Syljen paxillin-suun premalignien ja pahanlaatuisten leesioiden tason arviointi

Tämän tutkimuksen tavoitteena on: verrata syljen paksilliinitasoja suun premaligneissa leesioissa ja OSCC:tä sen tasoihin terveillä koehenkilöillä.

Koehenkilöt ja menetelmät Tähän tutkimukseen hyväksyttiin 45 30–70-vuotiasta osallistujaa. Heidät rekisteröitiin Kairon yliopiston Hammaslääketieteen tiedekunnan suu- ja parodontologian laitoksen poliklinikalle. Kolme koeryhmää jaettiin: viisitoista potilasta, joilla oli esipahanlaatuisia vaurioita, viisitoista potilasta, joilla oli OSCC, ja viisitoista systeemisesti tervettä kontrollihenkilöä. Jokaisesta yksilöstä hankittiin täydellinen sairaushistoria käyttämällä muunnettua Cornell Medical Index -kyselylomaketta. Saatuaan selvityksen kyselyn laajuudesta jokainen osallistuja täytti tietoisen suostumuslomakkeen.

Potilaat, joilla oli OSCC, diagnosoitiin kliinisesti, ja leesioista otettiin koepalanäytteet histologiaa varten diagnoosin vahvistamiseksi.

Sylkinäytteiden kokoelma:

Stimuloimattomat sylkinäytteet otettiin kerran ennen leikkausta ennen interventiota. Kaikkia osallistujia pyydettiin pidättäytymään juomasta, syömästä tai pureskelemasta purukumia vähintään 60 minuuttia ennen näytteenottoa. Näytteet kerättiin pyytämällä potilasta nielemään ensin, kallistamaan päätään eteenpäin 5 minuutin ajan ja sylkemään koko sylki 50 ml:n steriileihin sentrifugiputkiin. Kokoamisen jälkeen kaikki näytteet säilytettiin välittömästi -20 ºC:ssa testaukseen asti.

Ihmisen paxillin-sylkitason kvantifiointi:

Potilailta ja kontrolleilta kerättiin sylkeä. Sentrifugoinnin jälkeen supernatantti erotettiin paxillinin havaitsemiseksi käyttämällä ELISA-tekniikkaa, jonka tarjoaa Cloud Clone Corp, Houston, USA, luettelonumero: E-01184hu. Tämän sarjan mikrotiitterilevy on esipäällystetty paksilliinispesifisellä vasta-aineella. Asianmukaiset mikrotiitterilevyn kuopat käsitellään sitten paksilliinille spesifisellä biotiiniin konjugoidulla vasta-aineella. Sitten lisätään piparjuuriperoksidaasiin (HRP) konjugoitua avidiinia ja inkuboidaan kussakin mikrolevyssä. TMB-substraattiliuoksen lisäämisen jälkeen vain paxilliinia, biotiinilla konjugoitua vasta-ainetta ja entsyymikonjugoitua avidiinia sisältävät kuopat vaihtavat väriä. Entsyymi-substraattireaktio pysäytetään lisäämällä rikkihappoliuosta ja värinmuutos mitataan spektrofotometrisesti aallonpituudella 450 nm 10 nm. Näytteiden optista tiheyttä (OD) verrataan sitten vertailukäyrään niiden paksilliinipitoisuuden määrittämiseksi.

Tilastollinen analyysi:

Kategoriset tiedot annettiin frekvenssi- ja prosenttiarvoina, ja niiden arvioimiseen käytettiin Fisherin tarkkaa testiä. Numeeristen tietojen kuvaamiseen käytettiin keskimääräisiä ja keskihajonnan (SD) lukuja. Shapiro-Wilkin testiä käytettiin niiden normaaliuden määrittämiseen. Yksisuuntaista ANOVA-testiä, jota seurasi Tukeyn post hoc -testi, käytettiin analysoimaan normaalisti jakautuneita tietoja (ikä ja Paxillin (ng/ml) -tasot). ROC-käyräanalyysi tehtiin diagnostisen tarkkuuden määrittämiseksi. ROC-käyrien vertaamiseen käytettiin z-testiä. Kaikkien testien merkitsevyystasoksi asetettiin p<0,05. Tilastolliseen analyysiin käytettiin R-tilastoanalyysiohjelmiston versiota 4.3.1 for Windows [18].