Hodnocení úrovní slinných premaligních a maligních lézí orálního paxilinu

Cílem této studie je: srovnání hladin paxilin ve slinách v orálních premaligních lézích a OSCC s jeho hladinami u zdravých jedinců.

Subjekty a metody Do této studie bylo přijato 45 účastníků ve věku 30 až 70 let. Byli registrováni v ambulanci orálního lékařství a parodontologického oddělení Fakulty zubního lékařství Káhirské univerzity. Byly přiděleny tři soubory subjektů: patnáct pacientů s premaligními lézemi, patnáct pacientů s OSCC a patnáct systémově zdravých kontrolních subjektů. U každého jednotlivce byla získána kompletní anamnéza pomocí upraveného dotazníku Cornell Medical Index. Po obdržení vysvětlení ohledně rozsahu dotazu každý účastník vyplnil formulář informovaného souhlasu.

Pacienti s OSCC byli klinicky diagnostikováni a bioptické vzorky z lézí byly odebrány na histologii k potvrzení diagnózy.

Odběr vzorků slin:

Nestimulované vzorky slin byly odebrány jednou před operací před jakýmkoli zásahem. Všichni účastníci byli požádáni, aby se zdrželi pití, jídla nebo žvýkání žvýkačky po dobu nejméně 60 minut před odběrem vzorků. Vzorky byly odebrány tak, že byl pacient požádán, aby nejprve spolkl, pak na 5 minut předklonil hlavu a vyplivl celé sliny do 50ml sterilních centrifugačních zkumavek. Po sestavení byly všechny vzorky okamžitě skladovány při -20 ºC až do testování.

Kvantifikace hladiny lidského paxilinu ve slinách:

Pacientům a kontrolám byly odebrány sliny. Po centrifugaci byl supernatant separován pro detekci Paxilin pomocí techniky ELISA poskytnuté Cloud Clone Corp, Houston, USA, katalogové číslo: E-01184hu. Mikrotitrační destička této soupravy byla předem potažena protilátkou specifickou pro paxillin. Na příslušné jamky mikrotitrační destičky se pak působí protilátkou konjugovanou s biotinem specifickou pro paxillin. Poté se přidá avidin konjugovaný s křenovou peroxidázou (HRP) a inkubuje se v každé jamce mikrodestičky. Po přidání roztoku substrátu TMB změní barvu pouze jamky obsahující paxillin, protilátku konjugovanou s biotinem a Avidin konjugovaný s enzymem. Reakce enzym-substrát se zastaví přidáním roztoku kyseliny sírové a změna barvy se měří spektrofotometricky při 450 nm 10 nm. Optická hustota (OD) vzorků se poté porovná s referenční křivkou, aby se stanovila jejich koncentrace paxilin.

Statistická analýza:

Kategorická data byla uvedena jako četnost a procentuální hodnoty a k jejich posouzení byl použit Fisherův exaktní test. Pro zobrazení číselných údajů byla použita střední hodnota a standardní odchylka (SD). Ke stanovení jejich normálnosti byl použit Shapiro-Wilkův test. Jednocestný test ANOVA následovaný Tukeyho post hoc testem byl použit k analýze normálně distribuovaných dat (věk a hladiny Paxilin (ng/ml)). Pro stanovení diagnostické přesnosti byla provedena analýza ROC křivky. Pro srovnání křivek ROC byl použit z-test. Hladina významnosti byla nastavena na p<0,05 pro všechny testy. Pro statistickou analýzu byl použit software pro statistickou analýzu R verze 4.3.1 pro Windows [18].