Avaliação dos níveis de lesões orais pré-malignas e malignas de paxilina salivar

O objetivo deste estudo é: comparar os níveis de paxilina salivar em lesões pré-malignas orais e CECO com seus níveis em indivíduos saudáveis.

Sujeitos e Métodos Quarenta e cinco participantes com idades entre 30 e 70 anos foram aceitos para este estudo. Eles foram cadastrados no ambulatório do departamento de Medicina Oral e Periodontia da Faculdade de Odontologia da Universidade do Cairo. Três conjuntos de indivíduos foram designados: quinze pacientes com lesões pré-malignas, quinze pacientes com CECO e quinze indivíduos controle sistemicamente saudáveis. Um histórico médico completo foi obtido para cada indivíduo usando um questionário modificado do Cornell Medical Index. Ao receber esclarecimentos sobre o escopo da investigação, cada participante preencheu um termo de consentimento livre e esclarecido.

Os pacientes com CECO foram diagnosticados clinicamente e amostras de biópsia das lesões foram coletadas para histologia para confirmar o diagnóstico.

Coleta de amostras de saliva:

Amostras salivares não estimuladas foram coletadas uma vez no pré-operatório, antes de qualquer intervenção. Todos os participantes foram solicitados a abster-se de beber, comer ou mascar chiclete por pelo menos 60 minutos antes da amostragem. As amostras foram coletadas solicitando-se ao paciente que engolisse primeiro, depois inclinasse a cabeça para frente por 5 minutos e cuspisse toda a saliva em tubos de centrífuga estéreis de 50 ml. Depois de montados, todos os corpos de prova foram imediatamente armazenados a -20 ºC até serem testados.

Quantificação do nível salivar de Paxilina Humana:

A saliva foi coletada de pacientes e controles. Após centrifugação, o sobrenadante foi separado para detecção de Paxilina utilizando a técnica ELISA fornecida pela Cloud Clone Corp, Houston, EUA, Número de Catálogo: E-01184hu. A placa de microtitulação deste kit foi pré-revestida com um anticorpo específico para paxilina. Os poços relevantes da placa de microtitulação são então tratados com um anticorpo conjugado com biotina específico para paxilina. Em seguida, a Avidina conjugada com Peroxidase de Rábano Forte (HRP) é adicionada e incubada em cada poço da microplaca. Depois de adicionar a solução de substrato TMB, apenas os poços contendo paxilina, anticorpo conjugado com biotina e Avidina conjugada com enzima mudarão de cor. A reação enzima-substrato é interrompida pela adição de uma solução de ácido sulfúrico, e a mudança de cor é medida espectrofotometricamente a 450 nm 10 nm. A densidade óptica (DO) das amostras é então comparada com a curva de referência para determinar sua concentração de paxilina.

Análise estatística:

Os dados categóricos foram apresentados como frequência e valores percentuais, e o teste exato de Fisher foi utilizado para avaliá-los. Números de média e desvio padrão (DP) foram usados ​​para representar dados numéricos. O teste de Shapiro-Wilk foi utilizado para determinar sua normalidade. Um teste ANOVA unidirecional seguido pelo teste post hoc de Tukey foi utilizado para analisar dados normalmente distribuídos (idade e níveis de Paxilina (ng/mL)). A análise da curva ROC foi feita para determinar a acurácia diagnóstica. Um teste z foi utilizado para comparar as curvas ROC. O nível de significância foi estabelecido em p<0,05 para todos os testes. O software de análise estatística R versão 4.3.1 para Windows foi utilizado para a análise estatística [18].