Yhden annoksen AAV-MECP2 Turvallisuus/siedettävyys ja tehokkuus Rett-oireyhtymässä

Tutkimustausta:

Rett -oireyhtymä (RTT) on synnynnäinen neurokehityshäiriö, joka vaikuttaa pääasiassa naisiin. Sen tyypillisiä kliinisiä ilmenemismuotoja ovat hermoston kehityksen lopettaminen tai jopa regressio 6-18 kuukauden kuluttua syntymästä, hankittujen taitojen, kuten kognition, kielen kyvyn ja käden toiminnan, menetys, johon liittyy usein stereotyyppisiä kädenliikkeitä, epänormaalia hengitysrytmejä, kohtauksia ja ahdistuneisuushäiriöitä. RTT on harvinainen sairaus, jonka esiintyvyysaste on noin 1/10000-15000, jonka arvioidaan olevan yli 10% naisten henkisestä vammaisuudesta. Sillä on suuri vaikutus potilaisiin ja heidän perheisiinsa, ja sillä on vakavia vaurioita heidän sosiaaliseen toimintaansa ja erittäin huono elämänlaatu.

Noin 90-95% tyypillisistä RTT-potilaista ja 40-50% epätyypillisistä RTT-potilaista on havainnut epänormaalisuudet metylaatio-CPG: tä sitovassa proteiini 2 (MECP2) -geenissä, samoin kuin MECP2-geenin mutaatiot tai deleetiot. Ihmisen MECP2 -geeni sijaitsee XQ28: lla, ja sen koodattu proteiini -metyloitu CPG: tä sitova proteiini 2 on metylaatiodomeenin perheen jäsen. Se on transkription estävä tekijä, joka säätelee RNA: n silmukointia ja on aivojen keskeinen epigeneettinen säätelijä, joka vaikuttaa hermofunktioon. Eläinkokeissa havaittiin, että MECP2 -puutteelliset hiiret osoittivat RTT -oireiden merkittävää parannusta MECP2 -proteiinilisäyksen saatuaan geenitekniikan tekniikan avulla.

Viime vuosina geeniterapian menestys neuromuskulaarisissa sairauksissa, kuten selkärangan lihasten surkastumisessa (SMA), on osoittanut ihmiskehon geeniterapiatekniikan soveltamisen toteutettavuuden. Vuodesta 2021 lähtien Taysha ja neurogeeni ovat tehneet kliinisiä tutkimuksia geeniterapiasta Rett -oireyhtymään. Tällä hetkellä 2 aikuista RTT -potilasta ja 3 lasta ovat suorittaneet hallinnon osoittaen suotuisan turvallisuusprofiilin. Ei ole tapahtunut vakavia hoitoon liittyviä haittavaikutuksia eikä raportteja MECP2: n yliekspressiomyrkyllisyydestä tai oireista.

Professori Qiu Zilong, Songjiang-tutkimuslaitoksen vanhempi tutkija Shanghai Jiao Tongin yliopiston lääketieteellisen korkeakoulun tutkimuslaitoksessa, on suorittanut RTT: n pitkäaikaista tutkimusta. Vuonna 2012 havaittiin, että MECP2 säätelee hermosolujen synaptista homeostaasin plastisuutta; Vuonna 2014 havaittiin, että MECP2 säätelee MicroRNA -silmukoinnin prosessointia; Perustettu MECP2 -siirtogeeninen rapu, joka syö apinan eläinmallia vuonna 2016; Vuonna 2019 tunnistettiin MECP2 -hiirten hermomekanismi ja yritettiin geenin muokkausinterventiohoitoa; Perusta MECP2 -mutanttihiiri AAV -geeniterapiatekniikan etenemissuunnitelma vuonna 2022 ja hae keksintöpatenttia. Itsenäisesti kehittynyt AAV-MECP2 pidensi merkittävästi MECP2-poistohiirien käyttöikää sivuttaiskammion injektiokokeissa, ja AAV-Mecp2: n terapeuttinen vaikutus CAG-promoottorilla oli huomattavasti parempi kuin samanlaiset tuotteet. Apinan intratekaalisen antamisen turvallisuus ja tehokkuus on testattu 8 kuukauden ajan, ja verirutiini, veren biokemia ja immuunitekijäindikaattorit ovat kaikki osoittaneet hyvää turvallisuutta.

Yhteenvetona voidaan todeta, että RTT on vakava neurokehityshäiriö, joka aiheuttaa suurta haittaa potilaille, eikä tällä hetkellä ole tehokasta hoitomenetelmää. Tutkijoiden aloittama kliininen tutkimus pyrkii arvioimaan AAV-Mecp2: n turvallisuutta, siedettävyyttä ja alustavaa tehokkuutta Rett-oireyhtymän hoidossa yhden intratekaalisen injektion avulla, jolla on tärkeä lääketieteellinen ja sosiaalinen arvo. Intratekaalisen antamisen turvallisuus ja tehokkuus on testattu 8 kuukauden ajan, ja verirutiini, veren biokemia ja immuunijärjestelmäindikaattorit ovat kaikki osoittaneet hyvää turvallisuutta.

Tutkimuskatsaus:

Yleinen tutkimussuunnittelu:

Tutkijoiden aloittaman AAV-mecp2: n monikeskus, yksivarsi, yksittäinen intratekaalinen annostutkimus AAV-MECP2: n tavoitteena on tutkia kahta kohdeannosta, jolloin kolme henkilöä on otettu huomioon jokaisessa annoksessa, arvioida AAV-MECP2: n yksittäisen intratekaalisen injektion turvallisuus, siedettävyys ja alustava teho RTT: n intratekaalisen injektion.

Opintoväestö:

4-10-vuotiaat lapset, joille on diagnosoitu RTT, neuvottelemalla Guangzhoun naisten ja lasten lääketieteellisen keskuksen neurologian/käyttäytymisen kehittämisen osastolla ja Xiamenin lastensairaalan lasten terveysosastolla.

Testipaikka:

Naisten ja lasten lääketieteellisen keskuksen tutkimusosasto, Guangzhou Medical University

Poistumiskriteerit puolivälissä:

Perheenjäsenet voivat silti vetäytyä tutkimuksesta saatuaan tietoisen suostumuksen.

Irrotuksen/syrjäytymisen kriteerit:

i. Potilaan on säädettävä tutkimusjakson aikana käytettyä hoitolääkettä;

II. Tutkimuksen aikana tarvitaan tutkimuksesta kiellettyjen lääkkeiden/hoidon käyttö: Tutkimuksen aikana seuraavat samanaikaiset lääkkeet/hoidot ovat kiellettyjä:

• Lääkkeet, joita käytetään lihashäiriöiden tai neurodegeneratiivisten sairauksien hoitamiseen (lukuun ottamatta epilepsialääkkeitä).
• Lääke, jota käytetään diabeteksen hoitoon.
• Immunosuppressantit (kuten glukokortikoidit, syklosporiini, takrolimuusi, metotreksaatti, syklofosfamidi, laskimonsisäinen immunoglobuliini, ritueksimabi jne.) Aloitettiin 3 kuukauden kuluessa ennen ilmoittautumista.
• Niille, jotka eivät ole käyttäneet epilepsialääkkeitä tai kuntoutussuunnitelmia ennen ilmoittautumista, he ovat käyttäneet epilepsialääkkeitä tai toteuttaneet kuntoutussuunnitelmia ilmoittautumisen jälkeen.

III. Ei voi osallistua sairaalaan yhden viikon ajan vakiintuneen lääkesuunnitelman mukaan; iv. Ajan viestinnän ja koordinoinnin jälkeen projektin arviointia ei voida suorittaa; v. Jos tutkimusjakson aikana esiintyy haittavaikutuksia, laboratorion poikkeavuuksia tai muita sairauksia, ja tutkijoiden mielestä tutkimuksen jatkaminen voi lisätä koehenkilöiden riskiä.

Osallistujien lukumäärä ja ryhmittelymenetelmä:

Injektioryhmässä oli 6 osallistujaa. Kuusi koehenkilöä ilmoittautui tutkimukseen peräkkäin, kun yksi potilas suoritti antamisen ja merkittävää annosta rajoittavaa toksisuutta (DLT) ei havaittu yhden kuukauden seurannan aikana. Jälkimmäinen kohde ilmoittautui kokeilulääkkeisiin.

DLT-määritelmä: Mikä tahansa seuraavista tapahtumista (luokiteltu NCI CTCAE v5.0: n mukaan), jotka tapahtuvat 30 päivän kuluessa antamisesta ja tutkija määrittelee sen mahdollisesti tai ehdottomasti liittyvän AAV-MECP2: een (ks. 4,2 haittavaikutuksen vakavuus): ≥ asteen 3 haittavaikutus; Tason 3 laboratorion poikkeavuudet jatkuvat ≥ 7 päivää tarvittaessa lääketieteellisellä interventiolla; Tason 4 laboratorion poikkeavuus.

Kokeellinen lääke:

Kokeellinen lääkitys: AAV-MECP2 ； Vaikuttava aine: rekombinantti AAV-geeniterapiavektori, joka sisältää neuronispesifistä promoottoria (CAG) ohjattua MECP2: ta; Lisävarusteet: 4-hydroksietyylipiperatsiini-etanesulfonihappo, kaliumkloridi, natriumkloridi, kalsiumkloridi, glukoosi, poloksameeri F68 ja injektiovesi; Annosmuoto: intratekaalinen injektio; Ulkonäkö: väritön ja läpinäkyvä neste; Eritelmä: itsenäisesti pakattu penisilliinipullo, tiitterillä 2 × 1014 VG/ml ja tilavuus 0,5 ml; Hallintoreitti: intratekaalinen injektio; Hallintotaajuus: 1 kerta;

Tutkimusvaiheet ja menetelmät:

1. Interventiomenetelmä: AAV-MECP2, laimennettu 20 ml: n fysiologisella suolaliuoksella, kahdella tutkittavalla annoksella (annos 1, annos 2, yksityiskohtaisesti alla), yksittäinen intratekaalinen injektio;

   Huumeiden annos:

   Annostutkimussäännöt ovat kehittyneet perinteisestä "3+3 -suunnittelusta". Tämän tutkimuksen kaksi esisarjatasoa ovat: annos 1 (7 x 1014vg/henkilö); Annos 2 (1,5 × 1015vg/henkilö).

   Kaksi esiasetettua annostasoa tässä tutkimuksessa ovat annos 1: n alkuannostaso ja annos 2: n korkeampi annostaso. Tutkimusprosessin aikana on mahdollista tutkia annostasoa annoksen 1 alapuolella tai välituotteen annoksen 1 ja annoksen 2 välillä, joka perustuu kertyneen turvallisuuden ja tehokkuustiedon välillä, jollei SRC: n hyväksynnän perusteella.

   Annos 1 -tasolla kolme koehenkilöä ilmoittautui ensin, ja sitten DLT -havaintojakson aikana havaittiin DLT: n keskuudessa kehittyneiden henkilöiden lukumäärä. Perustuen DLT: n havaittujen henkilöiden lukumäärään, päätä, nouseeko seuraavaan annosryhmään, ylläpidetään nykyistä annosryhmää vai pienempien annosryhmään.

   1. Jos yksikään kolmesta tässä annoksesta ilmoittautuneesta koehenkilöstä ei kehitä DLT: tä tai vain yksi kohde kehittyy DLT, annos voidaan nostaa suurempaan annosryhmään tai tutkimus voidaan lopettaa (kun se on jo annos 2).
   2. Jos 2 kolmesta tässä annoksesta ilmoittautuneesta koehenkilöstä kehittää DLT: tä, uusien koehenkilöiden hallinto keskeytetään, kunnes SRC tekee päätöksen; Tässä vaiheessa nykyisen turvallisuus- ja tehotietojen kattavan arvioinnin jälkeen SRC tarjoaa yhden seuraavista kolmesta päätöslauselmasta: ① Pienennä annos pienemmäksi annokseksi ja rekisteröi kolme arvioitavaa koehenkilöä; ② Lisää 3 ylimääräistä arvioitavaa henkilöä nykyiseen annokseen; ③ Lopeta kokeilu.

   SRC tarkoittaa turvallisuustarkastuskomiteaa, joka vastaa tutkijoiden turvallisuustietojen tarkistamisesta, koostuen tutkijoista ja yhteistyöstä lääketieteellisistä näytöistä. Tutkimusprosessin aikana SRC on vastuussa koehenkilöiden turvallisuuden suojelemisesta, ja sen vastuut ovat seuraavat:

   Tarkistaa kunkin osallistujan turvallisuuskysymykset; Tarkista turvallisuustiedot säännöllisesti, kun koehenkilöt jatkavat opiskeluhoitoa; Arvioi, onko tarpeen laajentaa koehenkilöiden lukumäärää kussakin vaiheessa ja onko mahdollista siirtyä seuraavaan annosvaiheeseen, mukaan lukien annoksen lisääntyminen tai annoksen vähentäminen; Pidä tutkimustiedot ja tulokset luottamuksellisina.

2. Huumeiden hoito:

Kaikille saatuille tutkimustoimenpiteille tutkijan tai nimetyn henkilöstön on vahvistettava, että kuljetuksen aikana pidetään asianmukaisia ​​lämpötilaolosuhteita, ja mahdolliset epäjohdonmukaisuudet on ilmoitettu ja ratkaistu ennen tutkimustoimenpiteiden tuotteiden käyttöä. Tämä tutkimustuote on pakattu penisilliinipulloihin ja kuljetetaan kuivalla jäällä. Saatuaan sen tutkimuskeskus tallentaa sen -75 ± 15 ℃.

Vain ilmoittautuneet aiheet voivat saada tutkimustoimenpiteitä, ja vain valtuutettu tutkimuskeskuksen henkilökunta voi tarjota tai hallita tutkimustoimenpiteitä. Kaikki tutkimustoimenpiteet on säilytettävä turvallisella, ympäristöystävällisellä ja tarkkailla (manuaalisesti tai automaattisesti) alueella ilmoitettujen varastointiolosuhteiden mukaan, ja vain tutkijoilla ja valtuutetulla tutkimuskeskuksen henkilökunnalla on pääsy alueelle.

Tutkimuskeskuksen tutkija tai lääkepäällikkö on laskettava ja tarkistettava tutkimustoimenpiteet ja ylläpidettävä asiaankuuluvia asiakirjoja (ts. Tietueiden vastaanottaminen ja tarkistaminen ja lopulliset hävitysrekisterit).

Tutkimuksen arviointi:

Tutkimusohjelma ja sen aikataulu löytyvät 'tutkimusaikataulusta'. Tässä taulukossa luetellaan kaikki arvioinnit ja käyttää "X" kullakin vierailulla suoritettuja arviointeja. Jos kohde ei pysty menemään kokeilukeskukseen erityisistä syistä, aihe tai heidän laillinen edustaja voi ottaa yhteyttä kokeilukeskuksen henkilöstöön muilla vaihtoehtoisilla keinoilla (kuten puhelin tai virtuaalinen video). Tiedot haittavaikutuksista ja samanaikaisista lääkkeistä tulisi kerätä viestinnän aikana. Tänä aikana osallistujat eivät ehkä pysty osallistumaan tutkimusvierailun aikana määriteltyihin laboratoriokokeisiin ja kliinisiin arviointeihin, mutta kaikki asiaankuuluvat tiedot olisi kirjattava yksityiskohtaisesti. Jos koehenkilöiden laboratoriotiedot kerätään tai kliiniset arvioinnit suoritetaan vaihtoehtoisilla menetelmillä, asiaankuuluvat tiedot olisi kirjattava yksityiskohtaisesti.

Ensisijaiset tulosmittaukset: Turvallisuusindikaattorit

1. Demografia/sairaushistoria:

   i. Nykyinen sairaushistoria: Sisältää diagnostinen perusta, siihen liittyvät oireet, kehityshistoria, nykyinen ja aiempi lääkitys/palautumishoidon tila jne.; II. Muiden sisäisten tai kirurgisten sairauksien historia (erityisesti lääkeallergiat, selkärangan trauma jne.); III. Epimormaalisuudet raskausajan ja synnytyksen tutkimuksissa; iv. Aikaisemmat sairaalahoidot syntymän jälkeen, mukaan lukien sairaalahoiton kesto, syyt, saatu hoito ja sairauden eteneminen; Jos se on mahdollista, anna ICD-10-koodaustiedot jokaiselle sairaalahoidon diagnoosille; v. Perhehistoria

2. Lääkärintarkastus:

   i. Perusfyysinen tutkimus, mukaan lukien neurologinen tutkimus, on suoritettava ja kirjattava nimetyillä vierailuilla, joiden tulisi sisältää ainakin seuraava sisältö: pää/kaula, silmät, korvat, nenä/kurkku, sydän- ja verisuonijärjestelmä, keuhkot, vatsa, tuki- ja liikuntaelinjärjestelmä, keskushermosto ja iho.

   II. Elämättömät merkit, korkeus ja paino: Ennen kuin mitataan elintärkeitä merkkejä, koehenkilöiden tulisi levätä hiljaisessa ja häiritsemättömässä ympäristössä vähintään 3 minuutin ajan ja mitata sitten puolijalkoasennossa, mukaan lukien kehon lämpötila, systolinen ja diastolinen verenpaine, hengitysnopeus, pulssi ja veren hapen kyllästyminen.

   III. AAV-MECP2: n injektoinnin jälkeen makaa tasainen 6 tunnin ajan tyyny poistettu ja mittaa ja tallentaa verenpaine, hengitysnopeus, pulssi ja happikyläys 15 minuutin välein (± 5 minuuttia); Seuraa myöhemmin yllä olevia indikaattoreita tunnissa (± 15 minuuttia) 6 tuntiin AAV-Mecp2: n intratekaalisen injektion jälkeen.

   iv. Seulontajakson aikana korkeus on mitattava ja painotettava nimettyjen vierailujen kanssa.

3. Laboratoriotutkimukset ： i. Virtsan rutiini: spesifinen painovoima, pH -arvo, glukoosi, proteiini, veri, ketonirungot, bilirubiini, urobilinogeeni, nitriitti, leukosyyttiesteraasi (testipaperimenetelmä), mikroskooppinen tutkimus (jos veri- tai proteiinitestitulokset ovat epätavallisia).

   II. Verirutiini: Punasolujen määrä, hemoglobiini, verihiutaleiden määrä, valkosolujen määrä ja luokitusmäärä, hematokriitti, keskimääräinen korpuskulaarinen tilavuus, keskimääräinen korpuskulaarinen hemoglobiinipitoisuus ja retikulosyyttimäärä; III. Veribiokemia: Aspartaatti -aminotransferaasi (AST), alaniinin aminotransferaasi (ALT), gammaglutamyylitransferaasi (GGT), alkalinen fosfataasi (ALP), kokonaisbilirubiini, suora bilirubiini, kokonaisproteiini, kreainiini, urea nitrogeeninen kaapin ja panium, sovium ja kalsium.

   iv. Sydänentsyymispektri: kreatiinikinaasi (CK), kreatiinikinaasi-isoentsyymi (CK-MB), hydroksibutyraattidehydrogenaasi (HBDH), laktaattidehydrogenaasi (LDH) ja korkean herkkyys troponin I (HSTNI).

   v. Koagulaatiofunktio: aktivoitu osittainen tromboplastiiniaika (APTT), protrombiiniaika (PT), trombiiniaika (TT), fibrinogeeni (FG, FIB) ja D-dimeeri.

   vi. Immuunifunktio: Perifeerinen veren lymfosyyttien alaryhmämäärä:%CD3 、%CD4 、%CD8 、 CD4/CD8 、%CD19 、%CD16CD56 ； Komplementtijärjestelmä: Komplementtisuhde (CH50), C3 -aktiivisuus ja kvantifiointi, C4 -aktiivisuus ja kvantifiointi.

   vii. Seerumin sytokiiniin kuuluvat: TNFa 、 IFN-y 、 IL-10 、 IL-10.

4. Sähkökardiogrammi (EKG): Tavanomainen 12 lyijy -EKG saadaan käyttämällä EKG -laitetta, joka voi automaattisesti laskea sykkeen ja mitata PR-, QRS-, QT- ja QTC -välejä.
5. Ehokardiografia: Seulontajakson aikana transthoracic -värikäsittelytutkimus on tarkoitus sulkea pois mahdolliset sydämen vauriot ja sydämen toimintahäiriöt. Tutkimukset tulkitsivat ja analysoivat tutkimuskeskuksen ultraäänilääkärit ja kardiologit.
6. Rinta-röntgenkuva: Seulontajakson aikana rintakehän röntgentutkimus suoritetaan pääasiassa potilailla usein esiintyvän keuhkoinfektioiden sulkemiseksi pois. Jos on vaikeaa tehdä selkeää diagnoosia tavallisesta kalvosta, ja kohteen huoltajan suostumuksella voidaan suorittaa ylimääräinen CT -tavallinen skannaus.
7. PÄÄ MRI: Seulontajakson aikana vaaditaan pää MRI -tavallinen skannaus mahdollisten anatomisten poikkeavuuksien tai muiden keskushermostovaurioiden havaitsemiseksi, jotka on jätettävä pois. Kahta seurantajakson aikana suunniteltua MRI-skannausta käytettiin AAV-mecp2-injektioon liittyvän toksisuuden arvioimiseksi ja keskushermoston kehitykseen.

Toissijainen tulosmittaukset: Tehokkuuden arviointi

1. RTT-spesifiset kliiniset globaalit vaikutelmat asteikon vakavuus (CGI-S) ja kliiniset globaalit vaikutelmat asteikon parantaminen (CGI-I);
2. Rett -vakavuuden arviointikysely (RSSS);
3. Rett -oireyhtymän käyttäytymiskysely (RSBQ);
4. Tarkistettu motorisen käyttäytymisen arviointi (R-MBA);
5. Rett -oireyhtymän käden toiminnan asteikko (RSHFS);
6. Lasten nukkumistapojen kyselylomake;
7. Rettin vanhemmuuden stressikysely;
8. Griffithsin kehitysluokitusasteikko - kiinalainen versio (GDS -C): vain suhteellisen kehityskauden käyttöä käytetään pätevyysarviointina. Jos ikä on yli 8-vuotias ja kyky on alle 6-vuotias, GDS-C-arviointia käytetään edelleen;
9. Autismin diagnoosin käyttäytymisen havaintoasteikko (ADOS);
10. Adaptiivisen käyttäytymisen arviointiasteikko 0-6 -vuotiaille lapsille (toinen painos) - vanhempien arviointilomake;
11. Poikkeava käyttäytymisasteikko (ABC);

12. Epilepsiatiedot: Tutkimuksen aikana aiheen huoltajia vaadittiin kirjaamaan kohtausten esiintyminen, mukaan lukien kaikki päivämäärät, joissa on kohtauksia, mukaan lukien kohtausten esitys, kesto, taajuus ja päivämäärä. Kuljeta se jokaisessa seurantavierailussa tutkijoiden arvioimiseksi epileptisten kohtausten taajuuden ja keston arvioimiseksi.

    Epileptisten kohtausten esiintymistiheys määritellään käyttämällä tilattuja muuttujia, joilla on viisi luokkaa: nousu, ei muutosta, 75%: n remissiota, 50%: n remissiota ja kohtauksia.

13. Videotiedot: Koehenkilöiden arviointiprosessista tehdään lyhyitä videotallenteita lähtöjakson aikana, lääkityksen sairaalahoitoaika ja 1, 3, 6 ja 12 kuukautta injektion jälkeen. Jos epänormaalia käyttäytymistä tapahtuu muina aikoina, tutkijat voivat myös päättää lisätä videotodistuksia. Vanhemmat/lailliset huoltajat voivat myös tarjota kotivideoita parannettujen näyttötoimintojen avulla. Kun nauhoitus on valmis, tutkimusryhmä lataa videon heti salattuun tietokoneeseen tai kannettavaan tietokoneeseen ja poistaa videotiedoston kameran tallennuskortista. Kaikkia yhteistyöpuolueen vastaanottamia videoita pidetään luottamuksellisina tutkimustietoina. Tutkimusryhmä ja yhteistyökumppanit vastaavat aineiden ja heidän vanhempiensa/huoltajiensa henkilöllisyystietojen suojelemisesta videotallennuksessa.
14. Elektroenkefalogrammi (EEG);
15. Puettavissa oleva ranneke: Tallenna nukkumisolosuhteet;
16. Kasvun erilaistumistekijä 11 (GDF11) aivo -selkäydinnesteessä ja veressä: transformoivan kasvutekijän - β (TGF - β) superperheen erittynyt proteiini, joka ilmenee pääasiassa aivokudoksessa ja negatiivisesti säätelevä neurogeneesi kehityksen ja aikuisuuden aikana. GDF11: n mutaatiot voivat johtaa kehityksen poikkeavuuksiin, joihin liittyy kraniofaasisia, selkäranka- ja hermostojärjestelmiä. Viimeaikaiset todisteet viittaavat siihen, että GDF11 -geeni on yksi MECP2: n säätelemistä kohdegeeneistä: MECP2 vähentää GDF11: n ilmentymistä indusoimalla GDF11 -tehostajan histonimetylaatio. RTT -hiirissä GDF11: n ekspressio laski; Päinvastoin, MDS -hiirissä GDF11: n ekspressio kasvoi.

Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että GDF11 erittyy aivokudoksella ja että ne voidaan havaita veressä. Siksi tässä kokeessa tutkitaan veren GDF11 -tasojen muutoksia ennen hoitoa ja sen jälkeen.

Immunogeenisyyden arviointi:

AAV9 Capsidin indusoimien humoraalisten ja solujen immuunivasteiden arvioimiseksi annettavan veren anti-AAV9-vasta-aineiden havaitsemiseksi (ELISA-menetelmä) kerättiin perifeerinen veri ja kokoveren kerättiin AAV-antigeenispesifistä T-solujen kvantitatiivista havaitsemista varten (IFN-y-entsymy-linkitetyt immunosorbentti-assay), jolla on isolatederifenssisolut, IFN-Y- Elispot). Immunogeeniset verinäytteet lähetettiin nimettyihin kolmansien osapuolien laboratorioihin testausta varten.

Prednisolonin ennaltaehkäisevä oraalinen antaminen:

Annetaan suun kautta 24 tuntia ennen hoitoa ja ylläpidetään annos- ja vetäytymissääntöjen mukaisesti 9. viikkoon hoidon jälkeen.

Lähes kaikki ihmiskehossa käytetyt geeniterapialääkkeet ovat havainneet antigeenispesifiset T-soluvasteet 2-4 viikkoa antamisen jälkeen. Tämän reaktion mahdolliset haitalliset seuraukset ovat immuunivälitteisten transdusoitujen solujen puhdistuma ja siirtogeenisen ekspression menetys.

Kehon immuunivasteen lievittämiseksi AAV -geeniterapialääkkeisiin koehenkilöiden on otettava ennaltaehkäisevä oraaliset kortikosteroidit ja käytettävä prednisolonia 24 tuntia ennen injektion vastaanottamista.

Glukokortikoidien käytön aikana on suoritettava säännölliset maksan toiminnan tarkistukset sen määrittämiseksi, voidaanko lääkitystä vähentää vai pysäyttää maksan toiminnan indikaattorien perusteella. Jos GGT-, AST- tai ALT -arvot ovat ≥ 2 x ULN, tutkijoiden on tarjottava vastaava hoito koehenkilöiden yksittäisen tilanteen perusteella. AAV-lääkkeiden käytön aikaisemman kliinisen kokemuksen perusteella maksaentsyymin palautumisajan korkean riskin jakso on 2 viikon kuluessa hormonin vähentämisestä tai lopettamisesta. Siksi maksan toiminnan seurantaa tulisi vahvistaa tässä vaiheessa. Edellä mainitussa prednisolonin käyttö- ja pelkistyssuunnitelmassa tutkijat voivat tehdä henkilökohtaisia ​​muutoksia koehenkilöiden turvallisuusarvioinnin perusteella. Maksan toiminnan lisäksi on otettava huomioon myös perifeerisen veren antigeenispesifisten T-solujen seurantatulokset, ja muita immunosuppressiivisia aineita voidaan tarvittaessa lisätä. Jos käytetyt glukokortikoidit ovat muita valmisteita kuin prednisolonia, annos ja vieroitussuunnitelma tulisi muotoilla prednisolonin vastaavan annoksen perusteella muunnoksen jälkeen.

Tietoinen suostumus:

Alle 8 -vuotiaiden lasten kliinisiin tutkimuksiin osallistuvien lasten tulisi saada vartijalta allekirjoitettu tietoinen suostumuslomake, ja heille olisi tiedettävä asiaankuuluvat tiedot kliinisestä tutkimuksesta, jonka koehenkilöt ymmärtävät. Kun lapsella on kyky tehdä päätös sopia osallistumisesta kliiniseen tutkimukseen, heidän oma suostumuksensa olisi myös saatettava; Yli 8 -vuotiaiden lasten (mukaan lukien 8 -vuotiaat) osallistuvat kliinisiin tutkimuksiin, jos heillä on kyky allekirjoittaa tietoinen suostumuslomake, sekä itse että heidän huoltajansa tulisi allekirjoittaa tietoinen suostumuslomake. Jos heillä ei ole kykyä allekirjoittaa tietoista suostumuslomaketta, heidän huoltajiensa tulisi allekirjoittaa tietoinen suostumuslomake.

Haitalliset lääketieteelliset tapahtumat ja muut kuin samanaikaiset hoidot:

Lääkkeet/lääkkeet, jotka tapahtuvat tietoisen suostumuslomakkeen allekirjoittamisesta, siihen asti, kun ensimmäinen annos on kirjattava sairaushistoriaksi/lisätoimiksi ja hoitohistoriaksi ECRF: ssä, eikä sitä ole kirjattava AE -sivulle ja samanaikaiselle lääkitys-/hoitosivulle; Ellei vaurio/vaurio johtu kliinisistä laboratoriotutkimusmenettelyistä, se on kirjattava AE -sivulla AE, ja muihin tämän AE: n hoitoon kuin samanaikaisesti lääkkeisiin/lääkkeisiin, ne on kirjattava samanaikaiseen lääkitykseen/hoitosivulle vastaavasti.

Erityinen tekninen reitti on yksityiskohtainen tutkimusaikataulussa.

Odotetut haittavaikutukset ja hoitomenetelmät:

Tämän tutkimuksen osallistujiin liittyvät riskit sisältävät pääasiassa lääkkeen antamismenetelmiin liittyviä riskejä (vaipan puhkaisua), AAV-Mecp2: n tutkimuslääkkeeseen liittyvät riskit ja ennaltaehkäisevään immunosuppressioon liittyvät riskit.

Vaipan injektio -puhkeamiseen liittyvät riskit:

1) Vaipan injektiosääntöä pidetään yleensä turvallisena, ja valitut koehenkilöt käyvät läpi päämagneettikuvauskuvantamisen (MRI) skannauksen ennen lannerangan puhkaisua, jotta kallonsisäisen tilan miehittävät vauriot (etenkin takaosan fossa) tai lisääntyneen kallonsisäisen paineessa. Lannerangan mahdolliset riskit sisältävät seuraavat: i. Päänsärky lannerangan jälkeen: Potilaat, joille tehdään lannerangan puhkaisu, koevat päänsärkyä nesteen tunkeutumisesta läheisiin kudoksiin puhkaisun jälkeen. Päänsärky alkaa yleensä muutaman tunnin tai kahden päivän kuluttua leikkauksesta, ja niihin voi liittyä pahoinvointi, oksentelu ja huimaus. Päänsärkyä tapahtuu yleensä istuessaan tai seisoessaan, ja ne voidaan helpottaa makuulla. Päänsärkyä lannerangan jälkeen voivat kestää useita tunteja viikkoon tai pidempään.

II. Takan epämukavuus tai kipu: alaselässä voi olla kipua tai arkuutta. Kipu voi levitä jalan takaosaan.

III. Verenvuoto: Verenvuoto lähellä punkausta tai harvoissa tapauksissa sitä voi esiintyä epiduraalissa.

Lääkkeiden antamisen tässä tutkimuksessa suorittivat pätevät lääkärit sairaalahoitohuoneessa. Ennen injektiota injektioalue desinfioitiin ja peitettiin kankaalla. Injektion jälkeen suoritettiin desinfiointi ja puristushemostaasi, ja potilas oli sängyssä 6 tunnin ajan tyyny poistettu. Leikkauksen jälkeen koehenkilöitä seurataan tiiviisti sen varmistamiseksi, että mahdolliset komplikaatiot havaitaan ja hoidetaan ajoissa.

AAV-MECP2: een liittyvät riskit:

Aihe voi kokea allergiset reaktiot AAV-Mecp2: lle. AAV: n intratekaalisen injektion aiheuttaman immuunivasteen takia koehenkilöt eivät yleensä pysty vastaanottamaan muita saman serotyypin AAV -vektoreita toimittamia geeniterapioita.

Tällä hetkellä on kolme kliinistä tutkimusta (NCT05317780, NCT05419492 ja NCT04833970), jotka on rekisteröity ClinicalTrials.gov Verkkosivusto AAV -lääkkeiden hallinnasta keskushermostotautien sivuttaiseen kammioon, mutta turvallisuutta tai tehokkuutta kliinistä tietoa ei ole vielä paljastettu. AVXS-101 on SMA-geeniterapian zolgensman intratekaalinen versio. Vaiheen 1 annoksen lisääntymistutkimus, joka suoritettiin 6-60 kuukauden ikäisille koehenkilöille, osoitti, että AVXS-101 oli turvallinen ja hyvin siedetty, kun sitä annettiin intratekaalisesti maksimiannoksella 2,4 × 1014 VG/henkilö, ja vain yhdellä koehenkilöllä on kohonnut transaminaasitasot ilman korotettua bilirubiinia; Yhden koehenkilö kokenut trombosytopeniaa (lukumäärä alle 75 × 109/l), joka ratkaistiin spontaanisti ilman interventiota.

Seuraavassa on yhteenveto AAV -lääkkeissä ilmoitettuja vakavia haittavaikutuksia (tapahtumia), joita on markkinoitu tai kliinisissä tutkimuksissa:

1. Maksatoksisuus. Raportoitu AAV-lääkkeiden suonensisäisestä injektiosta SMA: n, Duchennen lihasdystrofian (DMD) ja X-linkitetyn myopatian (XLMTM) hoitoon. Hepatotoksisuuden esiintyminen korreloi merkittävästi annetun lääkkeen annoksen kanssa, ja vakavia maksatoksisuuden tapauksia havaitaan vain henkilöillä, jotka saavat AAV -annoksia> 5 × 1013vg. Lukuun ottamatta XLMTM: n maksatoksisuutta, jonka katsotaan liittyvän potilaan taustalla olevaan maksasairauteen, muiden maksatoksisuustapausten julkaistun mekanismin katsotaan olevan maksasoluvaurioita, joita CD8+T -solut välittävät AAV: sta.
2. Tromboottinen mikrovaskulaarinen sairaus. SMA: n ja DMD: n hoidossa AAV-lääkkeiden suonensisäisesti injektiolla tämän tapahtuman esiintyminen on myös annoksesta riippuvainen, ja kaikki tapaukset olivat koehenkilöitä, jotka saivat AAV-annoksia ≥ 5 × 1013vg. Koska laboratorio todisteet komplementin aktivaatiosta monissa näistä tapauksista, katsotaan, että niiden esiintyminen liittyy AAV: n antigeenin vasta -ainekompleksien aktivoitumiseen.
3. Sydänlihatulehdus ja myosiitti. Raportoitu vain AAV -lääkkeiden suonensisäisestä injektiosta DMD: ssä. Tapauksessa esiintyvän spesifisen DMD -geenimutaatiokuvion, alkamisajan ja vasteen perusteella immunosuppressiiviseen terapiaan spekuloidaan, että tällaisten myrkyllisten tapahtumien ydin on kehon immuunivaste geneettisesti modifioituun tuotteeseen "Mini Anti Anti Muscle Atrofy -proteiini".
4. Selkäjuuren ganglion (DRG) toksisuus. DRG: n toksisuus kliinisillä oireilla (epänormaali käsi- ja jalkasivu) on ilmoitettu vain yhdellä potilaalla, jolla on perinnöllinen lateraaliskleroosi (ALS). Tämä tapaus sai intratekaalisen annoksen 4,2 x 1014 VG AAV -lääkkeen. Muissa tutkimuksissa ilmoitettu DRG: n toksisuus havaittiin vahingossa AAV -lääkekohteiden ruumiinavauksen aikana, ja koehenkilöillä ei ollut merkityksellisiä kliinisiä oireita ennen niiden kuolemaansa.
5. Epänormaalit aivojen MR -signaalit. AAV -lääkkeiden kahdenvälisen aivojen parenkyymisinjektiolla stereotaksisen lokalisaation kahdenvälisen aivojen parenkyymisinjektiolla. 48 tunnin kuluessa injektion jälkeen kohteen pään aivojen MR osoitti T2-hyperintensiteettiä, diffuusiopainotetut hyperintensiteettit ja diffuusio rajoitetut signaalit, jotka sijaitsevat injektiokohtaan. Seuraava MR-seuranta osoitti, että kaikki koehenkilöt kehittivät uusia T2-korkeat signaalialueet. Tutkijat eivät löytäneet epänormaaleihin MR -signaaleihin liittyviä kliinisiä jälkiseurauksia. Arvellaan, että epänormaalit MR -signaalit, jotka ilmestyvät varhain antamisen jälkeen, liittyvät jatkuvaan kudosdeema/tulehdukseen, joka johtuu AAV -lääkkeiden korkeimmasta pitoisuudesta injektiokatetrin kärjen ympärillä, kun taas myöhemmin esiintyviä T2 -suuria signaaleja on vaikea määrittää, liittyvätkö ne sairauden etenemiseen, AAV -lääkkeisiin vai injektiomenettelyihin.

Potilaanäytteistä (1 vuosi antamisen jälkeen) ja ei-ihmisen kädellisistä (1 kuukausi injektion jälkeen) ovat osoittaneet, että AAV-integraation todennäköisyys genomiin on alhainen. Kliinisissä tutkimuksissa AAV: n turvallisuustietueen perusteella geenihoidon nykyinen konsensus on, että AAV: lla on alhainen geneettinen toksisuus ihmisillä.

Humanisoiduissa RTT-hiirissä ja rapujen syömisissä makakeissa olevien AAV-Mecp2: n alustavat prekliiniset turvallisuusarvioinnit osoittivat, että AAV-MECP2 ei aiheuttanut maksa- tai munuaisten toimintavaurioita, hermovaurioita, immuunimyrkyllisyyttä tai eläinten tärkeiden elinten histopatologisia muutoksia, ja eläinten yleinen tila oli hyvä. Siksi AAV-MECP2: n nykyiset tiedot eivät osoita selkeitä kliinisiä riskejä. Yleisin haittavaikutus, jota odotetaan AAV-MECP2: n saaville henkilöille, voi olla maksaentsyymien arvo 1/2.

Ennaltaehkäisevään immunosuppressioon liittyvät riskit:

Tämä protokolla säädetään, että alkaen yhdestä päivästä ennen AAV-MECP2: n antamista 1 mg/kg prednisolonia tai vastaava annos muita glukokortikoideja tulisi aloittaa, ja annos on ylläpidettävä vähintään 30 päivän ajan ennen kuin vähenevät hitaasti. Glukokortikoidien käytön tarkoituksena on tukahduttaa AAV -vektorien aiheuttamat synnynnäiset ja hankitut immuunivasteet ja vähentää immuunireaktioita, jotka ovat turvallisuuden ja tehokkuuden haitallisia. Hormoneja käytettäessä haittavaikutuksia, mukaan lukien opportunistiset infektiot mukaan lukien, tarkkaillaan koehenkilöillä.

Kortikosteroideilla, kuten metyyliprednisolonilla ja prednisonilla) on useita selkeitä sivuvaikutuksia, mukaan lukien verenpainetauti, takykardia, kongestiivinen sydämen vajaatoiminta, seerumin elektrolyyttien muutokset, hyperglykemia, kipu, kohonnut urean typpi- ja kreatiniini-, osteoporoosi ja iskeemisen nekroosi, heikentynyt anti -infektiiviset kyvyn, unettomuus, pahoinvointi, oksentelu, painonnousu, kohonnut silmänsisäinen paine ja kaihien induktio.

Hormonien käytön aikana tutkijat seuraavat tarkkaan edellä mainittuja haittavaikutuksia, etenkin koehenkilöillä voi tapahtua opportunistisia infektioita.

Tilastollinen analyysi Tämä tutkimus on varhaisen annostutkimustutkimus, jolla on turvallisuuden arvioinnin päätavoite, joten muodollinen näytteen koon laskenta ei suoritettu.

Hoidon turvallisuus ja siedettävyys arvioidaan vuoden kuluessa antamisen jälkeen tapahtuvien haittavaikutusten taajuuden ja vakavuuden perusteella. Minkä tahansa AE: n, minkä tahansa SAE: n, tutkittavaan lääkkeeseen liittyvän AE: n ja mitä tahansa ≥ -asteen 3 AE: n osuutta analysoidaan tilastollisesti kokonaisuutena ja järjestelmäelinten luokkien (SOC) ja suositun termin (PT). Erilaisten annoskohorttien haittavaikutusten esiintyvyys analysoidaan myös tilastollisesti erikseen.

Pienen otoskoon ja mahdollisuuden vaihtelevan tehokkuusindikaattorien välillä koehenkilöiden keskuudessa eri sairausvaiheissa, kaikki tämän tutkimuksen tehokkuusanalyysit ovat kuvaavia, eivätkä niihin liittyy päätelmätilastoja.