Czynniki genetyczne stopnia zaburzeń erekcji i odpowiedzi na leczenie tadalafilem u pacjentów chorych na cukrzycę (EDGEN)

Do badania uwzględnimy 90 pacjentów chorych na cukrzycę i zaburzenia erekcji. Do potwierdzenia rozpoznania zaburzeń erekcji wykorzystamy kwestionariusz IIEF-5. Do badania zostaną włączeni pacjenci w wieku od 40 do 65 lat, którzy uzyskają 21 lub mniej punktów w skali IIEF-5.

Badania będą miały charakter klinicznie farmakologiczny, prospektywny, interwencyjny i genetyczno-asocjacyjny. Pacjenci będą wybierani sekwencyjnie, zgodnie z ich chęcią udziału w badaniu, z uwzględnieniem kryteriów włączenia i wyłączenia. Dzięki temu nie będą podlegać randomizacji. Przy pierwszym badaniu i po podpisaniu formularza świadomej zgody na udział w badaniach od pacjentów zostanie pobrana krew do laboratoryjnych i molekularnych badań genetycznych, otrzymają oni lek na zaburzenia erekcji tadalafil, który otrzymają w formie dawka 5 mg na dobę przez okres trzech miesięcy . Po trzech miesiącach pacjenci ponownie wypełnią kwestionariusz IIEF-5.

Na początku badania wyjaśnimy osobom zaangażowanym przebieg i cel badania, wypełnią one formularz zgody na udział w badaniu. Po włączeniu wykonamy następujące czynności ze wszystkich przedmiotów:

• Wywiad i badanie kliniczne (w tym masa ciała, wzrost i wskaźnik masy ciała). Stopień zaburzeń erekcji zostanie sklasyfikowany za pomocą kwestionariusza IIEF-5 na cztery kategorie, a mianowicie ciężkie (5-7 punktów), umiarkowane (8-11 punktów), łagodne do umiarkowanych (12-16 punktów) oraz postać łagodna (17-11 punktów). 21 punktów) zaburzeń erekcji.
• Badania laboratoryjne Pobrana zostanie krew żylna obwodowa w celu określenia parametrów laboratoryjnych: czynności nerek, hepatogramu, lipidogramu, HbA1c (TIR), PSA, TSH, LH, FSH, PRL, SHBG, testosteronu (całkowitego i wolnego), kwasu foliowego.
• Molekularne badania genetyczne Od osób badanych do probówki z EDTA zostanie pobrane 3-5 ml krwi żylnej obwodowej. Wirowanie oddzieli osocze krwi od komórkowej części krwi. Genomowy DNA zostanie wyizolowany z komórkowej części krwi przy użyciu komercyjnych zestawów odczynników (DNA Mini Kit i Flexigene DNA kit; Qiagen, Hilden, Niemcy). Do określenia polimorfizmów poszczególnych nukleotydów w genach szlaku syntezy, funkcji NO i szlaku kwasu foliowego wykorzystamy nowoczesne, wysokoprzepustowe metody oparte na reakcji PCR w czasie rzeczywistym, takie jak test 5'-egzonukleazy (test genotypowania TaqMan SNP ; Applied Biosystems, Foster City, Kalifornia, USA) i specyficzne dla alleli konkurencyjne reakcje PCR (test KASPar; KBiosciences, Herts, Wielka Brytania).

Geny kandydujące wybrano na podstawie przeglądu literatury, koncentrując się na szlakach związanych z molekularną patogenezą zaburzeń erekcji oraz szlakach związanych z metabolizmem i działaniem tadalafilu. Na podstawie przeglądu baz danych (dbSNP, PharmGKB) oraz literatury poszukiwaliśmy zmian genetycznych w wymienionych genach, które są powszechne u rasy białej i wpływają na ekspresję genu lub funkcję zapisanego białka. Na tej podstawie postanowiliśmy uwzględnić w analizie następujące geny i polimorfizmy:

• ścieżka sygnalizacyjna nr: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• czynniki ściany naczyń: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); ACE: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2: rs2285666, rs1978124
• szlak folianowy: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; ok. 677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; ok.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>G), MTRR: rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• metabolizm tadalafilu: CYP3A4*22 i CYP3A5*3
• cel tadalafilu: PDE5A: rs12646525, rs3806808