Ocena poziomu śliny Paxillin Oral Zmiany przednowotworowe i złośliwe

Celem pracy było porównanie stężenia paksyliny w ślinie w zmianach przednowotworowych jamy ustnej i OSCC z jej stężeniem u osób zdrowych.

Uczestnicy i metody Do badania zakwalifikowano czterdziestu pięciu uczestników w wieku od 30 do 70 lat. Byli zarejestrowani w Przychodni Kliniki Medycyny Jamy Ustnej i Periodontologii Wydziału Stomatologii Uniwersytetu w Kairze. Przydzielono trzy grupy pacjentów: piętnastu pacjentów ze zmianami przednowotworowymi, piętnastu pacjentów z OSCC i piętnastu ogólnie zdrowych osób kontrolnych. Dla każdej osoby uzyskano pełną historię medyczną za pomocą zmodyfikowanego kwestionariusza Cornell Medical Index. Po otrzymaniu wyjaśnień dotyczących zakresu zapytania każdy uczestnik wypełnił formularz świadomej zgody.

Pacjenci z OSCC zostali zdiagnozowani klinicznie, a wycinki ze zmian pobrano do badania histologicznego w celu potwierdzenia diagnozy.

Pobieranie próbek śliny:

Niestymulowane próbki śliny pobierano raz przed operacją, przed jakąkolwiek interwencją. Wszystkich uczestników poproszono o powstrzymanie się od picia, jedzenia i żucia gumy przez co najmniej 60 minut przed pobraniem próbki. Próbki pobierano prosząc pacjenta, aby najpierw przełknął ślinę, następnie pochylił głowę do przodu na 5 minut i wypluł całą ślinę do sterylnych probówek wirówkowych o pojemności 50 ml. Po złożeniu wszystkie próbki natychmiast przechowywano w temperaturze -20°C do czasu przeprowadzenia badania.

Ilościowe oznaczenie poziomu śliny ludzkiej paksyliny:

Od pacjentów i kontroli pobrano ślinę. Po odwirowaniu supernatant oddzielono w celu wykrycia Paxillin przy użyciu techniki ELISA dostarczonej przez Cloud Clone Corp, Houston, USA, numer katalogowy: E-01184hu. Płytka do mikromiareczkowania tego zestawu została wstępnie pokryta przeciwciałem specyficznym dla paksyliny. Następnie odpowiednie studzienki płytki do mikromiareczkowania traktuje się przeciwciałem skoniugowanym z biotyną, specyficznym dla paksyliny. Następnie dodaje się awidynę sprzężoną z peroksydazą chrzanową (HRP) i inkubuje w każdym dołku mikropłytki. Po dodaniu roztworu substratu TMB kolor zmienią jedynie dołki zawierające paksylinę, przeciwciało skoniugowane z biotyną i awidyna skoniugowana z enzymem. Reakcję enzym-substrat zatrzymuje się przez dodanie roztworu kwasu siarkowego, a zmianę koloru mierzy się spektrofotometrycznie przy 450 nm 10 nm. Następnie porównuje się gęstość optyczną (OD) próbek z krzywą odniesienia w celu określenia stężenia paksyliny.

Analiza statystyczna:

Dane kategoryczne podano w postaci częstotliwości i wartości procentowych, a do ich oceny wykorzystano dokładny test Fishera. Do przedstawienia danych liczbowych wykorzystano średnie i odchylenia standardowe (SD). Do określenia ich normalności wykorzystano test Shapiro-Wilka. Do analizy danych o rozkładzie normalnym (wiek i poziomy Paxillin (ng/ml) zastosowano jednoczynnikowy test ANOVA, a następnie test post hoc Tukeya). Aby określić dokładność diagnostyczną, przeprowadzono analizę krzywej ROC. Do porównania krzywych ROC zastosowano test z. Dla wszystkich testów przyjęto poziom istotności p<0,05. Do analizy statystycznej wykorzystano program do analizy statystycznej R w wersji 4.3.1 dla systemu Windows [18].