Centrifugação de chip microfluídico vs gradiente de densidade na taxa de euploidia de testes genéticos pré-implantação

O estudo tem como objetivo investigar o tratamento de casais submetidos à fertilização in vitro (FIV). Os casais elegíveis serão recrutados para o estudo após fornecerem consentimento informado por escrito após aconselhamento. O protocolo de fertilização in vitro envolve várias etapas. As mulheres serão submetidas a testes genéticos pré-implantacionais (PGT) conforme indicação clínica. A estimulação ovariana será realizada com injeções de gonadotrofina e monitoramento ultrassonográfico regular será realizado para rastrear o crescimento dos folículos. Para evitar um aumento prematuro de LH, será administrada estimulação ovariana preparada com progestina ou um antagonista de GnRH. Assim que pelo menos três folículos atingirem um tamanho superior a 17 mm, uma injeção desencadeadora de gonadotrofina coriônica humana ou de um agonista de GnRH será administrada para induzir a maturação final. A recuperação de oócitos será realizada 36 horas após o gatilho sob orientação de ultrassom transvaginal.

As mulheres recrutadas serão designadas aleatoriamente a um de dois grupos: o grupo de chips microfluídicos ou o grupo de centrifugação em gradiente de densidade. A randomização e o cegamento serão garantidos para manter a integridade do estudo. Apenas a equipe do laboratório envolvida na preparação do esperma estará ciente da atribuição do grupo, enquanto as mulheres e os médicos não terão conhecimento dos grupos de tratamento.

As amostras de sêmen serão coletadas por masturbação no dia da retirada do oócito, após um período de 2 a 7 dias de abstinência sexual. As amostras de sêmen serão avaliadas de acordo com as diretrizes da OMS, incluindo volume de sêmen, concentração de espermatozoides e porcentagem de espermatozóides móveis. Os danos ao DNA do esperma serão avaliados usando um ensaio de eletroforese em gel unicelular alcalino (Comet). A extensão do dano ao DNA nos espermatozóides será examinada usando parâmetros específicos.

A preparação do esperma será realizada com base na lista de randomização. No grupo do chip microfluídico, será utilizado o Dispositivo de Separação de Esperma, e a amostra preparada será coletada em tubo de ensaio. No grupo de centrifugação em gradiente de densidade, a preparação do esperma será concluída usando um método de centrifugação em gradiente de densidade descontínuo, e o sedimento de esperma resultante será lavado e ressuspenso.

Os oócitos serão fertilizados por meio de injeção intracitoplasmática de espermatozoides, e a fertilização normal será confirmada pela presença de dois pró-núcleos. Algumas células serão retiradas dos blastocistos para análise cromossômica abrangente. A criopreservação de todos os blastocistos será feita, e apenas os blastocistos euplóides sem aneuploidias serão substituídos em ciclos subsequentes de transferência de embriões congelados.

A transferência de embriões congelados (FET) será realizada em ciclos subsequentes de reposição natural ou hormonal, dependendo da regularidade do ciclo menstrual da mulher.

Os resultados da gravidez serão monitorados por meio de testes de urina para gravidez e ultrassonografias transvaginais. Se o teste de gravidez for positivo, serão feitas novas ultrassonografias para confirmar a viabilidade fetal e o número de fetos. Os dados da gravidez e do parto serão recuperados após o parto, e informações sobre os resultados da gravidez, número de bebês nascidos, peso ao nascer e complicações obstétricas serão registradas.

O estudo visa avaliar a eficácia dos dois métodos diferentes de preparação de esperma e seu impacto nos resultados da fertilização in vitro, incluindo taxas de gravidez e complicações obstétricas.