomocí metody diskontinuální centrifugace v hustotním gradientu a výsledná sperma se promyje a resuspenduje.

Oocyty budou oplodněny intracytoplazmatickou injekcí spermie a normální oplodnění bude potvrzeno přítomností dvou pronukleů. Z blastocyst bude odebráno několik buněk pro komplexní analýzu chromozomů. Bude provedena kryokonzervace všech blastocyst a pouze euploidní blastocysty bez aneuploidií budou nahrazeny v následujících cyklech přenosu zmrazených embryí.

Zmrazený embryonální transfer (FET) bude proveden v následných přirozených nebo hormonálních substitučních cyklech v závislosti na pravidelnosti menstruačního cyklu ženy.

Výsledky těhotenství budou sledovány pomocí těhotenských testů moči a transvaginálních ultrazvuků. Pokud je těhotenský test pozitivní, budou provedeny další ultrazvuky k potvrzení životaschopnosti plodu a počtu plodů. Údaje o těhotenství a porodu budou načteny po porodu a budou zaznamenány informace o výsledcích těhotenství, počtu narozených dětí, porodní hmotnosti a porodnických komplikacích.

Cílem studie je posoudit účinnost dvou různých metod přípravy spermií a jejich dopad na výsledky IVF, včetně míry těhotenství a porodnických komplikací.