Évaluation des niveaux de lésions précancéreuses et malignes orales de paxilline salivaire

Le but de cette étude est : comparaison des taux de paxilline salivaire dans les lésions buccales précancéreuses et OSCC à ses niveaux chez des sujets sains.

Sujets et méthodes Quarante-cinq participants âgés de 30 à 70 ans ont été acceptés pour cette étude. Ils ont été enregistrés à la clinique externe du département de médecine buccale et de parodontologie de la faculté de médecine dentaire de l'université du Caire. Trois groupes de sujets ont été assignés : quinze patients présentant des lésions précancéreuses, quinze patients atteints d'OSCC et quinze sujets témoins systémiquement sains. Des antécédents médicaux complets ont été obtenus pour chaque individu à l'aide d'un questionnaire modifié du Cornell Medical Index. Après avoir reçu des éclaircissements concernant la portée de l'enquête, chaque participant a rempli un formulaire de consentement éclairé.

Les patients atteints d'OSCC ont été diagnostiqués cliniquement et des échantillons de biopsie des lésions ont été prélevés pour l'histologie afin de confirmer le diagnostic.

Collecte d'échantillons de salive :

Des échantillons de salive non stimulés ont été collectés une fois en préopératoire avant toute intervention. Il a été demandé à tous les participants de s'abstenir de boire, de manger ou de mâcher du chewing-gum pendant au moins 60 minutes avant le prélèvement. Des échantillons ont été prélevés en demandant au patient d'avaler d'abord, puis de pencher la tête en avant pendant 5 minutes et de cracher toute la salive dans des tubes à centrifuger stériles de 50 ml. Après avoir été assemblés, tous les échantillons ont été immédiatement stockés à -20 ºC jusqu'à ce qu'ils soient testés.

Quantification du niveau salivaire de Paxilline humaine :

La salive a été collectée auprès des patients et des témoins. Après centrifugation, le surnageant a été séparé pour la détection de la paxilline en utilisant la technique ELISA fournie par Cloud Clone Corp, Houston, USA, numéro de catalogue : E-01184hu. La plaque de microtitration de ce kit a été pré-enduite d'un anticorps spécifique à la paxilline. Les puits de plaque de microtitrage concernés sont ensuite traités avec un anticorps conjugué à la biotine spécifique de la paxilline. Ensuite, l'avidine conjuguée à la peroxydase de raifort (HRP) est ajoutée et incubée dans chaque puits de microplaque. Après avoir ajouté la solution de substrat TMB, seuls les puits contenant de la paxilline, des anticorps conjugués à la biotine et de l'avidine conjuguée à une enzyme changeront de couleur. La réaction enzyme-substrat est arrêtée par ajout d'une solution d'acide sulfurique et le changement de couleur est mesuré par spectrophotométrie à 450 nm-10 nm. La densité optique (DO) des échantillons est ensuite comparée à la courbe de référence pour déterminer leur concentration en paxilline.

Analyses statistiques:

Les données catégorielles ont été fournies sous forme de valeurs de fréquence et de pourcentage, et le test exact de Fisher a été utilisé pour les évaluer. Les nombres de moyenne et d'écart type (SD) ont été utilisés pour représenter les données numériques. Le test de Shapiro-Wilk a été utilisé pour déterminer leur normalité. Un test ANOVA unidirectionnel suivi du test post hoc de Tukey a été utilisé pour analyser les données normalement distribuées (âge et niveaux de paxilline (ng/mL)). Une analyse de la courbe ROC a été effectuée pour déterminer la précision du diagnostic. Un test z a été utilisé pour comparer les courbes ROC. Le niveau de signification a été fixé à p <0,05 pour tous les tests. Le logiciel d'analyse statistique R version 4.3.1 pour Windows a été utilisé pour l'analyse statistique [18].