Evaluering af niveauerne af spytpaxillin orale præmaligne og ondartede læsioner

Formålet med denne undersøgelse er: sammenligning af spytpaxillinniveauer i orale præmaligne læsioner og OSCC med niveauerne hos raske forsøgspersoner.

Emner og metoder Femogfyrre deltagere mellem 30 og 70 år blev accepteret til denne undersøgelse. De blev registreret i ambulatoriets klinik i Oral Medicine og Parodontologi afdelingen i Det Tandlæge Fakultet, Cairo universitet. Tre sæt forsøgspersoner blev tildelt: femten patienter med præmaligne læsioner, femten patienter med OSCC og femten systemisk sunde kontrolpersoner. En komplet sygehistorie blev opnået for hvert individ ved hjælp af et modificeret Cornell Medical Index-spørgeskema. Efter at have modtaget afklaring vedrørende omfanget af forespørgslen, udfyldte hver deltager en informeret samtykkeerklæring.

Patienter med OSCC blev klinisk diagnosticeret, og biopsiprøver fra læsionerne blev taget til histologi for at bekræfte diagnosen.

Indsamling af spytprøver:

Ustimulerede spytprøver blev indsamlet én gang præoperativt før enhver intervention. Alle deltagere blev bedt om at afstå fra at drikke, spise eller tygge tyggegummi i mindst 60 minutter før prøvetagning. Prøver blev indsamlet ved at bede patienten om at synke først, derefter læne hovedet fremad i 5 minutter og spytte hele spyttet i 50 ml sterile centrifugerør. Efter at være blevet samlet, blev alle prøver straks opbevaret ved -20 ºC, indtil de blev testet.

Kvantificering af humant Paxillin-spytniveau:

Spyt blev opsamlet fra patienter og kontroller. Efter centrifugering blev supernatanten adskilt til påvisning af Paxillin ved anvendelse af ELISA-teknikken leveret af Cloud Clone Corp, Houston, USA, katalognummer: E-01184hu. Dette kits mikrotiterplade er blevet præcoatet med et paxillin-specifikt antistof. De relevante mikrotiterpladebrønde behandles derefter med et biotin-konjugeret antistof specifikt for paxillin. Derefter tilsættes Avidin konjugeret til Peberrodsperoxidase (HRP) og inkuberes i hver mikropladebrønd. Efter tilsætning af TMB-substratopløsningen vil kun brøndene, der indeholder paxillin, biotin-konjugeret antistof og enzym-konjugeret Avidin, ændre farve. Enzym-substratreaktionen stoppes ved at tilsætte en opløsning af svovlsyre, og farveændringen måles spektrofotometrisk ved 450nm 10nm. Prøvernes optiske densitet (OD) sammenlignes derefter med referencekurven for at bestemme deres paxillinkoncentration.

Statistisk analyse:

Kategoriske data blev angivet som frekvens- og procentværdier, og Fishers eksakte test blev brugt til at vurdere dem. Gennemsnits- og standardafvigelsesnumre (SD) blev brugt til at afbilde numeriske data. Shapiro-Wilk-testen blev brugt til at bestemme deres normalitet. En envejs ANOVA test efterfulgt af Tukeys post hoc test blev brugt til at analysere normalfordelte data (alder og Paxillin (ng/ml) niveauer). ROC-kurveanalyse blev udført for at bestemme diagnostisk nøjagtighed. En z-test blev brugt til at sammenligne ROC-kurver. Signifikansniveauet blev sat til p<0,05 for alle tests. R statistisk analysesoftware version 4.3.1 til Windows blev brugt til den statistiske analyse [18].