Bezpečnost/snášenlivost a účinnost AAV-MECP2 AAV-MECP2 u rett syndromu

Zázemí výzkumu:

Rett syndrom (RTT) je vrozená neurodevelopmentální porucha, která ovlivňuje hlavně ženy. Mezi jeho typické klinické projevy zahrnují zastavení nebo dokonce regrese nervového vývoje od 6 do 18 měsíců po narození, ztráta získaných dovedností, jako je poznání, jazyková schopnost a funkce ruky, často doprovázené stereotypnými pohyby rukou, abnormální respirační rytmy, záchvaty a poruchy úzkosti. RTT je vzácné onemocnění s mírou incidence asi 1/10000-15000, o kterém se odhaduje, že je více než 10% duševního postižení žen. Má velký dopad na pacienty a jejich rodiny, s vážným poškozením jejich sociálního fungování a velmi špatnou kvalitou života.

Přibližně 90-95% typických pacientů s RTT a 40-50% atypických pacientů s RTT detekovalo abnormality v genu Mecp2 vazebném proteinu 2 (MECP2), jakož i mutace nebo delece v genu Mecp2. Lidský gen MECP2 je umístěn v XQ28 a jeho kódovaný protein methylovaný protein CPG vazebné protein 2 je členem rodiny methylační domény. Je to transkripční inhibiční faktor, který reguluje sestřih RNA a je klíčovým epigenetickým regulátorem v mozku, což ovlivňuje nervovou funkci. V experimentech na zvířatech bylo zjištěno, že myši s nedostatkem MECP2 vykazovaly významné zlepšení symptomů RTT po obdržení proteinové suplementace MECP2 pomocí technologie genetického inženýrství.

V posledních letech prokázal úspěch genové terapie u neuromuskulárních onemocnění, jako je míšní svalová atrofie (SMA), proveditelnost aplikací technologie genové terapie v lidském těle. Od roku 2021 provedli Taysha a neurogen klinické studie genové terapie pro Rett syndrom. V současné době administrativu dokončily 2 dospělí pacienti s RTT a 3 děti, což prokazuje příznivý bezpečnostní profil. Nebyly předváděny žádné závažné nežádoucí účinky související s léčbou a žádné zprávy o nadměrné expresi MECP2 nebo symptomech.

Profesor Qiu Zilong, vedoucí výzkumný pracovník ve výzkumném institutu Songjiang v Šanghaji Jiao Tong University School of Medicine, provádí dlouhodobý výzkum RTT. V roce 2012 bylo zjištěno, že MECP2 reguluje plasticitu neuronální synaptické homeostázy; V roce 2014 bylo zjištěno, že MECP2 reguluje zpracování sestřihu mikroRNA; Založený v roce 2016 založil MECP2 Transgennic Crab Eating Monkey Animal Model; V roce 2019 byl identifikován nervový mechanismus myší MECP2 a byla pokus o intervenční terapii editace genů; Založte v roce 2022 technologickou mapu Mouse Mouse Mouse Mouse Mouse Mouse Gene Therapy Terapy v roce 2022 a požádat o patent na vynález. Nezávisle se vyvinul AAV-MECP2 významně prodloužil životnost knockoutových myší MeCP2 v experimentech s injekcí laterální komory a terapeutický účinek AAV-MECP2 s promotorem CAG byl výrazně lepší než podobné produkty. Bezpečnost a účinnost intratekálního podávání u opice byla testována po dobu 8 měsíců a krevní rutina, biochemie krve a indikátory imunitního faktoru prokázaly dobrou bezpečnost.

Stručně řečeno, RTT je vážná neurodevelopmentální porucha, která pacientům představuje velkou škodu a v současné době neexistuje účinná metoda léčby. Cílem klinické studie iniciované našimi vědci je vyhodnotit bezpečnost, snášenlivost a předběžnou účinnost AAV-MECP2 při léčbě Rettova syndromu jedinou intratekální injekcí, která má důležitou lékařskou a sociální hodnotu. Bezpečnost a účinnost intratekálního podávání byla testována po dobu 8 měsíců a krevní rutina, biochemie krve a indikátory imunitního faktoru prokázaly dobrou bezpečnost.

Přehled výzkumu:

Celkový návrh výzkumu:

Cílem multicentrického, jednorázového, jediného intratekálního průzkumu dávky AAV-MECP2 iniciované vědci je prozkoumat dvě cílové dávky, přičemž tři subjekty byly zapsány v každé dávce, aby vyhodnotily bezpečnost, snášenlivost a předběžnou účinnost jediné intratekální injekce AAV-MECP2.

Populace studie:

Děti ve věku 4–10 let, které byly diagnostikovány s RTT prostřednictvím konzultací na oddělení neurologického/behaviorálního rozvoje Guangzhou Women and Children's Medical Center a Child Health Department v dětské nemocnici Xiamen.

Testovací umístění:

Výzkumné oddělení žen a dětského lékařského centra, lékařská univerzita Guangzhou

Kritéria ukončení poloviny:

Členové rodiny se mohou po získání informovaného souhlasu stále stáhnout ze studie.

Kritéria pro oddělení/vyloučení:

i. Pacient musí upravit léčbu používaný během studijního období;

Ii. Během studie je nutné užívání léků/léčby, které jsou zakázány ve studii: během studie jsou zakázány následující souběžné léky/léčby:

• Léčiva používaná k léčbě poruch svalů nebo neurodegenerativních onemocnění (s výjimkou antiepileptik).
• Lék používaný k léčbě diabetu.
• Imunosupresivy (jako jsou glukokortikoidy, cyklosporin, takrolimus, methotrexát, cyklofosfamid, intravenózní imunoglobulin, rituximab atd.) Byly zahájeny do 3 měsíců před zařazením.
• Pro ty, kteří před zápisem nepoužívali antiepileptická léčiva nebo rehabilitační plány léčby, použili antiepileptická léčiva nebo po zápisu zavedli plány rehabilitační léčby.

iii. Nelze se zúčastnit léčby v nemocnici po dobu jednoho týdne podle zavedeného medikačního plánu; IV. Po komunikaci a koordinaci času nelze vyhodnocení projektu dokončit; proti. Pokud se během studijního období objeví nějaké nežádoucí účinky, laboratorní abnormality nebo jiné zdravotní stavy a vědci se domnívají, že pokračování v soudním řízení může zvýšit riziko pro subjekty.

Počet účastníků a metody seskupení:

Ve skupině injekce bylo 6 účastníků. Šest subjektů bylo zařazeno do pokusu po sekvenci, přičemž jeden pacient dokončil podávání a žádná významná dávka omezující toxicitu (DLT) pozorované během jedno měsíčního sledování. Druhý subjekt byl zapsán do zkušebního léku.

Definice DLT: Jakákoli z následujících událostí (klasifikovaných podle NCI CTCAE v5.0), které se vyskytují do 30 dnů po podání a jsou výzkumníkem určeny jako pravděpodobně nebo rozhodně související s AAV-MECP2 (viz 4,2 závažnosti nežádoucích událostí): ≥ stupeň 3 nežádoucí události; Laboratorní abnormality úrovně 3 přetrvávají po dobu ≥ 7 dnů s nezbytným lékařským zásahem; Laboratorní abnormalita úrovně 4.

Experimentální lék:

Experimentální léčba: AAV-MECP2 ； Účinná složka: Rekombinantní vektor genové terapie AAV obsahující neuronovou specifickou promotoru (CAG) poháněný MECP2; Příslušenství: 4-hydroxyethylpiperazin Ethanesulfonová kyselina, chlorid draselný, chlorid sodný, chlorid vápenatý, glukóza, poloxamer F68 a voda; Forma dávkování: Intratekální injekce; Vzhled: bezbarvá a průhledná kapalina; Specifikace: nezávisle zabalená láhev penicilinu, s titrem 2 x 1014 Vg/ml a objem 0,5 ml; Správní trasa: Intratekální injekce; Frekvence podávání: 1 čas;

Kroky a metody výzkumu:

1. Metoda intervence: AAV-MECP2, zředěný 20 ml fyziologický solný roztok, dvěma průzkumnými dávkami (dávka 1, dávka 2, podrobná níže), jediná intratekální injekce;

   Dávkování drog:

   Pravidla průzkumu dávky se vyvinula z tradičního „3+3 designu“. Dvě předem nastavené hladiny dávky pro tuto studii jsou: dávka 1 (7 × 1014VG/osoba); Dávka 2 (1,5 × 1015VG/osoba).

   Dvě předem nastavené hladiny dávky v této studii jsou počáteční úroveň dávky dávky 1 a vyšší úroveň dávky dávky 2. Během výzkumného procesu je možné prozkoumat úroveň dávky pod dávkou 1 nebo přechodnou dávku mezi dávkou 1 a dávkou 2 na základě údajů o akumulované bezpečnosti a účinnosti, které jsou předmětem schválení SRC.

   Na úrovni dávky 1 byly nejprve zapsány tři subjekty a poté byl během pozorovacího období DLT pozorován počet subjektů, kteří se vyvinuli DLT mezi těmito třemi subjekty. Na základě počtu subjektů, o nichž bylo pozorováno, že mají DLT, se rozhodněte, zda se zvýšit na další skupinu dávky, udržovat současnou skupinu dávky nebo se snížit na nižší skupinu dávky.

   1. Pokud žádný ze tří subjektů zapsaných v této dávce vyvíjí DLT nebo se vyvíjí pouze jeden subjekt DLT, dávka může být zvýšena na skupinu s vyšší dávkou nebo pokus může být zastaven (pokud je již dávka 2).
   2. Pokud 2 ze 3 subjektů zapsaných v této dávce vyvine DLT, bude správa novým subjektům pozastavena, dokud se SRC nerozhodne; V tomto okamžiku, po komplexním vyhodnocení současných údajů o bezpečnosti a účinnosti, poskytne SRC jednu z následujících tří rozlišení: ① Snižte dávku na nižší dávku a zaregistrují tři hodnotící subjekty; ② Přidejte 3 další hodnotící subjekty do současné dávky; ③ Zastavte experiment.

   SRC je zkratka pro výbor pro přezkum bezpečnosti, odpovědný za přezkoumání údajů o bezpečnosti předmětů, složených z vědců a spolupracujících lékařských monitorů. Během výzkumného procesu je SRC zodpovědný za ochranu bezpečnosti subjektů a jeho povinnosti jsou následující:

   Zkontrolujte bezpečnostní problémy každého účastníka; Pravidelně kontrolujte údaje o bezpečnosti, zatímco subjekty nadále dostávají studijní léčbu; Vyhodnoťte, zda je nutné rozšířit počet subjektů v každé fázi a zda je možné postoupit do další fáze dávky, včetně eskalace dávky nebo snížení dávky; Udržujte údaje o výzkumu a výsledky důvěrné.

2. Řízení léků:

U všech přijatých výzkumných intervenčních produktů musí výzkumný pracovník nebo určený personál potvrdit, že během přepravy jsou udržovány vhodné teplotní podmínky a jakékoli nesrovnalosti byly hlášeny a vyřešeny před použitím výzkumných intervenčních produktů. Tento výzkumný produkt je zabalen do penicilinových lahví a přepravován suchým ledem. Po jeho obdržení jej výzkumné centrum ukládá na -75 ± 15 ℃.

Intervence výzkumu mohou přijímat pouze zapsané subjekty a pouze zaměstnanci autorizovaného výzkumného centra mohou poskytnout nebo spravovat výzkumné zásahy. Všechny výzkumné intervence musí být uloženy v bezpečné, ekologicky kontrolované a monitorované (ručně nebo automaticky) oblasti podle uvedených podmínek skladování a přístup k této oblasti mají přístup pouze vědci a zaměstnanci autorizovaného výzkumného centra.

Výzkumný pracovník nebo manažer drog ve výzkumném středisku bude počítat a ověřit produkty výzkumu intervence a udržovat relevantní záznamy (tj. přijímání a ověření záznamů a záznamů o konečné likvidaci).

Hodnocení výzkumu:

Výzkumný program a jeho rozvrh lze nalézt v „výzkumném rozvrhu“. Tato tabulka uvádí všechna hodnocení a používá „X“ k reprezentaci hodnocení provedených při každé návštěvě. Pokud subjekt není schopen jít do zkušebního centra ze zvláštních důvodů, může předmět nebo jejich právní zástupce kontaktovat zaměstnance zkušebního centra jinými alternativními prostředky (jako je telefon nebo virtuální video). Během komunikace by měly být shromažďovány podrobnosti o nežádoucích účincích a doprovodných lécích. Během tohoto období se účastníci nemusí účastnit laboratorních testů a klinických hodnocení stanovených během návštěvy studie, ale všechny relevantní informace by měly být podrobně zaznamenány. Pokud jsou shromažďovány laboratorní údaje subjektů nebo jsou prováděna klinická hodnocení prostřednictvím alternativních metod, měly by být podrobně zaznamenány relevantní informace.

Opatření primárního výsledku: Bezpečnostní ukazatele

1. Demografie/lékařská historie:

   i. Současná anamnéza: včetně diagnostického základu, souvisejících příznaků, vývojové historie, současného a minulého stavu léčby léčby/zotavení atd.; ii. Historie jiných vnitřních nebo chirurgických onemocnění (zejména alergie na drogy, trauma páteře atd.); iii. Abnormality v gestačním věku a prenatálních zkouškách; IV. Předchozí hospitalizace od narození, včetně trvání hospitalizace, důvodů, přijaté léčby a progrese onemocnění; Pokud je to možné, poskytněte informace o kódování ICD-10 pro každou diagnózu hospitalizace; v. Rodinná historie

2. Fyzikální vyšetření:

   i. Při určených návštěvách musí být provedeno a zaznamenáno generální fyzikální vyšetření včetně neurologického vyšetření, které by mělo zahrnovat alespoň následující obsah: hlava/krk, oči, uši, nos/krk, kardiovaskulární systém, plíce, břicho, muskuloskeletální systém, centrální nervový systém a kůže.

   ii. Vitální příznaky, výška a hmotnost: Před měřením vitálních příznaků by se subjekty měly spočívat v klidném a nerušeném prostředí po dobu nejméně 3 minut a poté měřit v polově poloze na zádech, včetně tělesné teploty, systolického a diastolického krevního tlaku, respirační frekvence, pulsu a nasycení kyslíku v krvi.

   iii. Po intratekální injekci AAV-MECP2 lež po dobu 6 hodin s odstraněným polštářem a měří a zaznamenává krevní tlak, rychlost dýchacích cest, puls a saturace kyslíkem každých 15 minut (± 5 minut); Poté sledujte výše uvedené ukazatele každou hodinu (± 15 minut) do 6 hodin po intratekální injekci AAV-MECP2.

   IV. Během období screeningu je třeba měřit výšku a měřena hmotnost při určených návštěvách.

3. Laboratorní vyšetřování ： i. Rutina moči: Specifická hmotnost, hodnota pH, glukóza, protein, krev, tělesa ketonu, bilirubin, urobilinogen, dusitan, leukocyty esteráza (metoda zkušební papír), mikroskopické vyšetření (pokud jsou výsledky testů krve nebo proteinu abnormální).

   ii. Krevní rutina: Počet červených krvinek, hemoglobin, počet destiček, počet bílých krvinek a počet klasifikace, hematokrit, průměrný objem korpusku, střední koncentrace korpuskulárního hemoglobinu a počet retikulocytů; iii. Biochemie krve: aspartát aminotransferáza (AST), alanin aminotransferáza (ALT), gama glutamyl defferáza (GGT), alkalinová fosfatáza (ALP), celkový bilirubin, přímý bilirubin, celkový protein, kreatinin, močovinový dusík, calcium.

   IV. Spektrum enzymu myokardu: kreatinová kináza (CK), isoenzym kreatinové kinázy (CK-MB), hydroxybutyrát dehydrogenáza (HBDH), laktát dehydrogenáza (LDH) a vysoká senzitivita I (HSTNI).

   v. Funkce koagulace: Aktivovaná částečná doba tromboplastinu (APTT), čas protrombinu (PT), čas trombinu (TT), fibrinogen (FG, FIB) a D-Dimer.

   vi. Imunitní funkce: Počet subpopulace lymfocytů periferní krve:%CD3 、%CD4 、%CD8 、 CD4/CD8 、%CD19 、%CD16CD56 ； Systém komplementu: Celková aktivita komplementu (CH50), aktivita C3 a kvantifikace, aktivita a kvantifikace C4.

   vii. Sérové ​​cytokiny zahrnují: TNFa 、 IFN-y 、 IL-10 、 IL-10.

4. Elektrokardiogram (EKG): Konvenční 12 EKG se získá pomocí zařízení EKG, které může automaticky vypočítat srdeční frekvenci a měřit intervaly PR, QRS, QT a QTC.
5. Echokardiografie: Během screeningového období bude naplánováno vyloučení potenciálních srdečních lézí a srdeční dysfunkce echokardiografické vyšetření transthorakální barvy. Vyšetření bylo interpretováno a analyzováno ultrazvukovými lékaři a kardiology ve výzkumném centru.
6. Rentgen hrudníku: Během screeningového období se rentgenové vyšetření hrudníku provádí hlavně za účelem vyloučení plicních infekcí, které se často vyskytují u pacientů. Pokud je obtížné vytvořit jasnou diagnózu na obyčejném filmu, se souhlasem opatrovníka subjektu lze provést další skenování hrudníku CT.
7. MRI hlavy: Během screeningového období je nutné skenování hlavy MRI pro detekci jakýchkoli anatomických abnormalit nebo jiných lézí centrálního nervového systému, které je třeba vyloučit. K vyhodnocení toxicity spojené s injekcí AAV-MECP2 a monitorování vývoje centrálního nervového systému byly použity dvě hlavové skenování MRI.

Měření sekundárního výsledku: Vyhodnocení účinnosti

1. Specifická klinická globální dojmy měřítko Specifická váha (CGI-S) a Clinical Global Impressions Scale Improvement (CGI-I);
2. Dotazník hodnocení závažnosti Rett (RSS);
3. Dotazník chování syndromu Rett (RSBQ);
4. Revidované hodnocení motorického chování (R-MBA);
5. Stupnice funkce ruční funkce Rett (RSHFS);
6. Dotazník pro dětské spánkové návyky;
7. Dotazník stresu Rett Rodinoving;
8. Griffiths Development Aclating Scale - Čínská verze (GDS -C): Jako hodnocení platnosti se používá pouze relativní vývojový věk. Pokud je věk starší 8 let a schopnost je mladší 6 let, hodnocení GDS-C se stále používá;
9. Měřítko pozorování chování autismu (ADOS);
10. Měřítko hodnocení adaptivního chování pro děti ve věku 0-6 (druhé vydání) - Formulář hodnocení rodičů;
11. Aberantní měřítko chování (ABC);

12. Epilepsy záznamy: Během studie byli předmětem strážci subjektů povinni zaznamenat výskyt záchvatů, včetně všech dat se záchvaty a bez nich, včetně prezentace, trvání, frekvence a datum záchvatů. Vezměte si to s sebou při každé následné návštěvě pro vědce, abyste posoudili frekvenci a trvání epileptických záchvatů.

    Frekvence epileptických záchvatů bude definována pomocí uspořádaných proměnných s pěti kategoriemi: zvýšení, žádná změna, 75% remise, 50% remise a žádné záchvaty.

13. Video důkazy: Krátké videozáznamy budou provedeny z procesu hodnocení subjektů během výchozího období, období hospitalizace léků a 1, 3, 6 a 12 měsíců po injekci. Pokud dojde k abnormálnímu chování jindy, mohou se vědci také rozhodnout přidat video důkazy. Rodiče/zákonní zástupci mohou také poskytovat domácí videa se zlepšenými funkcemi zobrazení. Po dokončení nahrávání výzkumný tým okamžitě nahraje video do šifrovaného počítače nebo notebooku a smaže video soubor z karty pro úložiště fotoaparátu. Jakékoli video obdržené spolupracující stranou bude považováno za důvěrné údaje o výzkumu. Výzkumný tým a partneři budou zodpovědní za ochranu informací o identitě předmětů a jejich rodičů/zákonných zástupců při nahrávání videa.
14. Elektroencefalogram (EEG);
15. Nositelný náramek: Zaznamenejte podmínky spánku;
16. Růstový diferenciační faktor 11 (GDF11) v mozkomíšní mozkové tekutině a krvi: sekretovaný protein transformujícího růstového faktoru - β (TGF - β) nadrodiny, hlavně exprimovaný v mozkové tkáni a negativně reguluje neurogenezi během vývoje a dospělosti. Mutace v GDF11 mohou vést k vývojovým abnormalitám zahrnujícím kraniofaciální, páteřní a nervové systémy. Nedávné důkazy naznačují, že gen GDF11 je jedním z cílových genů regulovaných MECP2: MECP2 downreguluje expresi GDF11 indukcí histonové methylace enhanceru GDF11. U myší RTT se exprese GDF11 snížila; Naopak, u MDS myší se exprese GDF11 zvýšila.

Předchozí studie ukázaly, že GDF11 je vylučován mozkovou tkáni a může být detekován v krvi. Tento experiment proto prozkoumá změny hladin GDF11 v krvi před a po léčbě.

Hodnocení imunogenity:

Za účelem vyhodnocení humorálních a buněčných imunitních odpovědí vyvolaných kapsidem AAV9 po podání byla pro detekci protilátky protilátek ANI-AAV9 (metoda ELISA) shromažďována periferní krev (IFN-enzym-monozorovaná krev na izolované periplinované buňky, které monozovanou krví, mononózované buňky, mononózované buňky, mononózované buňky, mononózované buňky, mononózované buňky, které mononózované krevní mononózy mononózované krve, mononózované krve-mononózované buňky. Elispot). Imunogenní vzorky krve byly odeslány do určených laboratoří třetích stran pro testování.

Profylaktické ústní podání prednisolonu:

Podává se orálně 24 hodin před léčbou a udržována podle pravidel pro dávkování a stažení až do 9. týdne po léčbě.

Téměř všechna léčiva genové terapie používané v lidském těle, bez ohledu na cestu podávání, pozorovaly antigen-specifické reakce T buněk 2-4 týdny po podání. Potenciálními nepříznivými důsledky této reakce jsou clearance imunitně zprostředkovaných transdukovaných buněk a ztráta transgenní exprese.

Aby se zmírnila imunitní odpověď těla na léky na genovou terapii AAV, musí subjekty užívat profylaktické orální kortikosteroidy a před příchodem injekci používat prednisolon 24 hodin.

Během používání glukokortikoidů by se měly provádět pravidelné kontroly jater, aby se určilo, zda léky lze snížit nebo zastavit na základě indikátorů jater. Pokud jsou hodnoty GGT, AST nebo ALT ≥ 2 × Uln, musí vědci poskytnout odpovídající léčbu založenou na individuální situaci subjektů. Na základě předchozích klinických zkušeností s užíváním léčiva AAV je vysoce rizikové období odrazu jaterního enzymu do 2 týdnů od redukce nebo přerušení hormonů. Během této fáze by proto mělo být posíleno monitorování funkcí jater. Pro výše uvedený plán používání a redukce prednisolonu mohou vědci provést personalizované úpravy na základě hodnocení bezpečnosti subjektů. Kromě funkce jater je třeba zvážit také monitorování výsledků periferní krve antigen-specifických T buněk a v případě potřeby mohou být přidány další imunosupresivní látky. Pokud použité glukokortikoidy jsou jiné přípravy než prednisolon, měl by být plán dávkování a stažení formulován na základě ekvivalentní dávky prednisolonu po přeměně.

Informovaný souhlas:

Děti mladší 8 let, které se účastní klinických hodnocení, by měly od svého opatrovníka získat podepsaný formulář informovaného souhlasu a měly by být informovány o relevantních informacích o klinickém hodnocení v rámci rozsahu, kterému subjekty mohou rozumět. Pokud má dítě schopnost rozhodnout se souhlasit s účastí na klinickém hodnocení, měl by být také získán jejich vlastní souhlas; Děti starší 8 let (včetně 8 let), které se účastní klinických hodnocení, pokud mají schopnost podepsat formulář informovaného souhlasu, měli by jak i jejich strážci, podepsat formulář informovaného souhlasu. Pokud nemají schopnost podepsat formulář informovaného souhlasu, měli by jejich strážci podepsat formulář informovaného souhlasu.

Nepříznivé lékařské události a léčby jiné než souběžné:

Léky/léky, které se vyskytují z podpisu formuláře informovaného souhlasu, dokud nebude první podávání zaznamenána jako lékařská anamnéza/komorbidity a historii léčby v ECRF, a nesmí být zaznamenány na stránce AE a doprovodné stránce léčby/léčby; Pokud není poškození/poškození způsobeno postupy klinického laboratorního vyšetření, musí být zaznamenáno jako AE na stránce AE a pro jiné léčby jiné než souběžné léky/léky pro tuto AE, budou zaznamenány na souběžné stránce léčby/léčby odpovídajícím způsobem.

Specifická technická trasa je podrobně popsána v rozvrhu výzkumu.

Očekávané nežádoucí účinky a metody léčby:

Mezi rizika spojená s účastníky této studie patří hlavně rizika související s postupy pro správu léčiva (vpichová pochva), rizika související s vyšetřovacím léčivem AAV-MECP2 a rizika související s profylaktickou imunosupresí.

Rizika spojená s injekcí pochvy:

1) Injekce pochvy je obecně považována za bezpečné a vybrané subjekty podstoupí hlavovou magnetickou rezonanci (MRI) skenování (MRI) před bederní punkcí, aby se vyloučila možnost intrakraniálního prostoru zabírajícího lézí (zejména v zadní fosse) nebo zvýšené intrakraniální tlak. Možná rizika bederní vpichu zahrnují následující: i. Bolest hlavy po bederní punkci: Pacienti podstupující bederní punkci zážitek hlavy v důsledku infiltrace tekutin do blízkých tkání po punkci. Bolesti hlavy obvykle začínají během několika hodin až dvou dnů po operaci a mohou být doprovázeny nevolností, zvracení a závratě. Bolesti hlavy se obvykle vyskytují při sezení nebo stojícím a mohou být při ležení uleveny. Bolesti hlavy po bederní punkci mohou trvat několik hodin až týden nebo déle.

ii. Nepohodlí nebo bolest v zádech: v dolní části zad může být bolest nebo něha. Bolest se může rozšířit na zadní stranu nohy.

iii. Krvácení: krvácení poblíž místa propíchnutí, nebo ve vzácných případech se může vyskytnout v epidurálním prostoru.

Podávání drog v této studii bylo provedeno kvalifikovanými lékaři v nemocniční léčebné místnosti. Před injekcí byla oblast injekce dezinfikována a pokryta látkou. Po injekci byla provedena dezinfekce a kompresní hemostáza a pacient byl na lůžko po dobu 6 hodin s odstraněním polštáře. Po operaci budou subjekty pečlivě sledovány, aby se zajistilo, že jakékoli možné komplikace budou včas detekovány a léčeny.

Rizika spojená s AAV-MECP2:

Subjekt může zažít alergické reakce na AAV-MECP2. Vzhledem k imunitní odpovědi vyvolané intratekální injekcí AAV nejsou subjekty obvykle schopny dostávat jiné genové terapie dodávané vektory AAV stejného sérotypu.

V současné době existují tři klinické hodnocení (NCT05317780, NCT05419492 a NCT04833970) na klinických potížích. Web pro podávání léků AAV do boční komory pro onemocnění centrálního nervového systému, ale klinická data o bezpečnosti nebo účinnosti dosud nebyla zveřejněna. AVXS-101 je intratekální verze genové terapie SMA Zolgensma. Studie eskalace dávky fáze 1 provedená u subjektů ve věku 6-60 měsíců ukázala, že AVXS-101 byl bezpečný a dobře tolerován, když byl podáván intratekálně při maximální dávce 2,4 x 1014 Vg/osoby, přičemž pouze jeden subjekt trval zvýšenou hladinu transaminázy bez bilirubinu; Jeden subjekt zažil trombocytopenii (počet pod 75 × 109/l), který spontánně vyřešil bez zásahu.

Následující shrnuje závažné nežádoucí účinky (události) uvedené v lécích AAV, které byly na trh nebo v klinických hodnoceních:

1. Hepatotoxicita. Hlášeno o intravenózní injekci léků AAV pro léčbu SMA, Duchenneovy svalové dystrofie (DMD) a XLMTM) a XLMTM). Výskyt hepatotoxicity je významně korelován s dávkováním podávané léčivo a závažné případy hepatotoxicity jsou pozorovány pouze u subjektů, kteří dostávají dávky AAV> 5 × 1013VG. S výjimkou toxicity jater u XLMTM, která je považována za související se základním onemocněním jater pacienta, je publikovaný mechanismus dalších případů toxicity jater považován za poškození jaterních buněk zprostředkovaných CD8+T buňkami zaměřenými na AAV.
2. Trombotické mikrovaskulární onemocnění. Výskyt této události je hlášen při léčbě SMA a DMD intravenózní injekcí AAV léčiv, a všechny případy byly subjekty, které dostávaly dávky AAV ≥ 5 x 1013VG. Vzhledem k přítomnosti laboratorních důkazů o aktivaci komplementu v mnoha z těchto případů se má za to, že jejich výskyt souvisí s aktivací systému komplementu komplexy antigenové protilátky zaměřené na AAV.
3. Myokarditida a myositida. Hlásili pouze intravenózní injekci léků AAV v DMD. Na základě specifického vzorce mutace genu DMD, doby nástupu a reakce na imunosupresivní terapii přítomnou v případě, se spekulovalo, že podstatou takových toxických událostí je imunitní reakce těla na geneticky modifikovaný produkt „Mini anti svalový atrofický protein“.
4. Toxicita dorzální kořenové ganglion (DRG). Toxicita DRG s klinickými projevy (abnormální pocit ruky a nohou) byla hlášena pouze u jednoho pacienta s familiární laterální sklerózou (ALS). Tento případ obdržel intratekální dávku 4,2 x 1014 VG léku AAV. Toxicita DRG hlášená v jiných studiích byla náhodně objevena během pitvy léčivých subjektů AAV a subjekty neměly žádné relevantní klinické projevy před jejich smrtí.
5. Abnormální mozek MR signály. Klinická studie byla hlášena o léčbě pozdního infantilního bojového onemocnění (CLN2 onemocnění) bilaterální mozkový parenchymální injekcí léků AAV při stereotaxické lokalizaci. Během 48 hodin po injekci vykazoval mozek hlavy subjektu MR hlavu MR t2 hyperintenzitu, difúzi váženou hyperintenzitu a difúzní omezené signály lokalizované do místa injekce. Následné následné sledování ukázalo, že všechny subjekty vyvinuly nové oblasti signálu T2. Vědci nenalezli žádné klinické následky spojené s abnormálními MR signály. Spekuluje se, že abnormální signály MR, které se objevují brzy po podání, souvisejí s trvalým tkáňovým otokem/zánětem způsobeným nejvyšší koncentrací léků AAV kolem injekčního katétru, zatímco vysoká signály T2, které se objeví později, jsou obtížné určit, zda souvisí s progresí onemocnění, léky AAV nebo injekčními postupy.

Studie vzorků pacienta (1 rok po podání) a nehumánní primáty (1 měsíc po injekci) ukázaly, že pravděpodobnost integrace AAV do genomu je nízká. Na základě bezpečnostního záznamu AAV v klinických studiích je současná konsenzus v oblasti genové terapie, že AAV má u lidí nízkou genetickou toxicitu.

Předběžná hodnocení předklinické bezpečnosti AAV-MECP2 u humanizovaných RTT myší a krabů, které konzumují makaky, ukázaly, že AAV-MECP2 nezpůsobila poškození játra nebo ledviny, poškození nervů, imunitní toxicitu nebo histopatologické změny u důležitých orgánů u zvířat a obecný stav zvířat byl dobrý. Stávající data AAV-MECP2 proto neznamenají jasná klinická rizika. Nejběžnější nežádoucí událostí očekávanou u subjektů dostávajících AAV-MECP2 může být zvýšení enzymů jater stupně 1/2.

Rizika spojená s preventivní imunosupresí:

Tento protokol stanoví, že od jednoho dne před podáním AAV-MECP2 by měla být zahájena perorální podávání 1 mg/kg prednisolonu nebo ekvivalentní dávky jiných glukokortikoidů a dávka by měla být udržována po dobu nejméně 30 dnů před pomalým snížením. Účelem použití glukokortikoidů je potlačit vrozené a získané imunitní odpovědi vyvolané vektory AAV a snížit imunitní reakce, které jsou škodlivé pro bezpečnost a účinnost. Při používání hormonů budou u subjektů monitorovány nežádoucí účinky související s hormony, včetně oportunistických infekcí.

Corticosteroids (such as methylprednisolone and prednisone) have several clear side effects, including hypertension, tachycardia, congestive heart failure, changes in serum electrolytes, hyperglycemia, pain, elevated urea nitrogen and creatinine, osteoporosis and ischemic necrosis, decreased anti infective ability, dizziness, tremors, emotional instability, insomnia, Nevolnost, zvracení, přírůstek hmotnosti, zvýšený nitrooční tlak a indukce katarakty.

Během používání hormonů budou vědci pečlivě sledovat výše uvedené nežádoucí účinky, zejména oportunní infekce, ke kterým může dojít u subjektů.

Statistická analýza Tato studie je studie včasného průzkumu dávky s hlavním cílem hodnocení bezpečnosti, proto nebyl proveden žádný formální výpočet velikosti vzorku.

Bezpečnost a snášenlivost léčby jsou hodnocena na základě frekvence a závažnosti nežádoucích účinků, ke kterým dochází do jednoho roku po podání. Podíl subjektů s jakýmkoli AE, jakýmkoli SAE, jakýmkoli AE souvisejícím s vyšetřovacím lékem a jakýmkoli ≥ AE stupně 3 bude statisticky analyzován jako celek a podle tříd systémových orgánů (SOC) a preferovaného termínu (PT). Výskyt nežádoucích účinků v různých kohortách dávky bude také statisticky analyzován samostatně.

Vzhledem k malé velikosti vzorku a možnosti měnící se ukazatele účinnosti u subjektů v různých stádiích onemocnění jsou všechny analýzy účinnosti v této studii popisné a nezahrnují inferenciální statistiky.