Bewertung der Konzentrationen oraler prämaligner und bösartiger Läsionen im Speichel von Paxillin

Das Ziel dieser Studie ist: Vergleich der Paxillinspiegel im Speichel bei oralen prämalignen Läsionen und OSCC mit den Spiegeln bei gesunden Probanden.

Themen und Methoden Für diese Studie wurden 45 Teilnehmer im Alter zwischen 30 und 70 Jahren zugelassen. Sie wurden in der Ambulanz für Oralmedizin und Parodontologie der Fakultät für Zahnmedizin der Universität Kairo registriert. Es wurden drei Probandengruppen zugeteilt: fünfzehn Patienten mit prämalignen Läsionen, fünfzehn Patienten mit OSCC und fünfzehn systemisch gesunde Kontrollpersonen. Für jede Person wurde mithilfe eines modifizierten Cornell Medical Index-Fragebogens eine vollständige Krankengeschichte erhoben. Nach Klärung des Umfangs der Anfrage füllte jeder Teilnehmer eine Einverständniserklärung aus.

Patienten mit OSCC wurden klinisch diagnostiziert und zur Bestätigung der Diagnose wurden Biopsien aus den Läsionen für die Histologie entnommen.

Sammlung von Speichelproben:

Unstimulierte Speichelproben wurden einmal präoperativ vor jedem Eingriff entnommen. Alle Teilnehmer wurden gebeten, vor der Probenahme mindestens 60 Minuten lang auf Trinken, Essen oder Kaugummi zu verzichten. Zur Probenentnahme wurde der Patient gebeten, zuerst zu schlucken, dann den Kopf fünf Minuten lang nach vorne zu neigen und den gesamten Speichel in sterile 50-ml-Zentrifugenröhrchen zu spucken. Nach dem Zusammenbau wurden alle Proben sofort bis zur Prüfung bei -20 °C gelagert.

Quantifizierung des menschlichen Paxillin-Speichelspiegels:

Speichel wurde von Patienten und Kontrollpersonen gesammelt. Nach der Zentrifugation wurde der Überstand zum Nachweis von Paxillin mithilfe der ELISA-Technik von Cloud Clone Corp, Houston, USA, Katalognummer: E-01184hu, abgetrennt. Die Mikrotiterplatte dieses Kits wurde mit einem Paxillin-spezifischen Antikörper vorbeschichtet. Die entsprechenden Vertiefungen der Mikrotiterplatte werden dann mit einem Biotin-konjugierten, für Paxillin spezifischen Antikörper behandelt. Anschließend wird mit Meerrettich-Peroxidase (HRP) konjugiertes Avidin hinzugefügt und in jeder Mikrotiterplattenvertiefung inkubiert. Nach Zugabe der TMB-Substratlösung ändern nur die Vertiefungen, die Paxillin, Biotin-konjugierten Antikörper und Enzym-konjugiertes Avidin enthalten, ihre Farbe. Die Enzym-Substrat-Reaktion wird durch Zugabe einer Schwefelsäurelösung gestoppt und die Farbänderung spektrophotometrisch bei 450 nm 10 nm gemessen. Anschließend wird die optische Dichte (OD) der Proben mit der Referenzkurve verglichen, um ihre Paxillinkonzentration zu bestimmen.

Statistische Analyse:

Kategoriale Daten wurden als Häufigkeits- und Prozentwerte angegeben und zur Bewertung wurde der exakte Fisher-Test verwendet. Mittelwerte und Standardabweichungszahlen (SD) wurden zur Darstellung numerischer Daten verwendet. Zur Bestimmung ihrer Normalität wurde der Shapiro-Wilk-Test verwendet. Zur Analyse normalverteilter Daten (Alter und Paxillin-Spiegel (ng/ml)) wurde ein einseitiger ANOVA-Test gefolgt von Tukeys Post-hoc-Test verwendet. Zur Bestimmung der diagnostischen Genauigkeit wurde eine ROC-Kurvenanalyse durchgeführt. Zum Vergleich der ROC-Kurven wurde ein Z-Test verwendet. Das Signifikanzniveau wurde für alle Tests auf p<0,05 festgelegt. Für die statistische Analyse wurde die statistische Analysesoftware R Version 4.3.1 für Windows verwendet [18].