Оценка уровня содержания паксиллина в слюне при предраковых и злокачественных поражениях полости рта

Целью данного исследования является сравнение уровней паксиллина в слюне при предраковых поражениях полости рта и OSCC с его уровнями у здоровых людей.

Субъекты и методы Для участия в исследовании были приняты сорок пять участников в возрасте от 30 до 70 лет. Они были зарегистрированы в амбулаторной клинике отделения стоматологии и пародонтологии стоматологического факультета Каирского университета. Были распределены три группы субъектов: пятнадцать пациентов с предраковыми поражениями, пятнадцать пациентов с OSCC и пятнадцать системно здоровых субъектов контрольной группы. Полная история болезни была получена для каждого человека с использованием модифицированного опросника Cornell Medical Index. После получения разъяснений относительно объема расследования каждый участник заполнил форму информированного согласия.

Пациентам с OSCC был поставлен клинический диагноз, и для подтверждения диагноза были взяты биоптаты из очагов поражения для гистологического исследования.

Сбор образцов слюны:

Нестимулированные образцы слюны собирались один раз перед операцией перед любым вмешательством. Всем участникам было предложено воздержаться от питья, еды или жевания резинки в течение как минимум 60 минут перед взятием образца. Образцы собирали, предлагая пациенту сначала проглотить, затем наклонить голову вперед на 5 минут и сплюнуть всю слюну в стерильные центрифужные пробирки емкостью 50 мл. После сборки все образцы немедленно хранились при температуре -20 ºC до проведения испытаний.

Количественное определение уровня паксиллина в слюне человека:

Слюну собирали у пациентов и контрольной группы. После центрифугирования супернатант отделяли для обнаружения паксиллина с использованием метода ELISA, предоставленного Cloud Clone Corp, Хьюстон, США, каталожный номер: E-01184hu. Микротитровальный планшет этого набора предварительно покрыт специфичным для паксиллина антителом. Затем соответствующие лунки титровального микропланшета обрабатывают конъюгированными с биотином антителами, специфичными к паксиллину. Затем добавляют авидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (HRP), и инкубируют в каждой лунке микропланшета. После добавления раствора субстрата ТМБ цвет изменят только лунки, содержащие паксиллин, антитела, конъюгированные с биотином, и авидин, конъюгированный с ферментом. Реакцию фермент-субстрат останавливают добавлением раствора серной кислоты и измеряют изменение цвета спектрофотометрически при длине волны 450–10 нм. Затем оптическую плотность (ОП) образцов сравнивают с эталонной кривой для определения концентрации паксиллина.

Статистический анализ:

Категориальные данные были представлены в виде частотных и процентных значений, а для их оценки использовался точный критерий Фишера. Для отображения числовых данных использовались средние значения и стандартные отклонения (SD). Для определения их нормальности использовался тест Шапиро-Уилка. Для анализа нормально распределенных данных (возраст и уровни паксиллина (нг/мл)) использовали однофакторный тест ANOVA с последующим апостериорным тестом Тьюки. Анализ кривой ROC был проведен для определения точности диагностики. Для сравнения кривых ROC использовался z-тест. Уровень значимости для всех тестов был установлен на уровне p<0,05. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение статистического анализа R версии 4.3.1 для Windows [18].