Fattori genetici del grado di disfunzione erettile e risposta al trattamento con tadalafil in pazienti con diabete (EDGEN)

Includeremo nello studio 90 pazienti con diabete e disfunzione erettile. Utilizzeremo il questionario IIEF-5 per confermare la diagnosi di disfunzione erettile. Saranno inclusi nello studio pazienti di età compresa tra 40 e 65 anni che totalizzeranno 21 punti o meno sulla scala IIEF-5.

La ricerca sarà clinica farmacologica, prospettica, interventistica e genetico-associativa. I pazienti saranno selezionati in sequenza, in base alla loro disponibilità a partecipare alla ricerca, tenendo conto dei criteri di inclusione ed esclusione. Di conseguenza, non saranno soggetti a randomizzazione. In occasione della prima visita e dopo aver firmato il consenso informato per la partecipazione alla ricerca, ai pazienti verrà prelevato il sangue per gli esami di laboratorio e di genetica molecolare, verrà loro somministrato il farmaco per il trattamento della disfunzione erettile tadalafil, che riceveranno in forma dose di 5 mg al giorno per un periodo di tre mesi. Dopo tre mesi, i pazienti completeranno nuovamente il questionario IIEF-5.

All'inizio della ricerca spiegheremo il corso e lo scopo della ricerca alle persone coinvolte, che compileranno un modulo di consenso per partecipare alla ricerca. Dopo l'inclusione, eseguiremo quanto segue su tutti gli argomenti:

• Anamnesi ed esame clinico (inclusi peso, altezza e indice di massa corporea). Il grado di disfunzione erettile sarà classificato utilizzando il questionario IIEF-5 in quattro categorie, vale a dire grave (5-7 punti), moderata (8-11 punti), da lieve a moderata (12-16 punti) e forma lieve (17-17 punti). 21 punti) di disfunzione erettile.
• Esami di laboratorio Verrà prelevato sangue venoso periferico per determinare i parametri di laboratorio: funzionalità renale, epatogramma, lipidogramma, HbA1c (TIR), PSA, TSH, LH, FSH, PRL, SHBG, testosterone (totale e libero), acido folico.
• Test genetici molecolari Ai soggetti esaminati verranno prelevati 3-5 ml di sangue venoso periferico in una provetta con EDTA. La centrifugazione separerà il plasma sanguigno dalla parte cellulare del sangue. Il DNA genomico sarà isolato dalla parte cellulare del sangue utilizzando set di reagenti commerciali (DNA Mini Kit e Flexigene DNA kit; Qiagen, Hilden, Germania). Per determinare i polimorfismi dei singoli nucleotidi nei geni della via di sintesi, della funzione NO e della via dei folati, utilizzeremo moderni metodi ad alto rendimento basati sulla reazione PCR in tempo reale, come il test della 5'-esonucleasi (TaqMan SNP genotyping assay ; Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) e reazioni PCR competitive allele-specifiche (saggio KASPar; KBiosciences, Herts, Regno Unito).

I geni candidati sono stati selezionati sulla base di una revisione della letteratura, concentrandosi sui percorsi correlati alla patogenesi molecolare della disfunzione erettile e sui percorsi correlati al metabolismo e all’azione del tadalafil. Sulla base di una revisione dei database (dbSNP, PharmGKB) e della letteratura, abbiamo cercato cambiamenti genetici nei geni menzionati che sono comuni nella razza bianca e influenzano l'espressione del gene o la funzione della proteina scritta. Sulla base di ciò, abbiamo deciso di includere nell'analisi i seguenti geni e polimorfismi:

• via di segnalazione NO: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• fattori della parete vascolare: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); ACE: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2: rs2285666, rs1978124
• via del folato: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; c. 677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; c.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>G), MTRR: rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• metabolismo del tadalafil: CYP3A4*22 e CYP3A5*3
• target del tadalafil: PDE5A: rs12646525, rs3806808