Genetické faktory erektilní dysfunkce Stupeň a odpověď na léčbu tadalafilem u pacientů s diabetem (EDGEN)

Do studie zařadíme 90 pacientů s diabetem a erektilní dysfunkcí. K potvrzení diagnózy erektilní dysfunkce použijeme dotazník IIEF-5. Do studie budou zahrnuti pacienti ve věku 40 až 65 let, kteří získají 21 bodů nebo méně na stupnici IIEF-5.

Výzkum bude klinicky farmakologický, prospektivní, intervenční a geneticko-asociativní. Pacienti budou vybíráni postupně, podle jejich ochoty účastnit se výzkumu, s přihlédnutím ke kritériím pro zařazení a vyloučení. Díky tomu nebudou podléhat randomizaci. Při prvním vyšetření a po podepsání informovaného souhlasu s účastí ve výzkumu bude pacientům odebrána krev na laboratorní a molekulárně genetické testy, dostanou lék na léčbu erektilní dysfunkce tadalafil, který dostanou v dávka 5 mg denně po dobu tří měsíců. Po třech měsících pacienti opět vyplní dotazník IIEF-5.

Na začátku výzkumu zúčastněným lidem vysvětlíme průběh a účel výzkumu, vyplní formulář souhlasu s účastí ve výzkumu. Po zařazení provedeme u všech předmětů následující:

• Anamnéza a klinické vyšetření (včetně hmotnosti, výšky a indexu tělesné hmotnosti). Stupeň erektilní dysfunkce bude klasifikován pomocí dotazníku IIEF-5 do čtyř kategorií, a to těžká (5-7 bodů), středně těžká (8-11 bodů), lehká až středně těžká (12-16 bodů) a lehká forma (17- 21 bodů) erektilní dysfunkce.
• Laboratorní vyšetření Bude odebrána periferní žilní krev ke stanovení laboratorních parametrů: funkce ledvin, hepatogram, lipidogram, HbA1c (TIR), PSA, TSH, LH, FSH, PRL, SHBG, testosteron (celkový i volný), kyselina listová.
• Molekulárně genetické testy Vyšetřovaným bude odebráno 3-5 ml periferní žilní krve do zkumavky s EDTA. Centrifugace oddělí krevní plazmu od buněčné části krve. Genomová DNA bude izolována z buněčné části krve pomocí komerčních reagenčních sad (DNA Mini Kit a Flexigene DNA kit; Qiagen, Hilden, Německo). Ke stanovení polymorfismů jednotlivých nukleotidů v genech syntézní dráhy, NO funkce a folátové dráhy využijeme moderní vysokokapacitní metody založené na real-time PCR reakci, jako je 5'-exonukleázový test (TaqMan SNP genotyping assay Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) a alelově specifické kompetitivní PCR reakce (KASPar test; KBiosciences, Herts, UK).

Kandidátní geny byly vybrány na základě literárního přehledu se zaměřením na dráhy související s molekulární patogenezí erektilní dysfunkce a dráhy související s metabolismem a účinkem tadalafilu. Na základě přehledu databází (dbSNP, PharmGKB) a literatury jsme ve zmíněných genech hledali genetické změny, které jsou běžné u bílé rasy a ovlivňují expresi genu nebo funkci zapsaného proteinu. Na základě toho jsme se rozhodli zahrnout do analýzy následující geny a polymorfismy:

• signální dráha NO: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• faktory cévní stěny: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); ACE: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2: rs2285666, rs1978124
• folátová dráha: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; asi 677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; c.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>:275 rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• metabolismus tadalafilu: CYP3A4*22 a CYP3A5*3
• Cíl tadalafilu: PDE5A: rs12646525, rs3806808