Einzeldosis AAV-MECP2-Sicherheits- und Wirksamkeit beim Rett-Syndrom

Forschungshintergrund:

Das Rett -Syndrom (RTT) ist eine angeborene neurologische Entwicklungsstörung, die hauptsächlich Frauen betrifft. Zu den typischen klinischen Manifestationen gehören die Beendigung oder sogar die Regression der neuralen Entwicklung von 6 bis 18 Monaten nach der Geburt, Verlust erworbener Fähigkeiten wie Erkenntnis, Sprachfähigkeit und Handfunktion, die häufig von stereotypen Handbewegungen, abnormalen Atemwegsrhythmen, Anfällen und Angststörungen begleitet werden. RTT ist eine seltene Krankheit mit einer Inzidenzrate von etwa 1/10000-15000, die schätzungsweise mehr als 10% der weiblichen geistigen Behinderung ausmacht. Es hat einen großen Einfluss auf die Patienten und ihre Familien, mit schweren Schäden an ihrer sozialen Funktionen und einer sehr schlechten Lebensqualität.

Ungefähr 90-95% der typischen RTT-Patienten und 40-50% der atypischen RTT-Patienten haben Abnormalitäten in der Methylierungs-CPG-Bindungsprotein 2 (mecp2) -Codierungsgen sowie Mutationen oder Deletionen im MECP2-Gen nachgewiesen. Das menschliche MECP2 -Gen befindet sich in XQ28, und sein kodiertes methyliertes CPG -Bindungsprotein 2 ist ein Mitglied der Methylierungsdomänenfamilie. Es ist ein transkriptionshemmender Faktor, der das RNA -Spleißen reguliert und ein wichtiger epigenetischer Regulator im Gehirn ist, der die neuronale Funktion beeinflusst. In tierischen Experimenten wurde festgestellt, dass MECP2 -mangelhafte Mäuse nach Erhalt einer MECP2 -Proteingänzung durch die Gentechnik -Technologie eine signifikante Verbesserung der RTT -Symptome aufwiesen.

In den letzten Jahren hat der Erfolg der Gentherapie bei neuromuskulären Erkrankungen wie der Muskelatrophie (SMA) der Wirbelsäule der Machbarkeit der Anwendung der Gentherapie -Technologie im menschlichen Körper gezeigt. Seit 2021 haben Taysha und Neurogen klinische Studien zur Gentherapie für das Rett -Syndrom durchgeführt. Derzeit haben 2 RTT -Patienten für Erwachsene und 3 Kinder die Verabreichung abgeschlossen, was ein günstiges Sicherheitsprofil aufweist. Es gab keine schwerwiegenden unerwünschten Ereignisse im Zusammenhang mit Behandlungen und keine Berichte über die MECP2-Überexpressionstoxizität oder die Symptome.

Professor Qiu Zilong, leitender Forscher am Songjiang Research Institute der Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, hat langfristige Forschung zu RTT durchgeführt. Im Jahr 2012 wurde festgestellt, dass MECP2 die neuronale synaptische Homöostase -Plastizität reguliert; Im Jahr 2014 wurde festgestellt, dass MECP2 die microRNA -Spleißverarbeitung reguliert. Etabliertes mecp2 transgener Krabben -Affentiermodell im Jahr 2016; Im Jahr 2019 wurde der neuronale Mechanismus von MECP2 -Mäusen identifiziert und eine Interventionstherapie der Genbearbeitung versucht; Erstellen Sie im Jahr 2022 eine MECP2 Mutante Maus AAV -Gentherapie -Technologie und beantragen Sie ein Erfindungspatent. Das unabhängig entwickelte AAV-MeCP2 verlängerte die Lebensdauer von MECP2-Knockout-Mäusen in lateralen Ventrikel-Injektionsexperimenten, und die therapeutische Wirkung von AAV-MeCP2 mit CAG-Promotor war signifikant besser als ähnliche Produkte. Die Sicherheit und Wirksamkeit der intrathekalen Verabreichung im Affen wurde seit 8 Monaten getestet, und Blutroutine, Blutbiochemie und Immunfaktorindikatoren haben alle eine gute Sicherheit gezeigt.

Zusammenfassend ist RTT eine schwerwiegende neurologische Entwicklungsstörung, die den Patienten großen Schaden angibt, und es gibt derzeit keine wirksame Behandlungsmethode. Die von unseren Forschern initiierte klinische Studie zielt darauf ab, die Sicherheit, Verträglichkeit und vorläufige Wirksamkeit von AAV-MECP2 bei der Behandlung des Rett-Syndroms durch eine einzige intrathekale Injektion zu bewerten, die einen wichtigen medizinischen und sozialen Wert hat. Die Sicherheit und Wirksamkeit der intrathekalen Verabreichung wurde seit 8 Monaten getestet, und Blutroutine, Blutbiochemie und Immunfaktorindikatoren haben alle eine gute Sicherheit gezeigt.

Forschungsübersicht:

Gesamtforschungsdesign:

Eine multizentrische, einzelne ARM-, Einzelintrathekal-Dosis-Explorationsstudie von AAV-MeCP2, die von Forschern initiiert wurde, zielt darauf ab, zwei Zieldosen zu untersuchen, wobei drei Probanden bei jeder Dosis eingeschlossen sind, um die Sicherheit, die Tolerierbarkeit und die vorläufige Wirksamkeit einer einzelnen intrathekalen Injektion von AAV-MecP2 bei der Behandlung von RTT zu bewerten.

Studienpopulation:

Kinder im Alter von 4 bis 10 Jahren, bei denen RTT durch Beratung in der Abteilung für Frauen- und Kindermedizinische Zentrum von Neurology/Behavioural Development of Guangzhou und im Kinderkrankenhaus für Kindergesundheit des Kindergesundes diagnostiziert wurde.

Testort:

Forschungsstation des medizinischen Zentrums für Frauen und Kinder, Guangzhou Medical University

Ausgangskriterien auf halbem Weg:

Familienmitglieder können sich nach Erhalt einer Einverständniserklärung weiterhin aus der Studie zurückziehen.

Kriterien für Ablösung/Ausschluss:

ich. Der Patient muss die während des Untersuchungszeitraums verwendeten Behandlungsmedikamente anpassen.

Ii. Während der Studie ist die Verwendung von Arzneimitteln/Behandlungen, die aus der Studie verboten sind, erforderlich: Während der Studie sind die folgenden damit verbundenen Medikamente/Behandlungen verboten:

• Medikamente zur Behandlung von Muskelstörungen oder neurodegenerativen Erkrankungen (ohne Antiepileptika).
• Ein Medikament zur Behandlung von Diabetes.
• Immunsuppressiva (z.
• Für diejenigen, die vor der Einschreibung keine Antiepileptika oder Rehabilitationsbehandlungspläne angewendet haben, haben sie Antiepileptikum oder Rehabilitationspläne nach der Einschreibung umgesetzt.

III. Laut dem festgelegten Medikamentenplan kann eine Woche lang nicht in der Lage sein, eine Woche im Krankenhaus teilzunehmen; iv. Nach der Kommunikation und Koordination der Zeit kann die Projektbewertung nicht abgeschlossen werden. v. Wenn unerwünschte Ereignisse, Laboranomalien oder andere Erkrankungen während des Untersuchungszeitraums auftreten und geeignete Maßnahmen ergriffen werden, sind die Forscher der Ansicht, dass die Fortsetzung des Versuchs das Risiko für die Probanden erhöhen kann.

Anzahl der Teilnehmer- und Gruppierungsmethoden:

Es gab 6 Teilnehmer in der Injektionsgruppe. Sechs Probanden wurden in der Sequenz in die Studie eingeschlossen, wobei ein Patient die Verabreichung abgeschlossen hat und keine signifikante Dosisbegrenzung der Toxizität (DLT) während eines einmonatigen Nachbeobachtung beobachtet wurde. Das letztere Subjekt wurde in die Versuchsmedikamente eingeschrieben.

DLT-Definition: Eine der folgenden Ereignisse (nach NCI CTCAE v5.0 bewertet), die innerhalb von 30 Tagen nach der Verabreichung auftreten und vom Forscher als möglicherweise oder definitiv mit AAV-MECP2 bezogen werden (siehe 4.2 unerwünschte Ereignisschwere): ≥ Grad 3 negatives Ereignis; Stufe 3 Laboranomalien bestehen bei notwendigen medizinischen Interventionen für ≥ 7 Tage; Stufe 4 Laboranomalie.

Experimentelles Medikament:

Experimentelles Medikament: AAV-MecP2 ； Wirkstoff: Rekombinantes AAV-Gentherapievektor, der neuronspezifische Promotor (CAG) -Mecp2 enthält; Zubehör: 4-Hydroxyethylpiperazin-Ethanesulfonsäure, Kaliumchlorid, Natriumchlorid, Calciumchlorid, Glukose, Poloxamer F68 und Injektionswasser; Dosierungsform: Intrathekale Injektion; Aussehen: farblose und transparente Flüssigkeit; Spezifikation: Unabhängig verpackte Penicillin -Flasche mit einem Titer von 2 × 1014 Vg/ml und einem Volumen von 0,5 ml; Verwaltungsroute: Intrathekale Injektion; Verwaltungsfrequenz: 1 Mal;

Forschungsschritte und Methoden:

1. Interventionsmethode: AAV-MECP2, verdünnt mit 20 ml physiologischer Kochsalzlösung, zwei explorative Dosen (Dosis 1, Dosis 2, detailliert), einzelne intrathekale Injektion;

   Drogendosis:

   Die Dosis -Explorationsregeln haben sich aus dem traditionellen "3+3 -Design" entwickelt. Die beiden voreingestellten Dosisspiegel für diese Studie sind: Dosis 1 (7 × 1014 VG/Person); Dosis 2 (1,5 × 1015 VG/Person).

   Die beiden voreingestellten Dosis in dieser Studie sind der anfängliche Dosisspiegel der Dosis 1 und ein höherer Dosis von Dosis 2. Während des Forschungsprozesses ist es möglich, einen Dosisspiegel unter der Dosis 1 oder einer Zwischendosis zwischen der Dosis 1 und der Dosis 2 basierend auf akkumulierten Sicherheits- und Wirksamkeitsdaten zu untersuchen.

   In der Dosis 1 wurden zuerst drei Probanden aufgenommen, und dann wurde während der DLT -Beobachtungszeit die Anzahl der Probanden beobachtet, die DLT unter den drei Probanden entwickelten. Basierend auf der Anzahl der beobachteten Probanden, bei denen DLT beobachtet wurde, entscheiden Sie, ob die nächste Dosisgruppe zunehmen, die aktuelle Dosisgruppe beibehalten oder auf eine niedrigere Dosisgruppe abnehmen sollen.

   1. Wenn keiner der drei an dieser Dosis eingeschriebenen Probanden DLT entwickelt oder nur ein Thema DLT entwickelt, kann die Dosis auf eine höhere Dosisgruppe erhöht werden oder der Versuch kann gestoppt werden (wenn sie bereits Dosis 2 ist).
   2. Wenn 2 der drei an dieser Dosis eingeschriebenen Probanden die DLT entwickeln, wird die Verwaltung für neue Probanden ausgesetzt, bis SRC eine Entscheidung trifft. Zu diesem Zeitpunkt wird SRC nach einer umfassenden Bewertung der aktuellen Sicherheits- und Wirksamkeitsdaten eine der folgenden drei Auflösungen bereitstellen: ① Die Dosis auf eine niedrigere Dosis reduzieren und drei bewertbare Probanden einschreiben; ② 3 zusätzliche bewertbare Probanden zur aktuellen Dosis hinzufügen; ③ Stoppen Sie das Experiment.

   SRC steht für das Sicherheitsüberprüfungsausschuss, das für die Überprüfung von Sicherheitsdaten von Probanden, die aus Forschern und Zusammenarbeit mit medizinischen Monitoren zuständig ist. Während des Forschungsprozesses ist SRC für den Schutz der Sicherheit der Probanden verantwortlich, und ihre Verantwortlichkeiten sind wie folgt:

   Überprüfen Sie die Sicherheitsprobleme jedes Teilnehmers; Überprüfen Sie regelmäßig Sicherheitsdaten, während die Probanden weiterhin eine Studienbehandlung erhalten. Bewerten Sie, ob es notwendig ist, die Anzahl der Probanden in jeder Phase zu erweitern und ob es möglich ist, in die nächste Dosisstufe fortzufahren, einschließlich einer Dosiskalation oder einer Dosisreduktion; Behalten Sie Forschungsdaten und Ergebnisse vertraulich.

2. Drogenmanagement:

Für alle erhaltenen Produkte für Forschungsinterventionen muss der Forscher oder das ausgewiesene Personal bestätigen, dass während des Transports geeignete Temperaturbedingungen aufrechterhalten werden und alle Inkonsistenzen gemeldet und gelöst wurden, bevor die Produkte für Forschungsinterventionen verwendet werden. Dieses Forschungsprodukt ist in Penicillin -Flaschen verpackt und von Trockeneis transportiert. Nach dem Erhalt speichert das Forschungszentrum es bei -75 ± 15 ℃.

Nur eingeschriebene Probanden können Forschungsinterventionen erhalten, und nur autorisierte Forschungszentrum können Forschungsmaßnahmen bereitstellen oder verwalten. Alle Forschungsinterventionen müssen in einem sicheren, umweltkontrollierten und überwachten (manuellen oder automatischen) Bereich gemäß den angegebenen Lagerbedingungen gespeichert werden, und nur Forscher und autorisierte Mitarbeiter des Forschungszentrums haben Zugang zum Gebiet.

Der Forscher oder Drogenmanager des Forschungszentrums zählt und überprüft die Forschungsinterventionsprodukte und führt zu relevanten Aufzeichnungen (d. H. Empfangen und Überprüfen von Aufzeichnungen und endgültigen Entsorgungsunterlagen).

Forschungsbewertung:

Das Forschungsprogramm und sein Zeitplan finden Sie im „Forschungsplan“. Diese Tabelle listet alle Bewertungen auf und verwendet "X", um die bei jedem Besuch durchgeführten Bewertungen darzustellen. Wenn das Thema aus besonderen Gründen nicht in das Probezentrum gehen kann, kann sich das Thema oder sein gesetzlicher Vertreter über andere alternative Mittel (z. B. Telefon oder virtuelles Video) an das Personal des Testzentrums wenden. Details zu unerwünschten Ereignissen und begleitenden Medikamenten sollten während der Kommunikation gesammelt werden. In dieser Zeit sind die Teilnehmer möglicherweise nicht in der Lage, an den während des Studienbesuchs angegebenen Labortests und klinischen Bewertungen teilzunehmen. Alle relevanten Informationen sollten jedoch ausführlich aufgezeichnet werden. Wenn Labordaten von Probanden gesammelt oder klinische Bewertungen durch alternative Methoden durchgeführt werden, sollten relevante Informationen ausführlich aufgezeichnet werden.

Primäre Ergebnismaße: Sicherheitsindikatoren

1. Demographie/Krankengeschichte:

   ich. Gegenwärtige Anamnese: einschließlich diagnostischer Basis, verwandte Symptome, Entwicklungsanamnese, aktueller und früherer Medikamenten-/Erholungsbehandlungstatus usw.; ii. Vorgeschichte anderer interner oder chirurgischer Krankheiten (insbesondere Arzneimittelallergien, Wirbelsäulentrauma usw.); III. Anomalien im Schwangerschaftsalter und im Schwangerschaftsalter und im vorgeburtlichen Untersuchungen; iv. Frühere Krankenhausaufenthalte seit der Geburt, einschließlich der Dauer des Krankenhausaufenthalts, der Gründe, der Eingangsbehandlung und des Fortschreitens der Krankheit; Wenn machbar, geben Sie ICD-10-Codierungsinformationen für jede Krankenhausaufenthaltsdiagnose an. v. Familiengeschichte

2. Körperliche Untersuchung:

   ich. Die generne körperliche Untersuchung einschließlich der neurologischen Untersuchung muss bei festgelegten Besuchen durchgeführt und aufgezeichnet werden, die mindestens den folgenden Inhalt enthalten sollten: Kopf/Hals, Augen, Ohren, Nase/Hals, Herz -Kreislauf -System, Lungen, Bauch, Muskuloskelettsystem, Zentralnervensystem und Haut.

   ii. Vitalfunktionen, Größe und Gewicht: Vor dem Messen von Vitalfunktionen sollten die Probanden mindestens 3 Minuten in einer ruhigen und ungestörten Umgebung ruhen und dann in einer halb -Linie -Position, einschließlich Körpertemperatur, systolischer und diastolischer Blutdruck, Atemwegsrate, Impuls und Blutsauerstoffsättigung, messen.

   III. Nach der intrathekalen Injektion von AAV-MeCP2 6 Stunden lang flach mit dem Kissen flach liegen und alle 15 Minuten (± 5 Minuten) den Blutdruck, die Atemfrequenz, der Impuls und die Sauerstoffsättigung messen und aufzeichnen. Überwachen Sie danach die oben genannten Indikatoren jede Stunde (± 15 Minuten) bis 6 Stunden nach der intrathekalen Injektion von AAV-MeCP2.

   iv. Während der Screening -Periode muss die Größe gemessen werden und bei festgelegten Besuchen das Gewicht gemessen werden.

3. Laboruntersuchungen: i. Urinroutine: Spezifisches Schwerkraft, pH -Wert, Glukose, Protein, Blut, Ketonkörper, Bilirubin, Urobilinogen, Nitrit, Leukozytenesterase (Testpapiermethode), mikroskopische Untersuchung (wenn Blut- oder Protein -Testergebnisse abnormal sind).

   ii. Blutroutine: Anzahl der roten Blutkörperchen, Hämoglobin, Thrombozytenzahl, Anzahl weißer Blutkörperchen und Klassifizierungszahl, Hämatokrit, mittleres korpuskuläres Volumen, mittlere korpuskuläre Hämoglobinkonzentration und Retikulozytenzahl; III. Blutbiochemie: Aspartataminotransferase (AST), Alaninaminotransferase (ALT), Gamma -Glutamyltransferase (GGT), Alkal -Phosphatase (ALP), Gesamtbilirubin, Direktbilirubin, Gesamtprotein, Kreatinin, Ursachen, Ursaugen, Potium, Potium, Calcium und Calcium.

   iv. Das Myokardenzymspektrum: Kreatinkinase (CK), Kreatinkinase-Isoenzym (CK-MB), Hydroxybutyrat-Dehydrogenase (HBDH), Lactatdehydrogenase (LDH) und Troponin I (HSTNI).

   v. Die Koagulationsfunktion: aktivierte partielle Thromboplastinzeit (APTT), Prothrombinzeit (PT), Thrombinzeit (TT), Fibrinogen (FG, FIB) und D-Dimer.

   vi. Immunfunktion: Periphere Blutlymphozyten -Subpopulationszahl:%CD3 、%CD4 、%CD8 、 CD4/CD8 、%CD19 、%CD16CD56 ； Komplementsystem: Gesamtkomplementaktivität (CH50), C3 -Aktivität und Quantifizierung, C4 -Aktivität und Quantifizierung.

   vii. Serumzytokine umfassen: TNFα 、 IFN-γ 、 IL-10 、 IL-10.

4. Elektrokardiogramm (EKG): Ein herkömmliches 12 -Blei -EKG wird unter Verwendung eines EKG -Geräts erhalten, das automatisch die Herzfrequenz berechnen und PR-, QRS-, QT- und QTC -Intervalle messen kann.
5. Echokardiographie: Während der Screening -Periode soll eine transhorakale Farb -Echokardiographie -Untersuchung potenzielle Herzläsionen und Herzfunktionsstörungen ausschließen. Die Untersuchung wurde von Ultraschallärzten und Kardiologen im Forschungszentrum interpretiert und analysiert.
6. Röntgenaufnahme des Brustkorbs: Während der Screening-Periode wird hauptsächlich die Röntgenuntersuchung der Brust-Röntgenuntersuchung durchgeführt, um Lungeninfektionen auszuschließen, die bei Patienten häufig auftreten. Wenn es schwierig ist, mit Zustimmung des Guardian des Subjekts eine klare Diagnose für einen einfachen Film zu stellen, kann ein zusätzlicher CT -Scan der Brust -CT durchgeführt werden.
7. Kopf -MRT: Während der Screening -Periode ist ein Kopf -MRT -Scan erforderlich, um anatomische Anomalien oder andere Läsionen des Zentralnervensystems zu erkennen, die ausgeschlossen werden müssen. Während der Nachbeobachtungszeit wurden zwei Kopf-MRT-Scans verwendet, um die mit AAV-MeCP2-Injektion verbundene Toxizität zu bewerten und die Entwicklung des Zentralnervensystems zu überwachen.

Sekundärergebnismaße: Wirksamkeitsbewertung

1. RTT-spezifische klinische globale Impressionen Schweregrad (CGI-S) und Clinical Global Impressions Scale Verbesserung (CGI-I);
2. Fragebogen zur Bewertung des Rettungsschweregitels (RSSS);
3. Rett -Syndrom -Verhaltensfragebogen (RSBQ);
4. Überarbeitete motorische Verhaltensbewertung (R-MBA);
5. Handfunktionskala (Rett -Syndrom) (RSHFS);
6. Schlafgewohnheiten für Kinder;
7. Fragebogen zur Erziehung von Elternstress;
8. Griffiths Developmental Rating Scale - Chinesische Version (GDS -C): Nur das relative Entwicklungsalter wird als Validitätsbewertung verwendet. Wenn das Alter über 8 Jahre alt ist und die Fähigkeit unter 6 Jahren ist, wird immer noch die GDS-C-Bewertung verwendet.
9. Beobachtungsskala für Autismus -Diagnoseverhalten (ADOS);
10. Anpassungsbewertungsskala für Kinder im Alter von 0 bis 6 Jahren (zweite Ausgabe) - Formular für Elternbewertungen;
11. Aberrante Verhaltensskala (ABC);

12. Epilepsie -Aufzeichnungen: Während der Studie mussten Subjektwächter das Auftreten von Anfällen aufzeichnen, einschließlich aller Daten mit und ohne Anfälle, einschließlich der Darstellung, Dauer, Häufigkeit und Datum der Anfälle. Tragen Sie es bei jedem Follow-up-Besuch mit, um die Häufigkeit und Dauer epileptischer Anfälle zu bewerten.

    Die Häufigkeit epileptischer Anfälle wird unter Verwendung geordneter Variablen mit fünf Kategorien definiert: Erhöhung, keine Veränderung, Remission von 75%, 50% Remission und keine Anfälle.

13. Video -Beweise: Über den Bewertungsprozess der Probanden während des Grundlinienzeitraums, des Krankenhausaufenthalts von Medikamenten und 1, 3, 6 und 12 Monaten nach der Injektion werden kurze Videoaufzeichnungen durchgeführt. Wenn zu anderen Zeiten abnormales Verhalten auftritt, können Forscher auch entscheiden, Video -Nachweise hinzuzufügen. Eltern/Erziehungsberechtigte können auch Home -Videos mit verbesserten Anzeigefunktionen zur Verfügung stellen. Nach Abschluss der Aufzeichnung wird das Forschungsteam das Video sofort auf einen verschlüsselten Computer oder Laptop hochladen und die Videodatei von der Kameraforderkarte löschen. Jedes von der kooperierende Partei erhaltene Video wird als vertrauliche Forschungsdaten angesehen. Das Forschungsteam und die Partner werden für den Schutz der Identitätsinformationen der Themen und ihrer Eltern/Erziehungsberechtigten in der Videoaufzeichnung verantwortlich sein.
14. Elektroenzephalogramm (EEG);
15. Tragbares Armband: Aufzeichnung der Schlafbedingungen;
16. Wachstumsdifferenzierungsfaktor 11 (GDF11) in Cerebrospinalflüssigkeit und Blut: ein sekretiertes Protein des transformierenden Wachstumsfaktors - β (TGF - β) -Reperfamilie, das hauptsächlich in Hirngewebe exprimiert wird und die Neurogenese während der Entwicklung und des Erwachsenenalters negativ reguliert. Mutationen in GDF11 können zu Entwicklungsstörungen führen, an denen kraniofaziale, spinale und Nervensysteme beteiligt sind. Jüngste Erkenntnisse deuten darauf hin, dass das GDF11 -Gen eines der durch MeCP2 regulierten Zielgene ist: MECP2 reguliert die Expression von GDF11 durch Induzieren der Histonmethylierung des GDF11 -Enhancers herunter. Bei RTT -Mäusen nahm die Expression von GDF11 ab; Im Gegenteil, bei MDS -Mäusen nahm die Expression von GDF11 zu.

Frühere Studien haben gezeigt, dass GDF11 durch Gehirngewebe sekretiert wird und im Blut nachgewiesen werden kann. Daher untersucht dieses Experiment die Veränderungen der GDF11 -Spiegel im Blut vor und nach der Behandlung.

Bewertung der Immunogenität:

Um die durch AAV9-Kapsid nach Verabreichung induzierten humoralen und zellulären Immunantworten zu bewerten, wurde peripheres Blut für Anti-AAV9-Antikörperdetektion (ELISA-Methode) gesammelt, und das Vollblut wurde für AAV-Antigen-spezifische T-Zell-Quantitat-Erkennung (IFN-γ-ENZYME-LKNY-Zellen, ifn-bloßem, mononuc-linced, immunosorbent-Assay, auf isoliertem Periphero-Zellen, mit ifn, mit dem IFNOWNOSORSING, auf gesammeltem IFNOSOROSORBENT-AUSSAUS-AUSSAUGEBETRIERT, IFIVEROSORBENT-ASSAUTIKETION. Elispot). Immunogene Blutproben wurden zum Testen an ausgewiesene Drittlabors geschickt.

Prophylaktische orale Verabreichung von Prednisolon:

24 Stunden vor der Behandlung oral verabreicht und gemäß den Dosierungs- und Entzugsregeln bis zur 9. Woche nach der Behandlung gehalten.

Fast alle im menschlichen Körper verwendeten Gentherapie-Medikamente, unabhängig vom Verabreichungsweg, haben die Antigen-spezifischen T-Zell-Reaktionen 2-4 Wochen nach der Verabreichung beobachtet. Die potenziellen nachteiligen Folgen dieser Reaktion sind die Clearance von immunvermittelten transduzierten Zellen und der Verlust der transgenen Expression.

Um die Immunantwort des Körpers auf AAV -Gentherapie -Medikamente zu lindern, müssen die Probanden prophylaktisch orale Kortikosteroide einnehmen und Prednisolon 24 Stunden vor der Injektion verwenden.

Während der Verwendung von Glukokortikoiden sollten regelmäßige Leberfunktionsüberprüfungen durchgeführt werden, um festzustellen, ob die Medikamente auf der Grundlage der Leberfunktionsindikatoren reduziert oder gestoppt werden können. Wenn die GGT-, AST- oder ALT -Werte ≥ 2 × ULN sind, müssen die Forscher eine entsprechende Behandlung anhand der individuellen Situation der Probanden anbieten. Basierend auf früheren klinischen Erfahrungen mit dem AAV-Drogenkonsum liegt der Hochrisikozeitraum für die Rückprallung von Leberenzym innerhalb von 2 Wochen nach Hormonreduktion oder -abbruch. Daher sollte die Überwachung der Leberfunktion in dieser Phase gestärkt werden. Für den oben genannten Prednisolon-Gebrauchs- und Reduktionsplan können Forscher personalisierte Anpassungen auf der Grundlage der Sicherheitsbewertung der Probanden vornehmen. Zusätzlich zur Leberfunktion müssen auch die Überwachung der Ergebnisse peripherer Blutantigen-spezifischer T-Zellen berücksichtigt werden, und es können bei Bedarf zugesetzt werden. Wenn die verwendeten Glukokortikoide andere Präparate als Prednisolon sind, sollte der Dosierungs- und Entzugsplan auf der Grundlage der äquivalenten Dosis von Prednisolon nach der Umwandlung formuliert werden.

Einverständniserklärung:

Kinder unter 8 Jahren, die an klinischen Studien teilnehmen, sollten von ihrem Vormund ein unterschriebenes Einverständnisformular einholen und über relevante Informationen über die klinische Studie innerhalb des Geltungsbereichs informiert werden, die die Probanden verstehen können. Wenn das Kind die Fähigkeit hat, sich zu entscheiden, an der klinischen Studie teilzunehmen, sollte auch seine eigene Zustimmung eingeholt werden. Kinder über 8 Jahre (einschließlich 8 Jahre), die an klinischen Studien teilnehmen, sollten sowohl sich selbst als auch ihre Wächter das Formular für die Einverständniserklärung unterschreiben, wenn sie das Formular für die Einverständniserklärung unterzeichnen können. Wenn sie nicht die Fähigkeit haben, das Formular für die Einverständniserklärung zu unterschreiben, sollten ihre Erziehungsberechtigten das Formular für die Einverständniserklärung unterschreiben.

Nebenwirkungen von medizinischen Ereignissen und Behandlungen als begleitend:

Medikamente/Arzneimittel, die aus der Unterzeichnung des Formulars für die Einverständniserklärung bis zur ersten Verabreichung auftreten, werden als Krankengeschichte/Komorbiditäten und Behandlungsanamnese in ECRF erfasst und dürfen nicht auf der AE -Seite und gleichzeitig eingehaltene Medikamente/Behandlungsseite aufgezeichnet; Sofern die Verletzung/Schädigung nicht durch klinische Laboruntersuchungsverfahren verursacht wird, wird sie auf der AE -Seite als AE erfasst, und für andere Behandlungen als begleitende Medikamente/Arzneimittel für diese AE werden sie entsprechend auf der gleichzeitigen Medikamenten-/Behandlungsseite erfasst.

Die spezifische technische Route ist im Forschungsplan aufgeführt.

Erwartete Nebenwirkungen und Behandlungsmethoden:

Die mit den Teilnehmern dieser Studie verbundenen Risiken umfassen hauptsächlich Risiken im Zusammenhang mit den Verfahren für Arzneimittelverwaltung (Hüllepunktion), Risiken im Zusammenhang mit dem Untersuchungsmedikament AAV-MECP2 und Risiken im Zusammenhang mit der prophylaktischen Immunsuppression.

Risiken im Zusammenhang mit der Punktion der Scheideinjektion:

1) Die Punktion der Scheideinjektion wird im Allgemeinen als sicher angesehen, und die ausgewählten Probanden werden sich vor der Lumbalpunktion einer Kopfmagnetresonanz -Bildgebung (MRT) unterziehen, um die Möglichkeit eines intrakraniellen Raums auszuschließen, der Läsionen (insbesondere in der hinteren Fossa) oder erhöhten intrakraniellen Druck besetzt. Zu den möglichen Risiken der Lumbalpunktion gehören Folgendes: i. Kopfschmerzen nach Lumbalpunktion: Patienten, die sich einer lumbalen Pünktlichkeit unterziehen, erleben Kopfschmerzen aufgrund der Flüssigkeitsinfiltration in nahe gelegene Gewebe nach der Pünktlichkeit. Kopfschmerzen beginnen normalerweise innerhalb weniger Stunden bis zwei Tage nach der Operation und können von Übelkeit, Erbrechen und Schwindel begleitet werden. Kopfschmerzen treten normalerweise beim Sitzen oder Stehen auf und können beim Liegen erleichtert werden. Kopfschmerzen nach der Lumbalpunktion können mehrere Stunden bis eine Woche oder länger halten.

ii. Beschwerden oder Schmerzen im Rücken: Es kann Schmerzen oder Zartheit im unteren Rücken geben. Der Schmerz kann sich auf den Hintergrund des Beins ausbreiten.

III. Blutungen: Blutungen in der Nähe der Pünktungsstelle oder in seltenen Fällen kann sie im epiduralen Raum auftreten.

Die Verabreichung von Arzneimitteln in dieser Studie wurde von qualifizierten Ärzten im Krankenhausbehandlungsraum durchgeführt. Vor der Injektion wurde der Injektionsbereich desinfiziert und mit Stoff bedeckt. Nach der Injektion wurden Desinfektion und Kompressionshämostase durchgeführt, und der Patient wurde 6 Stunden lang mit dem Kissen bettlägerig. Nach der Operation werden die Probanden genau überwacht, um sicherzustellen, dass mögliche Komplikationen rechtzeitig erkannt und behandelt werden.

Mit AAV-mecp2 verbundene Risiken:

Das Subjekt kann allergische Reaktionen auf AAV-MECP2 erleben. Aufgrund der durch intrathekalen Injektion von AAV induzierten Immunantwort können die Probanden in der Regel nicht in der Lage sind, andere Gentherapien zu erhalten, die von AAV -Vektoren desselben Serotyps abgegeben werden.

Gegenwärtig gibt es drei klinische Studien (NCT05317780, NCT05419492 und NCT04833970), die in den ClinicalTrials.gov registriert sind Website zur Verabreichung von AAV -Arzneimitteln an den lateralen Ventrikel für Erkrankungen des Zentralnervensystems, aber es wurden die klinischen Daten zur Sicherheit oder Wirksamkeit noch nicht offengelegt. AVXS-101 ist die intrathekale Version der SMA-Gentherapie Zolgensma. Eine Dosis-Eskalationsstudie der Phase 1, die bei Probanden im Alter von 6 bis 60 Monaten durchgeführt wurde, zeigte, dass AVXS-101 bei intratelisch verabreichtem Maximum von 2,4 × 1014 Vg/Person gut vertragen war, wobei nur ein Thema erhöhte Transaminase-Werte ohne erhöhte Bilirubin aufweist. Ein Subjekt erlebte Thrombozytopenie (zählte unter 75 × 109/l), was ohne Intervention spontan auflöste.

Im Folgenden fasst die schwerwiegenden unerwünschten Reaktionen (Ereignisse) zusammen, die in AAV -Medikamenten gemeldet wurden, die vermarktet wurden, oder in klinischen Studien:

1. Hepatotoxizität. Berichtet über intravenöse Injektion von AAV-Medikamenten zur Behandlung von SMA, Duchenne-Muskeldystrophie (DMD) und X-Brenn-Myopathie (XLMTM). Das Auftreten von Hepatotoxizität korreliert signifikant mit der Dosierung des verabreichten Arzneimittels, und schwere Fälle von Hepatotoxizität sind nur bei Probanden zu beobachten, die AAV -Dosen> 5 × 1013 VG erhalten. Mit Ausnahme der Lebertoxizität in XLMTM, die als mit der zugrunde liegenden Lebererkrankung des Patienten zusammenhängt, wird der veröffentlichte Mechanismus anderer Leber -Toxizitätsfälle als Leberzellenverletzung angesehen, die durch CD8+T -Zellen, die auf AAV abzielen, vermittelt werden.
2. Thrombotische mikrovaskuläre Erkrankung. Berichtet über die Behandlung von SMA und DMD mit intravenöser Injektion von AAV-Arzneimitteln. Das Auftreten dieses Ereignisses ist ebenfalls dosisabhängig, und alle Fälle waren Probanden, die AAV-Dosen ≥ 5 × 1013 VG erhielten. Aufgrund des Vorhandenseins von Labornachweisen einer Komplementaktivierung in vielen dieser Fälle wird berücksichtigt, dass ihr Auftreten mit der Aktivierung des Komplementsystems durch Antigen -Antikörperkomplexe, die auf AAV abzielen, zusammenhängen.
3. Myokarditis und Myositis. Nur über intravenöse Injektion von AAV -Medikamenten in DMD berichtet. Basierend auf dem spezifischen DMD -Genmutationsmuster, Beginnzeit und der Reaktion auf immunsuppressive Therapie wird spekuliert, dass die Essenz solcher toxischen Ereignisse die Immunantwort des Körpers auf das genetisch veränderte Produkt "Mini -Anti -Muskelatrophie -Protein" ist.
4. Toxikalität der Rückenwurzelganglion (DRG). Die Toxizität von DRG mit klinischen Manifestationen (abnormale Hand- und Fußgefühl) wurde nur bei einem Patienten mit familiärer Lateralsklerose (ALS) berichtet. Dieser Fall erhielt eine intrathekale Dosis von 4,2 × 1014 VG AAV -Arzneimittel. Die in anderen Studien berichtete Toxizität von DRG wurde versehentlich während der Autopsie von AAV -Arzneimittelpersonen entdeckt, und die Probanden hatten vor ihrem Tod keine relevanten klinischen Manifestationen.
5. Abnormale Hirn -MR -Signale. Eine klinische Studie wurde zur Behandlung einer späten kindlichen Lattenerkrankung (CLN2 -Krankheit) durch bilaterale parenchymale Injektion von AAV -Medikamenten unter stereotaxischer Lokalisierung berichtet. Innerhalb von 48 Stunden nach der Injektion zeigte das Kopfhirn des Probanden MR T2-Hyperintensitäten, diffusionsgewichtete Hyperintensitäten und Diffusionsbegrenzungssignale, die an der Injektionsstelle lokalisiert sind. Nachfolgendes MR-Follow-up zeigte, dass alle Probanden neue T2-Hochsignalbereiche entwickelten. Die Forscher fanden keine klinischen Folgen, die mit abnormalen MR -Signalen assoziiert sind. Es wird spekuliert, dass die abnormalen MR -Signale, die nach der Verabreichung früh auftreten, mit dem anhaltenden Gewebeödem/-entzündung zusammenhängen, das durch die höchste Konzentration von AAV -Arzneimitteln um die Injektionskatheterspitze verursacht wird, während die T2 -hohen Signale, die später erscheinen, schwer zu bestimmen sind, ob sie mit dem Fortschreiten der Krankheiten, AAV -Arzneimittel oder der Injektionsverfahren zusammenhängen.

Studien zu Patientenproben (1 Jahr nach der Verabreichung) und nichtmenschlichen Primaten (1 Monat nach der Injektion) haben gezeigt, dass die Wahrscheinlichkeit einer AAV-Integration in das Genom niedrig ist. Basierend auf der Sicherheitsakte von AAV in klinischen Studien besteht der aktuelle Konsens im Bereich der Gentherapie darin, dass AAV eine geringe genetische Toxizität beim Menschen aufweist.

Vorläufige präklinische Sicherheitsbewertungen von AAV-MECP2 in humanisierten RTT-Mäusen und Krabben, die Makaken essen, zeigten, dass AAV-MECP2 keine Leber- oder Nierenfunktionsschäden, Nervenschäden, Immuntoxizität oder histopathologische Veränderungen in wichtigen Organen bei Tieren verursachte, und der allgemeine Zustand der Tiere war gut. Daher zeigen die vorhandenen Daten von AAV-MeCP2 keine klaren klinischen Risiken an. Das häufigste nachteilige Ereignis, das für Probanden erwartet wird, die AAV-MECP2 erhalten, kann die Erhöhung der Leberenzyme der Grad 1/2 sein.

Risiken im Zusammenhang mit der vorbeugenden Immunsuppression:

Dieses Protokoll sieht vor, dass ab einem Tag vor der Verabreichung von AAV-MECP2 die orale Verabreichung von 1 mg/kg Prednisolon oder eine äquivalente Dosis anderer Glukokortikoide gestartet werden sollte, und die Dosierung sollte mindestens 30 Tage lang beibehalten werden, bevor sie sich langsam verringern. Der Zweck der Verwendung von Glukokortikoiden besteht darin, die von AAV -Vektoren induzierten angeborenen und erworbenen Immunantworten zu unterdrücken und Immunreaktionen zu verringern, die sich auf Sicherheit und Wirksamkeit schadet. Bei der Verwendung von Hormonen werden unerwünschte Ereignisse im Zusammenhang mit Hormonen, einschließlich opportunistischer Infektionen, in den Probanden überwacht.

Corticosteroids (such as methylprednisolone and prednisone) have several clear side effects, including hypertension, tachycardia, congestive heart failure, changes in serum electrolytes, hyperglycemia, pain, elevated urea nitrogen and creatinine, osteoporosis and ischemic necrosis, decreased anti infective ability, dizziness, tremors, emotional instability, insomnia, Übelkeit, Erbrechen, Gewichtszunahme, erhöhter intraokularer Druck und die Induktion von Katarakten.

Während der Verwendung von Hormonen werden Forscher die oben genannten unerwünschten Ereignisse, insbesondere opportunistische Infektionen, die bei den Probanden auftreten können, genau überwachen.

Statistische Analyse Diese Studie ist eine frühe Dosis -Exploration -Studie mit dem Hauptziel der Bewertung der Sicherheit, daher wurde keine formale Berechnung der Stichprobengröße durchgeführt.

Die Sicherheit und Verträglichkeit der Behandlung werden auf der Grundlage der Häufigkeit und Schwere von unerwünschten Ereignissen bewertet, die innerhalb eines Jahres nach der Verabreichung auftreten. Der Anteil der Probanden mit jeder AE, jedem SAE, jeder AE im Zusammenhang mit dem Investigationsmittel und jeder ≥ Grad 3 AE wird statistisch als Ganzes bzw. durch Systemorganklassen (SOC) bzw. bevorzugten Begriff (PT) analysiert. Die Inzidenz von unerwünschten Ereignissen in verschiedenen Dosiskohorten wird auch separat statistisch analysiert.

Aufgrund der geringen Stichprobengröße und der Möglichkeit unterschiedlicher Wirksamkeitsindikatoren bei Probanden in verschiedenen Krankheitsstadien sind alle Wirksamkeitsanalysen in dieser Studie beschreibend und beinhalten keine Inferenzstatistiken.