„Přidání DNA testu pro screening HLA-DQ2 a DQ8 pro zlepšení včasné diagnostiky celiakie“ (GLUTEN-GEN)

Celiakie (CD) je imunitně podmíněná systémová porucha vyvolaná požitím obilovin obsahujících lepek z běžné stravy, mimo jiné pšenice, žita a ječmene. Onemocnění je charakterizováno variabilní kombinací klinických projevů závislých na lepku, CD specifických protilátek, haplotypů lidského leukocytárního antigenu (HLA)-DQ2 nebo HLA-DQ8 a chronického zánětu tenkého střeva[1,2]. T-buňky v lamina propria tenkého střeva rozpoznávají glutenové peptidy, když jsou navázány na HLA třídy II specifity DQ2 a/nebo DQ8 na buňkách prezentujících antigen.

CD je jednou z nejčastějších celoživotních poruch souvisejících s jídlem; má frekvenci 1 % v obecné populaci: to odpovídá 170 000 osob v Nizozemsku, z nichž alespoň 30 000 děti[3-7]. CD je však často nerozpoznáno, částečně kvůli jeho variabilním klinickým projevům a symptomům, od malabsorpce s chronickým průjmem, špatným růstem u dětí a úbytkem hmotnosti, až po nespecifické příznaky a symptomy, jako je chronická únava, osteoporóza/snížená hustota kostních minerálů, gastrointestinální symptomy. nebo zvýšené jaterní enzymy [5,7,8]. Nerozpoznaná, a tedy nediagnostikovaná a neléčená nemoc je spojena s krátkodobými a dlouhodobými komplikacemi, jako je opožděná puberta, neuropsychiatrické poruchy, související autoimunitní onemocnění, potraty, porody malých dětí, osteoporóza a vzácně malignita. CD představuje pro společnost značnou zdravotní zátěž a přináší rozsáhlé negativní ekonomické důsledky, což představuje problém zdrojů pro současné i budoucí zdravotnické systémy [9]. Po diagnostikování se zdravotní stav pacienta po léčbě bezlepkovou dietou (GFD) zlepší.

Že včasné diagnózy a léčby CD lze dosáhnout aktivním vyhledáváním případů, ukazují předběžné výsledky probíhajícího projektu GLUTENSCREEN sponzorovaného ZonMw (531002001; www.glutenscreen.nl). V tomto projektu aktivního zjišťování případů, který byl zahájen v únoru 2019, jsou všechny děti ve věku 1–4 roky, které navštěvují střediska preventivní péče o mládež (YHCC) v regionu Kennemerland, každoročně hodnoceny na 10 symptomů souvisejících s CD během pravidelných konzultací. Pokud má dítě jeden nebo více příznaků, rodiče dítěte jsou pozváni k účasti. Po informovaném souhlasu je na místě v YHCC proveden bod péče test (POCT) hodnotící CD-specifické protilátky proti tkáňové transglutamináze (TGA) z kapky krve. Pokud je POCT pozitivní (přítomno TGA), existuje vysoké podezření na CD a dítě je odesláno do Leiden University Medical Center (LUMC) k diagnóze podle standardu péče[1,2]. Předběžné výsledky GLUTENSCREEN jsou nad očekávání: Z 14 917 dětí navštěvujících YHCC mělo 5 512 (37,0 %) z nich jeden nebo více symptomů souvisejících s CD.

Rodiče 3 203 (58,1 %) dětí dali informovaný souhlas s POC-testem. U 61 (1,9 %) dětí byl POC-test pozitivní. Po dalších vyšetřeních v naší nemocnici byla CD potvrzena u 55 dětí (1,7 % testovaných dětí) (sérové ​​IgA TGA >10xULN a IgA proti endomysiu (EMA) pozitivní) a vyloučena u 5 dětí s pochybným/pozitivním POC testem: v r. dvě děti byly HLA-DQ2/8 negativní s negativním TGA v séru (ELISA-test), u 3 dětí s TGA <10 x ULN (ELISA-test), u kterých biopsie tenkého střeva prokázaly Marsh 1 léze. Jedno dítě je stále potřeba vidět v nemocnici (rodiče dosud odmítli) (www.glutenscreen.nl). Z rodičů, kteří byli pozváni na GLUTENSCREEN, je téměř 80 % ochotno se zúčastnit, pokud by bylo možné POCT provést během pravidelné návštěvy v YHCC. Všichni zdravotníci uvedli, že včasná detekce CD pomocí vyhledávání případů přidává hodnotu preventivní péči, kterou nabízejí v YHCC.

Tyto předběžné výsledky našeho projektu aktivního vyhledávání případů CD v Preventive YHCC v Nizozemsku ukazují, že včasná detekce CD v Preventive YHC je proveditelná a dobře přijímaná rodiči a zdravotníky.

V GLUTENSCREEN budou všechny symptomatické děti každoročně testovány na CD v Preventive YHCC až do věku 4 let. V regionu Kennemerland již byl GLUTENSCREEN zaveden do běžné péče a POCT bude proveden při konzultaci. Rozvoj CD však vyžaduje genetickou náchylnost, přítomnou u 40 % běžné populace. Vzhledem k tomu, že se toto onemocnění téměř výhradně vyskytuje u jedinců s lidským leukocytárním antigenem (HLA)-DQ2 a/nebo HLA-DQ8 haplotypy, kodifikované chromozomem 6. Absence HLA-DQ2/-DQ8 může vyloučit možnost nebo budoucí rozvoj CD s jistotou blízkou 100 %. Vzhledem k vysoké negativní prediktivní hodnotě HLA-typizace pro rozvoj CD bude opakované testování CD zbytečné u HLA-DQ2/DQ8 negativních jedinců (60 % obecné populace) [10].

V současné době není typizace HLA součástí GLUTENSCREEN, protože současná technika představuje důležité nevýhody v nastaveních bez dostupnosti laboratoře, jako je nastavení preventivní péče jako YHCC, protože vyžaduje extrakci DNA. Materiál pro extrakci DNA se obvykle získává z plné krve (minimální množství 4-5 ml) nebo z jiných buněk, např. bukální sliznice. Venepunkce však nejsou u YHCC proveditelné a extrakce DNA z bukální sliznice u dětí je časově náročná.

Zde navrhujeme ověřit a implementovat test na izolaci DNA pro typizaci HLA extrahovanou ze sušených krevních skvrn pro včasnou detekci CD na preventivních YHCC.

Jiné projekty ukázaly, že použití polymerázové řetězové reakce v reálném čase (RT-PCR) na DNA získané ze sušených krevních vzorků je úspěšné a lze jej v tomto prostředí snadno aplikovat na typizaci HLA-DQ2/DQ8[11].

Přidání typizace HLA-DQ2/8 do strategie vyhledávání případů CD na preventivním YHCC je inovativní, protože typizace HLA pro CD se v navrhovaném uspořádání dříve neprováděla v suchých krevních skvrnách. Kromě toho začlenění této techniky představuje nový přístup k aktivnímu vyhledávání případů CD a následně zlepší sekundární prevenci CD včasnou diagnózou na preventivních YHCC.

Výsledek navrhované studie bude mít dopad na aktivní proces vyhledávání případů CD v YHCC. Opakované testování na CD lze vynechat u dětí testovaných na HLA-DQ2/8 negativní, což odpovídá 60 % cílové populace. Výsledkem této studie bude:

1. Efektivnější a snížení zátěže HLA-DQ2/8 negativních dětí: musí být testováno méně dětí.
2. Jasnost přijatelnosti typizace HLA pro CD u rodičů malých dětí.

3. Úspora nákladů snížením zbytečného sledování dětí. Aby bylo možné tuto techniku ​​začlenit do prostředí pro zjišťování případů v YHCC, bude test nabídnut významné části obecné nizozemské populace ve věku 0–4 let, protože více než 95 % obecné populace navštěvuje YHCC.

   • Nahlédněte do odkazů na konci tohoto dokumentu