Chip microfluidico e centrifugazione in gradiente di densità sul tasso di euploidia dei test genetici preimpianto

Lo studio si propone di indagare il trattamento delle coppie sottoposte a fecondazione in vitro (IVF). Le coppie idonee verranno reclutate per lo studio dopo aver fornito il consenso informato scritto a seguito della consulenza. Il protocollo IVF prevede diverse fasi. Le donne saranno sottoposte a test genetici preimpianto (PGT) come clinicamente indicato. La stimolazione ovarica verrà effettuata utilizzando iniezioni di gonadotropina e verrà condotto un regolare monitoraggio ecografico per monitorare la crescita dei follicoli. Per prevenire un picco prematuro di LH, verrà somministrata stimolazione ovarica innescata da progestinici o un antagonista del GnRH. Una volta che almeno tre follicoli raggiungono una dimensione superiore a 17 mm, verrà somministrata un'iniezione trigger di gonadotropina corionica umana o di un agonista del GnRH per indurre la maturazione finale. Il prelievo degli ovociti verrà effettuato 36 ore dopo il trigger sotto guida ecografica transvaginale.

Le donne reclutate verranno assegnate in modo casuale a uno dei due gruppi: il gruppo del chip microfluidico o il gruppo della centrifugazione in gradiente di densità. La randomizzazione e l'accecamento saranno garantiti per mantenere l'integrità dello studio. Solo il personale di laboratorio coinvolto nella preparazione dello sperma sarà a conoscenza dell'assegnazione del gruppo, mentre le donne e i medici non saranno in grado di vedere i gruppi di trattamento.

I campioni di sperma verranno raccolti mediante masturbazione il giorno del prelievo degli ovociti, dopo un periodo di 2-7 giorni di astinenza sessuale. I campioni di sperma saranno sottoposti a valutazione secondo le linee guida dell'OMS, inclusi volume di sperma, concentrazione di sperma e percentuale di spermatozoi mobili. Il danno al DNA spermatico sarà valutato utilizzando un test di elettroforesi su gel alcalino unicellulare (Comet). L'entità del danno al DNA negli spermatozoi sarà esaminata utilizzando parametri specifici.

La preparazione dello sperma verrà eseguita in base alla lista di randomizzazione. Nel gruppo di chip microfluidici verrà utilizzato il dispositivo di separazione dello sperma e il campione preparato verrà raccolto in una provetta. Nel gruppo di centrifugazione in gradiente di densità, la preparazione dello sperma sarà completata utilizzando un metodo di centrifugazione in gradiente di densità discontinuo e il pellet di sperma risultante sarà lavato e risospeso.

Gli ovociti verranno fecondati mediante iniezione intracitoplasmatica di spermatozoi e la normale fecondazione sarà confermata dalla presenza di due pronuclei. Alcune cellule verranno prelevate dalle blastocisti per l'analisi cromosomica completa. Verrà effettuata la crioconservazione di tutte le blastocisti e solo le blastocisti euploidi senza aneuploidie verranno sostituite nei successivi cicli di trasferimento di embrioni congelati.

Il trasferimento di embrioni congelati (FET) verrà effettuato in cicli successivi di sostituzione naturale o ormonale, a seconda della regolarità del ciclo mestruale della donna.

Gli esiti della gravidanza saranno monitorati attraverso test di gravidanza sulle urine ed ecografie transvaginali. Se il test di gravidanza risulta positivo verranno effettuate ulteriori ecografie per confermare la vitalità fetale e il numero di feti. I dati sulla gravidanza e sul parto verranno recuperati dopo il parto e verranno registrate informazioni sugli esiti della gravidanza, sul numero di bambini nati, sul peso alla nascita e sulle complicanze ostetriche.

Lo studio mira a valutare l’efficacia dei due diversi metodi di preparazione dello sperma e il loro impatto sui risultati della fecondazione in vitro, compresi i tassi di gravidanza e le complicanze ostetriche.