Evaluatie van de niveaus van speekselpaxilline orale premaligne en kwaadaardige laesies

Het doel van deze studie is: vergelijking van de paxillinespiegels in het speeksel in orale premaligne laesies en OSCC met de niveaus ervan bij gezonde proefpersonen.

Onderwerpen en methoden Vijfenveertig deelnemers tussen de 30 en 70 jaar werden voor dit onderzoek geaccepteerd. Ze werden geregistreerd in de polikliniek van de afdeling Orale Geneeskunde en Parodontologie van de Faculteit der Tandheelkunde, de universiteit van Caïro. Er werden drie groepen proefpersonen toegewezen: vijftien patiënten met premaligne laesies, vijftien patiënten met OSCC en vijftien systemisch gezonde controlepersonen. Voor elk individu werd een volledige medische geschiedenis verkregen met behulp van een aangepaste Cornell Medical Index-vragenlijst. Nadat ze opheldering hadden gekregen over de reikwijdte van het onderzoek, vulde elke deelnemer een formulier voor geïnformeerde toestemming in.

Patiënten met OSCC werden klinisch gediagnosticeerd en er werden biopsiespecimens van de laesies genomen voor histologie om de diagnose te bevestigen.

Verzameling van speekselmonsters:

Ongestimuleerde speekselmonsters werden één keer preoperatief vóór elke interventie verzameld. Alle deelnemers werd gevraagd om vóór de monstername ten minste 60 minuten niet te drinken, eten of kauwgom te kauwen. Er werden monsters verzameld door de patiënt te vragen eerst te slikken, vervolgens het hoofd gedurende 5 minuten naar voren te leunen en het volledige speeksel in steriele centrifugebuizen van 50 ml te spugen. Nadat ze waren geassembleerd, werden alle monsters onmiddellijk bij -20 ºC bewaard totdat ze werden getest.

Kwantificering van het speekselniveau van menselijk Paxilline:

Er werd speeksel verzameld van patiënten en controles. Na centrifugatie werd het supernatant gescheiden voor detectie van Paxilline met behulp van de ELISA-techniek geleverd door Cloud Clone Corp, Houston, VS, catalogusnummer: E-01184hu. De microtiterplaat van deze kit is vooraf gecoat met een paxilline-specifiek antilichaam. De relevante putjes van de microtiterplaat worden vervolgens behandeld met een biotine-geconjugeerd antilichaam dat specifiek is voor paxilline. Vervolgens wordt avidine, geconjugeerd aan mierikswortelperoxidase (HRP), toegevoegd en in elk putje van de microtiterplaat geïncubeerd. Na het toevoegen van de TMB-substraatoplossing zullen alleen de putjes met paxilline, biotine-geconjugeerd antilichaam en enzym-geconjugeerd Avidin van kleur veranderen. De enzym-substraatreactie wordt gestopt door het toevoegen van een oplossing van zwavelzuur, en de kleurverandering wordt spectrofotometrisch gemeten bij 450 nm - 10 nm. De optische dichtheid (OD) van de monsters wordt vervolgens vergeleken met de referentiecurve om hun paxillineconcentratie te bepalen.

Statistische analyse:

Categorische gegevens werden gegeven als frequentie- en percentagewaarden, en de exacte test van Fisher werd gebruikt om deze te beoordelen. Gemiddelde en standaarddeviatie (SD) getallen werden gebruikt om numerieke gegevens weer te geven. De Shapiro-Wilk-test werd gebruikt om hun normaliteit te bepalen. Een one-way ANOVA-test gevolgd door de post-hoc-test van Tukey werd gebruikt om normaal verdeelde gegevens (leeftijd en Paxilline (ng/ml) niveaus) te analyseren. ROC-curveanalyse werd uitgevoerd om de diagnostische nauwkeurigheid te bepalen. Er werd een z-test gebruikt om ROC-curven te vergelijken. Het significantieniveau werd voor alle tests vastgesteld op p<0,05. Voor de statistische analyse werd R-statistische analysesoftware versie 4.3.1 voor Windows gebruikt [18].