Genetische factoren van de mate van erectiestoornissen en de respons op de behandeling met tadalafil bij patiënten met diabetes (EDGEN)

We zullen in het onderzoek 90 patiënten met diabetes en erectiestoornissen opnemen. We zullen de IIEF-5-vragenlijst gebruiken om de diagnose van erectiestoornissen te bevestigen. Patiënten tussen de 40 en 65 jaar die 21 punten of minder scoren op de IIEF-5-schaal zullen in het onderzoek worden opgenomen.

Het onderzoek zal klinisch farmacologisch, prospectief, interventioneel en genetisch-associatief zijn. Patiënten zullen opeenvolgend worden geselecteerd op basis van hun bereidheid om deel te nemen aan het onderzoek, rekening houdend met de in- en exclusiecriteria. Als gevolg daarvan zullen zij niet onderworpen zijn aan randomisatie. Bij het eerste onderzoek en na ondertekening van het geïnformeerde toestemmingsformulier voor deelname aan het onderzoek zal bij de patiënten bloed worden afgenomen voor laboratorium- en moleculair genetische tests. Zij zullen het medicijn voor de behandeling van erectiestoornissen tadalafil ontvangen, dat zij zullen ontvangen in een dosis van 5 mg per dag gedurende een periode van drie maanden. Na drie maanden vullen patiënten de IIEF-5-vragenlijst opnieuw in.

Bij aanvang van het onderzoek leggen wij het verloop en doel van het onderzoek uit aan de betrokkenen, zij vullen een toestemmingsformulier in voor deelname aan het onderzoek. Bij opname doen we het volgende op alle onderwerpen:

• Geschiedenis en klinisch onderzoek (inclusief gewicht, lengte en body mass index). De mate van erectiestoornissen zal met behulp van de IIEF-5-vragenlijst worden geclassificeerd in vier categorieën, namelijk ernstig (5-7 punten), matig (8-11 punten), mild tot matig (12-16 punten) en milde vorm (17-16 punten). 21 punten) van erectiestoornissen.
• Laboratoriumonderzoek Er wordt perifeer veneus bloed afgenomen om laboratoriumparameters te bepalen: nierfunctie, hepatogram, lipidogram, HbA1c (TIR), PSA, TSH, LH, FSH, PRL, SHBG, testosteron (totaal en vrij), foliumzuur.
• Moleculair genetische tests Bij de proefpersonen wordt 3-5 ml perifeer veneus bloed afgenomen in een reageerbuisje met EDTA. Door centrifugeren wordt het bloedplasma gescheiden van het cellulaire deel van het bloed. Genomisch DNA zal worden geïsoleerd uit het cellulaire deel van het bloed met behulp van commerciële reagenssets (DNA Mini Kit en Flexigene DNA-kit; Qiagen, Hilden, Duitsland). Om polymorfismen van individuele nucleotiden in de genen van de syntheseroute, NO-functie en foliumzuurroute te bepalen, zullen we moderne high-throughput-methoden gebruiken, gebaseerd op de real-time PCR-reactie, zoals de 5'-exonucleasetest (TaqMan SNP-genotyperingstest). Applied Biosystems, Foster City, CA, VS) en allelspecifieke competitieve PCR-reacties (KASPar-test; KBiosciences, Herts, VK).

Kandidaatgenen werden geselecteerd op basis van literatuuronderzoek, waarbij de nadruk lag op routes die verband houden met de moleculaire pathogenese van erectiestoornissen en routes die verband houden met het metabolisme en de werking van tadalafil. Op basis van een overzicht van de databases (dbSNP, PharmGKB) en de literatuur hebben we gezocht naar genetische veranderingen in de genoemde genen die veel voorkomen bij het blanke ras en de expressie van het gen of de functie van het geschreven eiwit beïnvloeden. Op basis hiervan hebben we besloten om de volgende genen en polymorfismen in de analyse op te nemen:

• signaalroute NO: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• vaatwandfactoren: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); ACE: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2: rs2285666, rs1978124
• foliumzuurroute: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; c. 677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; c.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>G), MTRR: rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• metabolisme van tadalafil: CYP3A4*22 en CYP3A5*3
• tadalafil-doelwit: PDE5A: rs12646525, rs3806808