«Добавление ДНК-теста для скрининга HLA-DQ2 и DQ8 для улучшения ранней диагностики целиакии» (GLUTEN-GEN)

Целиакия (БК) — это иммуноопосредованное системное заболевание, вызываемое употреблением в пищу содержащих глютен злаков из обычного рациона, в том числе пшеницы, ржи и ячменя. Заболевание характеризуется разнообразным сочетанием глютен-зависимых клинических проявлений, специфических антител к CD, гаплотипов человеческого лейкоцитарного антигена (HLA)-DQ2 или HLA-DQ8 и хронического воспаления тонкой кишки [1,2]. Т-клетки в собственной пластинке тонкой кишки распознают пептиды глютена, когда они связываются со специфичностью HLA класса II DQ2 и/или DQ8 на антигенпрезентирующих клетках.

БК является одним из наиболее распространенных расстройств, связанных с питанием, на протяжении всей жизни; его частота среди населения в целом составляет 1%: это соответствует 170 000 человек в Нидерландах, из них не менее 30 000 дети[3-7]. Однако БК часто не распознается, отчасти из-за разнообразных клинических проявлений и симптомов, начиная от мальабсорбции с хронической диареей, замедленного роста у детей и потери веса до неспецифических признаков и симптомов, таких как хроническая усталость, остеопороз/снижение минеральной плотности костей, желудочно-кишечные симптомы. или повышенные ферменты печени [5,7,8]. Нераспознанное и, следовательно, недиагностированное и нелеченное заболевание связано с краткосрочными и долгосрочными осложнениями, такими как задержка полового созревания, нервно-психические расстройства, сопутствующие аутоиммунные заболевания, выкидыши, малые по размеру роды, остеопороз и, реже, злокачественные новообразования. БК несет значительную нагрузку на здоровье общества и приводит к обширным негативным экономическим последствиям, тем самым создавая проблему ресурсов для нынешних и будущих систем здравоохранения [9]. После постановки диагноза состояние здоровья пациента улучшается после лечения безглютеновой диетой (БГД).

Своевременная диагностика и лечение БК могут быть достигнуты путем активного выявления случаев заболевания, показывают предварительные результаты текущего проекта GLUTENSCREEN, спонсируемого ZonMw (531002001; www.glutenscreen.nl). В рамках этого активного проекта по выявлению случаев заболевания, стартовавшего в феврале 2019 года, все дети в возрасте 1–4 лет, посещающие Центры профилактического ухода за молодежью (YHCC) в регионе Кеннемерланд, ежегодно во время регулярной консультации обследуются на наличие 10 симптомов, связанных с БК. Если у ребенка есть один или несколько симптомов, к участию приглашаются родители ребенка. После информированного согласия на месте в YHCC проводится тест на месте оказания медицинской помощи (POCT), позволяющий оценить CD-специфические антитела против тканевой трансглутаминазы (TGA) из капли крови. Если POCT положительный (присутствует TGA), высока вероятность БК, и ребенка направляют в Медицинский центр Лейденского университета (LUMC) для диагностики в соответствии со стандартами лечения [1,2]. Предварительные результаты GLUTENSCREEN превзошли все ожидания: из 14 917 детей, посещавших YHCC, у 5 512 (37,0%) был один или несколько симптомов, связанных с БК.

Родители 3203 (58,1%) детей дали информированное согласие на проведение POC-теста. У 61 (1,9%) ребенка POC-тест оказался положительным. После дополнительных исследований в нашей больнице БК была подтверждена у 55 детей (1,7% обследованных детей) (сывороточный IgA TGA >10xULN и положительный IgA против эндомизия (EMA)) и исключена у 5 детей с сомнительным/положительным тестом POC: у у двоих детей HLA-DQ2/8 был отрицательным с отрицательным TGA в сыворотке (тест ELISA), у 3 детей с TGA <10 x ULN (тест ELISA), у которых биопсия тонкой кишки показала поражения Марша 1. Одного ребенка еще нужно осмотреть в больнице (родители до сих пор отказывались) (www.glutenscreen.nl). Из родителей, приглашенных на GLUTENSCREEN, почти 80% готовы принять участие, если POCT можно будет провести во время обычного посещения YHCC. Все специалисты здравоохранения сообщили, что раннее выявление БК путем выявления случаев повышает ценность профилактической помощи, которую они предлагают в YHCC.

Эти предварительные результаты нашего активного проекта по выявлению случаев БК в профилактических центрах YHCC в Нидерландах показывают, что раннее выявление БК в профилактических центрах YHC осуществимо и хорошо воспринимается родителями и медицинскими работниками.

В GLUTENSCREEN все дети с симптомами заболевания будут ежегодно проходить тестирование на БК в профилактических центрах YHCC до возраста 4 лет. В регионе Кеннемерланд GLUTENSCREEN уже внедрен в программу регулярного ухода, а POCT будет проводиться во время консультации. Однако для развития БК необходима генетическая предрасположенность, которая присутствует у 40% населения в целом. Поскольку заболевание почти исключительно возникает у лиц с гаплотипами человеческого лейкоцитарного антигена (HLA)-DQ2 и/или HLA-DQ8, кодируемыми хромосомой 6. Отсутствие HLA-DQ2/-DQ8 может исключить возможность развития БК в будущем с вероятностью, близкой к 100%. Из-за высокой отрицательной прогностической ценности HLA-типирования для развития БК повторное тестирование на БК будет ненужным у HLA-DQ2/DQ8-отрицательных лиц (60% населения в целом) [10].

В настоящее время HLA-типирование не является частью GLUTENSCREEN, поскольку нынешний метод имеет серьезные недостатки в условиях отсутствия лаборатории, например, в режиме профилактического ухода, как YHCC, поскольку он требует выделения ДНК. Материал для выделения ДНК обычно получают из цельной крови (минимум 4–5 мл) или из других клеток, например, слизистой оболочки щеки. Однако венепункции в YHCC невозможны, а экстракция ДНК слизистой оболочки щеки у детей требует много времени.

Здесь мы предлагаем проверить и внедрить тест на выделение ДНК для типирования HLA, извлеченный из высушенных пятен крови, для раннего выявления БК на профилактических YHCC.

Другие проекты показали, что использование полимеразной цепной реакции в реальном времени (ОТ-ПЦР) на ДНК, полученной из образцов сухой крови, является успешным и может быть легко применено для типирования HLA-DQ2/DQ8 в этих условиях[11].

Добавление HLA-DQ2/8-типирования к стратегии выявления случаев БК в профилактическом центре YHCC является инновационным, поскольку ранее в предлагаемых условиях HLA-типирование БК в пятнах засохшей крови не проводилось. Более того, внедрение этого метода представляет собой новый подход к активному выявлению случаев БК и, следовательно, улучшит вторичную профилактику БК путем ранней диагностики в профилактических центрах YHCC.

Результаты предлагаемого исследования окажут влияние на активную процедуру выявления случаев БК в YHCC. Повторное тестирование на БК можно не проводить у детей с отрицательным результатом теста HLA-DQ2/8, это относится к 60% целевой группы населения. Это исследование приведет к:

1. Повышение эффективности и уменьшение бремени HLA-DQ2/8-отрицательных детей: меньшее количество детей должно проходить тестирование.
2. Ясность приемлемости типирования HLA для CD у родителей маленьких детей.

3. Экономия затрат за счет сокращения ненужного наблюдения за детьми. Чтобы внедрить этот метод в систему выявления случаев заболевания в YHCC, тест будет предложен значительной части населения Нидерландов в возрасте от 0 до 4 лет, поскольку более 95% населения посещают YHCC.

   • Обратитесь к ссылкам в конце этого документа.