Генетические факторы степени эректильной дисфункции и ответа на лечение тадалафилом у больных сахарным диабетом (EDGEN)

Мы включим в исследование 90 пациентов с диабетом и эректильной дисфункцией. Для подтверждения диагноза эректильной дисфункции мы будем использовать опросник МИЭФ-5. В исследование будут включены пациенты в возрасте от 40 до 65 лет, набравшие 21 балл и менее по шкале МИЭФ-5.

Исследования будут клинически-фармакологическими, проспективными, интервенционными и генетически-ассоциативными. Пациенты будут отбираться последовательно, согласно их готовности участвовать в исследовании, с учетом критериев включения и исключения. В результате они не будут подлежать рандомизации. При первом осмотре и после подписания формы информированного согласия на участие в исследовании у пациентов будет взята кровь для лабораторных и молекулярно-генетических исследований, им будет назначен препарат для лечения эректильной дисфункции тадалафил, который они получат в доза 5 мг ежедневно в течение трех месяцев. Через три месяца пациенты снова заполняют анкету МИЭФ-5.

В начале исследования мы объясним ход и цель исследования участвующим людям, они заполнят форму согласия на участие в исследовании. При включении мы выполним по всем предметам следующее:

• Анамнез и клиническое обследование (включая вес, рост и индекс массы тела). Степень эректильной дисфункции будет классифицирована с помощью опросника МИЭФ-5 на четыре категории: тяжелую (5-7 баллов), среднюю (8-11 баллов), легкую и умеренную (12-16 баллов) и легкую форму (17-16 баллов). 21 балл) эректильной дисфункции.
• Лабораторные исследования. Берут периферическую венозную кровь для определения лабораторных показателей: функция почек, гепатограмма, липидограмма, HbA1c (TIR), ПСА, ТТГ, ЛГ, ФСГ, ПРЛ, ГСПГ, тестостерон (общий и свободный), фолиевая кислота.
• Молекулярно-генетические исследования У обследуемых берут 3-5 мл периферической венозной крови в пробирку с ЭДТА. Центрифугирование отделит плазму крови от клеточной части крови. Геномную ДНК будут выделять из клеточной части крови с использованием коммерческих наборов реагентов (DNA Mini Kit и Flexigene DNA Kit; Qiagen, Hilden, Germany). Для определения полиморфизмов отдельных нуклеотидов в генах пути синтеза, функции NO и фолатного пути мы будем использовать современные высокопроизводительные методы, основанные на реакции ПЦР в реальном времени, такие как 5'-экзонуклеазный тест (TaqMan SNP-genotyping assay ; Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, США) и аллель-специфические конкурентные реакции ПЦР (анализ KASPar; KBiosciences, Herts, Великобритания).

Гены-кандидаты были выбраны на основе обзора литературы с упором на пути, связанные с молекулярным патогенезом эректильной дисфункции, и пути, связанные с метаболизмом и действием тадалафила. На основе обзора баз данных (dbSNP, ФармГКБ) и литературы мы провели поиск генетических изменений указанных генов, общих для белой расы и влияющих на экспрессию гена или функцию записанного белка. Исходя из этого, мы решили включить в анализ следующие гены и полиморфизмы:

• сигнальный путь NO: NOS3: 894G/T (rs1799983), 786T/C (rs2070744)
• факторы сосудистой стенки: VEGF: 460T/C (rs833061), 1154G/A (rs1570360), 2578A/C (rs699947); АСЕ: rs1800764, rs4343, rs1799752; ACE2: rs2285666, rs1978124
• фолатный путь: MTHFR: rs1801133 (p.Ala222Val; c.677 C>T), rs1801131 (p.Glu429Ala; c.1298 A>C), MS: rs1805087 (p.Asp919Gly; c.2756A>G), MTRR: rs1801394 (p.Ala66Gly; 66A>G)
• Метаболизм тадалафила: CYP3A4*22 и CYP3A5*3.
• Цель тадалафила: PDE5A: rs12646525, rs3806808