Fatores genéticos do grau de disfunção erétil e resposta ao tratamento com tadalafila em pacientes com diabetes (EDGEN)

Incluiremos no estudo 90 pacientes com diabetes e disfunção erétil. Usaremos o questionário IIEF-5 para confirmar o diagnóstico de disfunção erétil. Pacientes com idades entre 40 e 65 anos que obtiverem 21 pontos ou menos na escala IIEF-5 serão incluídos no estudo.

A pesquisa será clinicamente farmacológica, prospectiva, intervencionista e genético-associativa. Os pacientes serão selecionados sequencialmente, de acordo com sua disponibilidade em participar da pesquisa, atendendo aos critérios de inclusão e exclusão. Como resultado, eles não estarão sujeitos a randomização. No primeiro exame e após assinatura do Termo de Consentimento Livre e Esclarecido para participação na pesquisa, será coletado sangue dos pacientes para exames laboratoriais e de genética molecular, eles receberão o medicamento para tratamento da disfunção erétil tadalafil, que receberão em um dose de 5 mg por dia durante um período de três meses. Após três meses, os pacientes preencherão novamente o questionário IIEF-5.

No início da pesquisa explicaremos o andamento e o objetivo da pesquisa às pessoas envolvidas, elas preencherão um termo de consentimento para participação na pesquisa. Após a inclusão, realizaremos o seguinte em todas as disciplinas:

• História e exame clínico (incluindo peso, altura e índice de massa corporal). O grau de disfunção erétil será classificado por meio do questionário IIEF-5 em quatro categorias, a saber: grave (5-7 pontos), moderada (8-11 pontos), leve a moderada (12-16 pontos) e forma leve (17- 21 pontos) de disfunção erétil.
• Exames laboratoriais Será coletado sangue venoso periférico para determinação dos parâmetros laboratoriais: função renal, hepatograma, lipidograma, HbA1c (TIR), PSA, TSH, LH, FSH, PRL, SHBG, testosterona (total e livre), ácido fólico.
• Testes genéticos moleculares 3-5 ml de sangue venoso periférico serão retirados dos examinados em um tubo de ensaio com EDTA. A centrifugação separará o plasma sanguíneo da parte celular do sangue. O DNA genômico será isolado da parte celular do sangue usando conjuntos de reagentes comerciais (DNA Mini Kit e kit Flexigene DNA; Qiagen, Hilden, Alemanha). Para determinar polimorfismos de nucleotídeos individuais nos genes da via de síntese, função do NO e via do folato, usaremos métodos modernos de alto rendimento baseados na reação de PCR em tempo real, como o teste de 5'-exonuclease (ensaio de genotipagem TaqMan SNP ; Applied Biosystems, Foster City, CA, EUA) e reações de PCR competitivas específicas de alelo (ensaio KASPar; KBiosciences, Herts, Reino Unido).

Os genes candidatos foram selecionados com base em uma revisão da literatura, com foco nas vias relacionadas à patogênese molecular da disfunção erétil e nas vias relacionadas ao metabolismo e à ação do tadalafil. Com base na revisão dos bancos de dados (dbSNP, PharmGKB) e da literatura, buscamos alterações genéticas nos genes mencionados que são comuns na raça branca e afetam a expressão do gene ou a função da proteína escrita. Com base nisso, decidimos incluir os seguintes genes e polimorfismos na análise:

• via de sinalização NO: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• fatores da parede vascular: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); ÁS: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2:rs2285666,rs1978124
• via do folato: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; c. 677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; c.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>G), MTRR: rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• metabolismo do tadalafil: CYP3A4*22 e CYP3A5*3
• alvo de tadalafil: PDE5A: rs12646525, rs3806808