Valutazione dei livelli delle lesioni precancerose e maligne della paxillina salivare orale

Lo scopo di questo studio è: confrontare i livelli di paxillina salivare nelle lesioni precancerose orali e OSCC con i suoi livelli in soggetti sani.

Soggetti e metodi Per questo studio sono stati accettati quarantacinque partecipanti di età compresa tra 30 e 70 anni. Sono stati registrati presso l'ambulatorio del dipartimento di Medicina Orale e Parodontologia della Facoltà di Odontoiatria dell'Università del Cairo. Sono stati assegnati tre gruppi di soggetti: quindici pazienti con lesioni precancerose, quindici pazienti con OSCC e quindici soggetti di controllo sistemicamente sani. Per ciascun individuo è stata ottenuta un'anamnesi medica completa utilizzando un questionario Cornell Medical Index modificato. Dopo aver ricevuto chiarimenti sull'ambito dell'indagine, ciascun partecipante ha compilato un modulo di consenso informato.

Ai pazienti con OSCC è stata diagnosticata clinicamente e sono stati prelevati campioni bioptici dalle lesioni per l'esame istologico per confermare la diagnosi.

Raccolta di campioni di saliva:

Campioni salivari non stimolati sono stati raccolti una volta prima dell'intervento prima di qualsiasi intervento. A tutti i partecipanti è stato chiesto di astenersi dal bere, mangiare o masticare gomme per almeno 60 minuti prima del campionamento. I campioni sono stati raccolti chiedendo al paziente di deglutire prima, quindi inclinare la testa in avanti per 5 minuti e sputare l'intera saliva in provette da centrifuga sterili da 50 ml. Dopo essere stati assemblati, tutti i campioni sono stati immediatamente conservati a -20 ºC fino al momento del test.

Quantificazione del livello salivare di Paxillina umana:

La saliva è stata raccolta dai pazienti e dai controlli. Dopo la centrifugazione, il surnatante è stato separato per il rilevamento della Paxillina utilizzando la tecnica ELISA fornita da Cloud Clone Corp, Houston, USA, numero di catalogo: E-01184hu. La piastra per microtitolazione di questo kit è stata prerivestita con un anticorpo specifico per la paxillina. I relativi pozzetti della piastra per microtitolazione vengono quindi trattati con un anticorpo coniugato con biotina specifico per la paxillina. Quindi, l'avidina coniugata alla perossidasi di rafano (HRP) viene aggiunta e incubata in ciascun pozzetto della micropiastra. Dopo aver aggiunto la soluzione substrato TMB, solo i pozzetti contenenti paxillina, anticorpo coniugato con biotina e avidina coniugata con enzima cambieranno colore. La reazione enzima-substrato viene interrotta aggiungendo una soluzione di acido solforico e il cambiamento di colore viene misurato spettrofotometricamente a 450 nm 10 nm. La densità ottica (OD) dei campioni viene quindi confrontata con la curva di riferimento per determinare la concentrazione di paxillina.

Analisi statistica:

I dati categorici sono stati forniti come valori di frequenza e percentuale e per valutarli è stato utilizzato il test esatto di Fisher. I numeri della media e della deviazione standard (SD) sono stati utilizzati per rappresentare i dati numerici. Per determinarne la normalità è stato utilizzato il test di Shapiro-Wilk. Per analizzare i dati distribuiti normalmente (età e livelli di Paxillina (ng/mL)) è stato utilizzato un test ANOVA unidirezionale seguito dal test post hoc di Tukey. È stata eseguita l'analisi della curva ROC per determinare l'accuratezza diagnostica. Per confrontare le curve ROC è stato utilizzato un test z. Il livello di significatività è stato fissato a p<0,05 per tutti i test. Per l'analisi statistica è stato utilizzato il software di analisi statistica R versione 4.3.1 per Windows [18].