Dosis de seguridad AAV-MECP2 única/tolerabilidad y eficacia en el síndrome de Rett

Antecedentes de investigación:

El síndrome de Rett (RTT) es un trastorno neurodesarrollo congénito que afecta principalmente a las mujeres. Sus manifestaciones clínicas típicas incluyen el cese o incluso la regresión del desarrollo neuronal de 6 a 18 meses después del nacimiento, la pérdida de habilidades adquiridas como la cognición, la capacidad del lenguaje y la función de la mano, a menudo acompañadas de movimientos estereotipados de la mano, ritmos respiratorios anormales, ataques y trastornos de ansiedad. RTT es una enfermedad rara con una tasa de incidencia de aproximadamente 1/10000-15000, que se estima que representa más del 10% de la discapacidad intelectual femenina. Tiene un gran impacto en los pacientes y sus familias, con daños graves a su funcionamiento social y una calidad de vida muy pobre.

Aproximadamente el 90-95% de los pacientes con RTT típicos y el 40-50% de los pacientes con RTT atípicos han detectado anormalidades en el gen de codificación de unión a CpG de metilación 2 (MECP2), así como mutaciones o deleciones en el gen MECP2. El gen MECP2 humano se encuentra en XQ28, y su proteína CpG metilada de proteína codificada es un miembro de la familia del dominio de metilación. Es un factor inhibidor de la transcripción que regula el empalme de ARN y es un regulador epigenético clave en el cerebro, que afecta la función neuronal. En los experimentos con animales, se encontró que los ratones deficientes en MECP2 mostraron una mejora significativa en los síntomas de RTT después de recibir suplementos de proteínas MECP2 a través de la tecnología de ingeniería genética.

En los últimos años, el éxito de la terapia génica en enfermedades neuromusculares como la atrofia espinal muscular (SMA) ha demostrado la viabilidad de aplicar la tecnología de terapia génica en el cuerpo humano. Desde 2021, Taysha y Neurogene han realizado ensayos clínicos de terapia génica para el síndrome de Rett. Actualmente, 2 pacientes adultos con RTT y 3 niños han completado la administración, lo que demuestra un perfil de seguridad favorable. No ha habido eventos adversos relacionados con el tratamiento graves y no hay informes de toxicidad o síntomas de sobreexpresión de MECP2.

El profesor Qiu Zilong, investigador principal del Instituto de Investigación de Songjiang de la Facultad de Medicina de la Universidad de Shanghai Jiao Tong, ha estado realizando investigaciones a largo plazo sobre RTT. En 2012, se descubrió que MECP2 regula la plasticidad de la homeostasis sináptica neuronal; En 2014, se descubrió que MECP2 regula el procesamiento de empalme de microARN; Modelo de animales de mono de cangrejo transgénico Mecp2 establecido en 2016; En 2019, se identificó el mecanismo neural de los ratones MECP2 y se intentó la terapia de intervención de edición de genes; Establezca una hoja de ruta de Tecnología de Terapia AAV de Terapia AAV Mecp2 Matante en 2022 y solicite una patente de invención. El AAV-MECP2 desarrollado de forma independiente prolongó significativamente la vida útil de los ratones knockout MECP2 en experimentos de inyección del ventrículo lateral, y el efecto terapéutico de AAV-MECP2 con el promotor CAG fue significativamente mejor que los productos similares. La seguridad y la eficacia de la administración intratecal en el mono se han probado durante 8 meses, y la rutina de sangre, la bioquímica de la sangre e indicadores de factores inmunes han mostrado buena seguridad.

En resumen, RTT es un trastorno de neurodesarrollo grave que plantea un gran daño para los pacientes, y actualmente no existe un método de tratamiento efectivo. El ensayo clínico iniciado por nuestros investigadores tiene como objetivo evaluar la seguridad, la tolerabilidad y la efectividad preliminar de AAV-MECP2 en el tratamiento del síndrome de Rett a través de una sola inyección intratecal, que tiene un valor médico y social importante. La seguridad y la eficacia de la administración intratecal se han probado durante 8 meses, y los indicadores de rutina sanguínea, bioquímica sanguínea e factor inmune han mostrado buena seguridad.

Descripción general de la investigación:

Diseño general de investigación:

Un estudio multicéntrico de exploración de dosis intratecal, un solo brazo, de AAV-MECP2 iniciado por los investigadores tiene como objetivo explorar dos dosis objetivo, con tres sujetos inscritos en cada dosis, para evaluar la seguridad, la tolerabilidad y la eficacia preliminar de la inyección intratecal única de AAV-MECP2 en el tratamiento del RTT.

Población de estudio:

Los niños de 4 a 10 años que han sido diagnosticados con RTT a través de la consulta en el Departamento de Neurología/Desarrollo del Comportamiento del Centro Médico de Mujeres y Niños de Guangzhou y el Departamento de Salud Infantil del Hospital de Niños de Xiamen.

Ubicación de la prueba:

Investigación del Centro Médico de Mujeres y Niños, Universidad de Medicina de Guangzhou

Criterios de salida a mitad de camino:

Los miembros de la familia aún pueden retirarse del estudio después de obtener el consentimiento informado.

Criterios para el desapego/exclusión:

i. El paciente necesita ajustar el medicamento de tratamiento utilizado durante el período de estudio;

II. Durante el estudio, se requiere el uso de medicamentos/tratamientos que están prohibidos del estudio: durante el estudio, se prohíben los siguientes medicamentos/tratamientos concomitantes:

• Los medicamentos utilizados para tratar los trastornos musculares o las enfermedades neurodegenerativas (excluyendo los fármacos antiepilépticos).
• Un medicamento utilizado para tratar la diabetes.
• Los inmunosupresores (como glucocorticoides, ciclosporina, tacrolimus, metotrexato, ciclofosfamida, inmunoglobulina intravenosa, rituximab, etc.) se iniciaron dentro de los 3 meses antes de la inscripción.
• Para aquellos que no han usado fármacos antiepilépticos o planes de tratamiento de rehabilitación antes de la inscripción, han usado fármacos antiepilépticos o implementado planes de tratamiento de rehabilitación después de la inscripción.

iii. No se puede asistir al tratamiento en el hospital durante una semana de acuerdo con el plan de medicamentos establecido; IV. Después de la comunicación y la coordinación del tiempo, la evaluación del proyecto no puede completarse; v. Si se producen eventos adversos, anomalías de laboratorio u otras afecciones médicas durante el período de estudio, y se toman medidas apropiadas, los investigadores creen que continuar el ensayo puede aumentar el riesgo de los sujetos.

Número de participantes y método de agrupación:

Hubo 6 participantes en el grupo de inyección. Seis sujetos se inscribieron en el ensayo en secuencia, con un paciente que completó la administración y no se observó toxicidad significativa que limita la dosis (DLT) durante un seguimiento de un mes. El último sujeto se inscribió en el medicamento de prueba.

Definición DLT: cualquiera de los siguientes eventos (graduados según NCI CTCAE v5.0) que ocurren dentro de los 30 días posteriores a la administración y el investigador determina que posiblemente está posiblemente o definitivamente relacionado con AAV-MECP2 (ver 4.2 Gravedad adversa): ≥ Evento adverso de grado 3; Nivel 3 Las anormalidades de laboratorio persisten durante ≥ 7 días con la intervención médica necesaria; Nivel 4 Anormalidad de laboratorio.

Droga experimental:

Medicación experimental: AAV-MECP2 ； Ingrediente activo: vector de terapia génica AAV recombinante que contiene MECP2 impulsado por el promotor específico de neuronas (CAG); Accesorios: ácido etanosulfónico de 4-hidroxietilpiperazina, cloruro de potasio, cloruro de sodio, cloruro de calcio, glucosa, poloxámero F68 y agua de inyección; Forma de dosificación: inyección intratecal; Apariencia: líquido incoloro y transparente; Especificación: botella de penicilina envasada independientemente, con un título de 2 × 1014 VG/ml y un volumen de 0.5 ml; Ruta de administración: inyección intratecal; Frecuencia de administración: 1 vez;

Pasos y métodos de investigación:

1. Método de intervención: AAV-MECP2, diluido con 20 ml de solución salina fisiológica, dos dosis exploratorias (dosis 1, dosis 2, detallada a continuación), inyección intratecal única;

   Dosis de drogas:

   Las reglas de exploración de dosis han evolucionado del tradicional "diseño 3+3". Los dos niveles de dosis preestablecidos para este estudio son: dosis 1 (7 × 1014vg/persona); Dosis 2 (1.5 × 1015vg/persona).

   Los dos niveles de dosis preestablecidos en este estudio son el nivel de dosis inicial de la dosis 1 y un nivel de dosis más alto de la dosis 2. Durante el proceso de investigación, es posible explorar un nivel de dosis por debajo de la dosis 1 o una dosis intermedia entre la dosis 1 y la dosis 2 en función de los datos de seguridad y eficacia acumulados, sujetos a la aprobación SRCIS.

   En el nivel de dosis 1, tres sujetos se inscribieron primero, y luego durante el período de observación de DLT, se observó el número de sujetos que desarrollaron DLT entre los tres sujetos. Según el número de sujetos observados para tener DLT, decida si aumentar el siguiente grupo de dosis, mantener el grupo de dosis actual o disminuir a un grupo de dosis más baja.

   1. Si ninguno de los tres sujetos inscritos en esta dosis desarrolla DLT o solo un sujeto desarrolla DLT, la dosis se puede aumentar a un grupo de dosis más alto o el ensayo puede detenerse (cuando ya es dosis 2).
   2. Si 2 de los 3 sujetos inscritos en esta dosis desarrollan DLT, la administración a nuevos sujetos se suspenderá hasta que SRC tome una decisión; En este punto, después de una evaluación integral de los datos actuales de seguridad y eficacia, SRC proporcionará una de las siguientes tres resoluciones: ① Reducir la dosis a una dosis más baja e inscribir tres sujetos evaluables; ② Agregue 3 sujetos evaluables adicionales a la dosis actual; ③ Detente el experimento.

   SRC significa Comité de Revisión de Seguridad, responsable de revisar los datos de seguridad de los sujetos, compuestos por investigadores y monitores médicos colaboradores. Durante el proceso de investigación, SRC es responsable de proteger la seguridad de los sujetos, y sus responsabilidades son las siguientes:

   Revisar los problemas de seguridad de cada participante; Revisar regularmente los datos de seguridad mientras los sujetos continúan recibiendo tratamiento de estudio; Evaluar si es necesario expandir el número de sujetos en cada etapa y si es posible proceder a la siguiente etapa de dosis, incluida la escalada de dosis o la reducción de la dosis; Mantenga confidenciales los datos y resultados de la investigación.

2. Manejo de drogas:

Para todos los productos de intervención de investigación recibidos, el investigador o el personal designado deben confirmar que las condiciones de temperatura apropiadas se mantienen durante el transporte, y cualquier inconsistencia se ha informado y resuelto antes de usar los productos de intervención de investigación. Este producto de investigación está empaquetado en botellas de penicilina y transportado por hielo seco. Después de recibirlo, el centro de investigación lo almacena a -75 ± 15 ℃.

Solo los sujetos inscritos pueden recibir intervenciones de investigación, y solo el personal autorizado del centro de investigación puede proporcionar o administrar intervenciones de investigación. Todas las intervenciones de investigación deben almacenarse en un área segura, controlada ambientalmente y monitoreado (manual o automáticamente) de acuerdo con las condiciones de almacenamiento indicadas, y solo los investigadores y el personal autorizado del centro de investigación tienen acceso al área.

El investigador o gerente de medicamentos del Centro de Investigación contará y verificará los productos de intervención de investigación y mantendrá registros relevantes (es decir. recibir y verificar registros y registros de eliminación final).

Evaluación de la investigación:

El programa de investigación y su horario se pueden encontrar en el 'Programa de investigación'. Esta tabla enumera todas las evaluaciones y usa "X" para representar las evaluaciones realizadas en cada visita. Si el sujeto no puede ir al centro de juicio debido a razones especiales, el sujeto o su representante legal pueden contactar al personal del centro de juicio a través de otras medias alternativas (como teléfono o video virtual). Los detalles de los eventos adversos y los medicamentos concomitantes deben recolectarse durante la comunicación. Durante este período, los participantes pueden no poder participar en las pruebas de laboratorio y las evaluaciones clínicas especificadas durante la visita al estudio, pero toda la información relevante debe registrarse en detalle. Si se recopilan datos de laboratorio de sujetos o se realizan evaluaciones clínicas a través de métodos alternativos, se debe registrar en detalle la información relevante.

Medidas de resultado primarias: indicadores de seguridad

1. Demografía/Historial Médico:

   i. Historial médico actual: incluyendo base de diagnóstico, síntomas relacionados, antecedentes de desarrollo, estado de tratamiento de medicamentos/recuperación actuales y pasados, etc. II. Historia de otras enfermedades internas o quirúrgicas (especialmente alergias a las drogas, trauma espinal, etc.); iii. Anormalidades en la edad gestacional y los exámenes prenatales; IV. Hospitalizaciones anteriores desde el nacimiento, incluida la duración de la hospitalización, las razones, el tratamiento recibido y la progresión de la enfermedad; Si es posible, proporcione información de codificación ICD-10 para cada diagnóstico de hospitalización; v. Historia familiar

2. Examen físico:

   i. El examen físico genernal, incluido el examen neurológico, debe realizarse y registrarse en visitas designadas, que deben incluir al menos los siguientes contenidos: cabeza/cuello, ojos, oídos, nariz/garganta, sistema cardiovascular, pulmones, abdomen, sistema musculoesquelético, sistema nervioso central y piel.

   II. Signos vitales, altura y peso: antes de medir los signos vitales, los sujetos deben descansar en un ambiente tranquilo y no perturbado durante al menos 3 minutos, y luego medir en una posición semi supina, incluida la temperatura corporal, la presión arterial sistólica y diastólica, la velocidad respiratoria, el pulso y la saturación de oxígeno de la sangre.

   iii. Después de la inyección intratecal de AAV-MECP2, acuéstese durante 6 horas con la almohada retirada, y mida y registre la presión arterial, la velocidad respiratoria, el pulso y la saturación de oxígeno cada 15 minutos (± 5 minutos); Luego, controle los indicadores anteriores cada hora (± 15 minutos) hasta 6 horas después de la inyección intratecal de AAV-MECP2.

   IV. Durante el período de detección, la altura debe medirse y medir el peso en las visitas designadas.

3. Investigaciones de laboratorio: i. Rutina de orina: gravedad específica, valor de pH, glucosa, proteína, sangre, cuerpos de cetona, bilirrubina, urobilinógeno, nitrito, leucocitos esterasa (método de papel de prueba), examen microscópico (si los resultados de la prueba de sangre o proteína son anormales).

   II. Rutina de sangre: recuento de glóbulos rojos, hemoglobina, recuento de plaquetas, recuento de glóbulos blancos y recuento de clasificación, hematocrito, volumen corpuscular medio, concentración media de hemoglobina corpuscular y recuento de reticulocitos; iii. Bioquímica en sangre: aspartato aminotransferasa (AST), alanina aminotransferasa (ALT), gamma glutamil transferasa (GGT), fosfatasa alcalina (ALP), bilirrubina total, bilirubina directa, proteína total, creatinina, orea nitrógeno, potasio, sodio y calcio.

   IV. El espectro enzimático miocárdico: creatina quinasa (CK), creatina quinasa isoenzima (CK-MB), hidroxibutirato deshidrogenasa (HBDH), lactato deshidrogenasa (LDH) y troponina I de alta sensibilidad (HSTNI).

   V

   VI. Función inmune: recuento de subpoblación de linfocitos de sangre periférica:%CD3 、%CD4 、%CD8 、 CD4/CD8 、%CD19 、%CD16CD56 ； Sistema de complemento: Actividad total del complemento (CH50), actividad C3 y cuantificación, actividad de C4 y cuantificación.

   vii. Las citocinas séricas incluyen: TNFα 、 IFN-γ 、 IL-10 、 IL-10.

4. Electrocardiograma (ECG): se obtiene un ECG convencional de 12 plomo utilizando un dispositivo ECG que puede calcular automáticamente la frecuencia cardíaca y medir los intervalos PR, QRS, QT y QTC.
5. Ecocardiografía: durante el período de detección, se programará un examen de ecocardiografía de color transtorácico para descartar posibles lesiones cardíacas y disfunción cardíaca. El examen fue interpretado y analizado por médicos y cardiólogos de ultrasonido en el centro de investigación.
6. Rayos X de tórax: durante el período de detección, el examen de rayos X de tórax se realiza principalmente para excluir las infecciones pulmonares que ocurren con frecuencia en los pacientes. Si es difícil hacer un diagnóstico claro en la película simple, con el consentimiento del tutor del sujeto, se puede realizar una exploración lisa de TC cofre adicional.
7. MRI de la cabeza: durante el período de detección, se requiere una exploración simple de MRI de la cabeza para detectar cualquier anormalidades anatómicas u otras lesiones del sistema nervioso central que necesiten excluirse. Se utilizaron escaneos de resonancia magnética de dos cabezas programadas durante el período de seguimiento para evaluar la toxicidad asociada con la inyección de AAV-MECP2 y monitorear el desarrollo del sistema nervioso central.

Medidas de resultado secundarias: evaluación de eficacia

1. RTT Severidad de escala de impresiones globales clínicas específicas (CGI-S) y mejora de la escala de impresiones globales clínicas (CGI-I);
2. Cuestionario de evaluación de gravedad Rett (RSSS);
3. Cuestionario de comportamiento del síndrome Rett (RSBQ);
4. Evaluación revisada del comportamiento motor (R-MBA);
5. Escala de función de la mano del síndrome de Rett (RSHFS);
6. Cuestionario de hábitos de sueño para niños;
7. Cuestionario de estrés de crianza de Rett;
8. Escala de calificación de desarrollo de Griffiths - Versión china (GDS -C): solo la edad relativa del desarrollo se usa como evaluación de validez. Si la edad tiene más de 8 años y la capacidad tiene menos de 6 años, la evaluación GDS-C todavía se usa;
9. Escala de observación del comportamiento del diagnóstico del autismo (ADOS);
10. Escala de evaluación del comportamiento adaptativo para niños de 0 a 6 (segunda edición) - Formulario de evaluación de los padres;
11. Escala de comportamiento aberrante (ABC);

12. Registros de epilepsia: durante el estudio, los tutores sujetos debían registrar la aparición de convulsiones, incluidas todas las fechas con y sin convulsiones, incluida la presentación, duración, frecuencia y fecha de las convulsiones. Llévelo con usted en cada visita de seguimiento para que los investigadores evalúen la frecuencia y la duración de las convulsiones epilépticas.

    La frecuencia de las convulsiones epilépticas se definirá utilizando variables ordenadas con cinco categorías: aumento, sin cambios, 75% de remisión, 50% de remisión y sin convulsiones.

13. Evidencia de video: se realizarán grabaciones cortas de video del proceso de evaluación de los sujetos durante el período de referencia, el período de hospitalización de medicamentos y 1, 3, 6 y 12 meses después de la inyección. Si se produce un comportamiento anormal en otros momentos, los investigadores también pueden decidir agregar evidencia de video. Los padres/tutores legales también pueden proporcionar videos caseros con funciones de visualización mejoradas. Una vez completada la grabación, el equipo de investigación cargará inmediatamente el video en una computadora o computadora portátil cifrada y eliminará el archivo de video de la tarjeta de almacenamiento de la cámara. Cualquier video recibido por la parte cooperante se considerará datos de investigación confidenciales. El equipo de investigación y los socios serán responsables de proteger la información de identidad de los sujetos y sus padres/tutores en la grabación de video.
14. Electroencefalograma (EEG);
15. Madena portátil: condiciones de sueño registradas;
16. Factor de diferenciación de crecimiento 11 (GDF11) en el líquido cefalorraquídeo y la sangre: una proteína secretada del factor de crecimiento transformador - superfamilia β (TGF - β), expresada principalmente en el tejido cerebral y regulando negativamente la neurogénesis durante el desarrollo y la edad adulta. Las mutaciones en GDF11 pueden conducir a anormalidades del desarrollo que involucran los sistemas craneofaciales, espinales y nerviosos. La evidencia reciente sugiere que el gen GDF11 es uno de los genes objetivo regulados por MECP2: MECP2 regula a la baja la expresión de GDF11 al inducir la metilación de histonas del potenciador GDF11. En ratones RTT, la expresión de GDF11 disminuyó; Por el contrario, en los ratones MDS, la expresión de GDF11 aumentó.

Estudios anteriores han demostrado que GDF11 es secretado por el tejido cerebral y puede detectarse en la sangre. Por lo tanto, este experimento explorará los cambios en los niveles de GDF11 en la sangre antes y después del tratamiento.

Evaluación de inmunogenicidad:

Para evaluar las respuestas inmunes humorales y celulares inducidas por la cápside AAV9 después de la administración, se recolectó sangre periférica para la detección de anticuerpos anti-AAV9 (método ELISA), y la sangre completa se recolectó la sangre completa para la detección cuantitativa de las células T específicas de AAV en AAV-IFN-γ, las células inmunosorbentes de la sangre de la γ enzimas). Elispot). Se enviaron muestras de sangre inmunogénica a laboratorios de terceros designados para su prueba.

Administración oral profiláctica de prednisolona:

Administrado por vía oral 24 horas antes del tratamiento, y mantenida de acuerdo con las reglas de dosificación y retiro hasta la novena semana después del tratamiento.

Casi todos los medicamentos de terapia génica utilizados en el cuerpo humano, independientemente de la ruta de administración, han observado respuestas de células T específicas de antígeno 2-4 semanas después de la administración. Las posibles consecuencias adversas de esta reacción son la eliminación de células transducidas inmunomediadas y la pérdida de expresión transgénica.

Para aliviar la respuesta inmune del cuerpo a los medicamentos de terapia génica AAV, los sujetos deben tomar corticosteroides orales profilácticos y usar prednisolona 24 horas antes de recibir la inyección.

Durante el uso de glucocorticoides, se deben realizar verificaciones de funciones hepáticas regulares para determinar si los medicamentos pueden reducirse o detenerse según los indicadores de la función hepática. Si los valores GGT, AST o ALT son ≥ 2 × ULN, los investigadores deben proporcionar un tratamiento correspondiente basado en la situación individual de los sujetos. Basado en la experiencia clínica previa con el uso de drogas AAV, el período de alto riesgo para el rebote de la enzima hepática es dentro de las 2 semanas de reducción o interrupción hormonal. Por lo tanto, el monitoreo de la función hepática debe fortalecerse durante esta etapa. Para el plan de uso y reducción de prednisolona mencionado anteriormente, los investigadores pueden hacer ajustes personalizados basados ​​en la evaluación de seguridad de los sujetos. Además de la función hepática, también se pueden considerar los resultados de monitoreo de las células T específicas de antígeno de sangre periférica, y se pueden agregar otros agentes inmunosupresores si es necesario. Si los glucocorticoides utilizados son preparaciones distintas de la prednisolona, ​​la dosis y el plan de abstinencia deben formularse en función de la dosis equivalente de prednisolona después de la conversión.

Consentimiento informado:

Los niños menores de 8 años que participan en ensayos clínicos deben obtener un formulario de consentimiento informado firmado de su tutor, y deben estar informados de información relevante sobre el ensayo clínico dentro del alcance que los sujetos pueden entender. Cuando el niño tiene la capacidad de tomar la decisión de aceptar participar en el ensayo clínico, también se debe obtener su propio consentimiento; Los niños mayores de 8 años (incluidos los 8 años) que participan en ensayos clínicos, si tienen la capacidad de firmar el formulario de consentimiento informado, tanto ellos mismos como sus guardianes deben firmar el formulario de consentimiento informado. Si no tienen la capacidad de firmar el formulario de consentimiento informado, sus guardianes deben firmar el formulario de consentimiento informado.

Eventos y tratamientos médicos adversos que no sean concomitantes:

Los medicamentos/medicamentos que ocurren desde la firma del formulario de consentimiento informado hasta que la primera administración se registre como historial médico/comorbilidades e historial de tratamiento en ECRF, y no se registrará en la página AE y la página de medicamentos/tratamiento concomitantes; A menos que la lesión/daño sea causado por los procedimientos de examen de laboratorio clínico, se registrará como un AE en la página de AE, y para otros tratamientos distintos de los medicamentos/medicamentos concomitantes para este AE, se registrarán en la página de medicamentos/tratamiento concomitantes en consecuencia.

La ruta técnica específica se detalla en el horario de investigación.

Reacciones adversas esperadas y métodos de tratamiento:

Los riesgos asociados con los participantes en este estudio incluyen principalmente riesgos relacionados con los procedimientos de administración de drogas (punción de la vaina), riesgos relacionados con el medicamento de investigación AAV-MECP2 y los riesgos relacionados con la inmunosupresión profiláctica.

Riesgos asociados con el pinchazo de inyección de la vaina:

1) La punción de la inyección de la vaina generalmente se considera segura, y los sujetos seleccionados se someterán a una exploración de imágenes de resonancia magnética (MRI) de la cabeza antes de la punción lumbar para descartar la posibilidad de que las lesiones de ocupación del espacio intracraneal ocupen (especialmente en la fosa posterior) o una mayor presión intracraneal. Los posibles riesgos de punción lumbar incluyen lo siguiente: i. Dolor de cabeza después de punción lumbar: pacientes sometidos a experiencia de punción lumbar debido a la infiltración de líquidos en los tejidos cercanos después de la punción. Los dolores de cabeza generalmente comienzan dentro de unas pocas horas o dos días después de la cirugía y pueden estar acompañados de náuseas, vómitos y mareos. Los dolores de cabeza generalmente ocurren mientras están sentados o de pie, y se pueden aliviar al acostarse. Los dolores de cabeza después de la punción lumbar pueden durar varias horas a una semana o más.

II. Incomodidad o dolor en la parte posterior: puede haber dolor o ternura en la parte baja de la espalda. El dolor puede extenderse a la parte posterior de la pierna.

iii. Hemorragia: sangrado cerca del sitio de punción, o en casos raros, puede ocurrir en el espacio epidural.

La administración de medicamentos en este estudio fue llevada a cabo por médicos calificados en la sala de tratamiento del hospital. Antes de la inyección, el área de inyección era desinfectada y cubierta con tela. Después de la inyección, se realizaron hemostasia de desinfección y compresión, y el paciente se postró en cama durante 6 horas con la almohada retirada. Después de la cirugía, los sujetos serán monitoreados de cerca para garantizar que se detecten y traten de manera oportuna las complicaciones posibles de manera oportuna.

Riesgos asociados con AAV-MECP2:

El sujeto puede experimentar reacciones alérgicas a AAV-MECP2. Debido a la respuesta inmune inducida por la inyección intratecal de AAV, los sujetos generalmente no pueden recibir otras terapias genéticas entregadas por vectores AAV del mismo serotipo.

En la actualidad, hay tres ensayos clínicos (NCT053177780, NCT05419492 y NCT048333970) registrados en clinicaltrials.gov Sitio web para administrar medicamentos AAV al ventrículo lateral para enfermedades del sistema nervioso central, pero los datos clínicos de seguridad o eficacia aún no se han revelado. AVXS-101 es la versión intratecal de la terapia del gen SMA Zolgensma. Un estudio de escalada de dosis de fase 1 realizado en sujetos de 6 a 60 meses mostró que AVXS-101 era seguro y bien tolerado cuando se administró intratecalmente a una dosis máxima de 2.4 × 1014 VG/persona, con solo un sujeto que experimenta niveles de transaminasa elevados sin bilirrubina elevada; Un sujeto experimentó trombocitopenia (cuenta por debajo de 75 × 109/L), que resolvió espontáneamente sin intervención.

A continuación se resume las reacciones adversas (eventos) graves reportadas en medicamentos AAV que se han comercializado o en ensayos clínicos:

1. Hepatotoxicidad. Informado sobre la inyección intravenosa de drogas AAV para el tratamiento de SMA, distrofia muscular de Duchenne (DMD) y miopatía ligada a X (XLMTM). La aparición de hepatotoxicidad se correlaciona significativamente con la dosis del fármaco administrado, y los casos graves de hepatotoxicidad solo se observan en sujetos que reciben dosis AAV> 5 × 1013vg. Excepto por la toxicidad hepática en XLMTM, que se considera relacionada con la enfermedad hepática subyacente del paciente, el mecanismo publicado de otros casos de toxicidad hepática se considera que es una lesión de células hepáticas mediadas por células T CD8+dirigidas a AAV.
2. Enfermedad microvascular trombótica. Informado en el tratamiento de SMA y DMD con inyección intravenosa de medicamentos AAV, la aparición de este evento también depende de la dosis, y todos los casos fueron sujetos que recibieron dosis AAV ≥ 5 × 1013vg. Debido a la presencia de evidencia de laboratorio de activación del complemento en muchos de estos casos, se considera que su aparición está relacionada con la activación del sistema de complemento por los complejos de anticuerpos antígeno dirigidos a AAV.
3. Miocarditis y miositis. Solo se informó sobre la inyección intravenosa de drogas AAV en DMD. Basado en el patrón de mutación del gen DMD específico, el tiempo de inicio y la respuesta a la terapia inmunosupresora presente en el caso, se especula que la esencia de tales eventos tóxicos es la respuesta inmune del cuerpo al producto genéticamente modificado "mini proteína de atracación antimi muscular".
4. Toxicidad del ganglio de la raíz dorsal (DRG). La toxicidad de DRG con manifestaciones clínicas (sensación anormal de la mano y el pie) solo se ha informado en un paciente con esclerosis lateral familiar (ELA). Este caso recibió una dosis intratecal de 4.2 × 1014 Vg de drogas AAV. La toxicidad de DRG informada en otros estudios se descubrió accidentalmente durante la autopsia de los sujetos de drogas AAV, y los sujetos no tenían manifestaciones clínicas relevantes antes de su muerte.
5. Cerebro anormal MR señales. Se informó un ensayo clínico sobre el tratamiento de la enfermedad infantil tardía (enfermedad de CLN2) por inyección parenquimatosa cerebral bilateral de fármacos AAV bajo localización estereotáxica. Dentro de las 48 horas posteriores a la inyección, el cerebro de la cabeza del sujeto MR mostró hiperintensidades T2, hiperintensidades ponderadas en difusión y señales limitadas de difusión localizadas en el sitio de inyección. El seguimiento posterior de MR mostró que todos los sujetos desarrollaron nuevas áreas de señal de alta señal T2. Los investigadores no encontraron secuelas clínicas asociadas con señales anormales de MR. Se especula que las señales de RM anormales que aparecen temprano después de la administración están relacionadas con el edema/inflamación de tejido sostenido causada por la mayor concentración de medicamentos AAV alrededor de la punta del catéter de inyección, mientras que las altas señales de T2 que aparecen más tarde son difíciles de determinar si están relacionadas con la progresión de la enfermedad, los medicamentos AAV o los procedimientos de inyección.

Los estudios sobre muestras de pacientes (1 año después de la administración) y los primates no humanos (1 mes después de la inyección) han demostrado que la probabilidad de integración de AAV en el genoma es baja. Según el registro de seguridad de AAV en ensayos clínicos, el consenso actual en el campo de la terapia génica es que AAV tiene baja toxicidad genética en los humanos.

Las evaluaciones de seguridad preclínica preliminares de AAV-MECP2 en ratones RTT humanizados y macacos para comer cangrejo mostraron que, AAV-MECP2 no causó daño hepático o renal, daño nervioso, toxicidad inmune o cambios histopatológicos en órganos importantes en animales y la condición general de los animales era bueno. Por lo tanto, los datos existentes de AAV-MECP2 no indican riesgos clínicos claros. El evento adverso más común esperado para los sujetos que reciben AAV-MECP2 pueden ser la elevación de 1/2 de las enzimas hepáticas.

Riesgos asociados con la inmunosupresión preventiva:

Este protocolo estipula que a partir de un día antes de la administración de AAV-MECP2, la administración oral de 1 mg/kg de prednisolona o dosis equivalente de otros glucocorticoides debe iniciarse, y la dosis debe mantenerse durante al menos 30 días antes de reducir lentamente. El propósito de usar glucocorticoides es suprimir las respuestas inmunes innatas y adquiridas inducidas por los vectores AAV, y reducir las reacciones inmunes que son perjudiciales para la seguridad y la eficacia. Al usar hormonas, los eventos adversos relacionados con hormonas, incluidas las infecciones oportunistas, se monitorearán en los sujetos.

Corticosteroids (such as methylprednisolone and prednisone) have several clear side effects, including hypertension, tachycardia, congestive heart failure, changes in serum electrolytes, hyperglycemia, pain, elevated urea nitrogen and creatinine, osteoporosis and ischemic necrosis, decreased anti infective ability, dizziness, tremors, emotional instability, insomnia, Náuseas, vómitos, aumento de peso, presión intraocular elevada y la inducción de cataratas.

Durante el uso de hormonas, los investigadores monitorearán de cerca los eventos adversos mencionados anteriormente, especialmente las infecciones oportunistas que pueden ocurrir en los sujetos.

Análisis estadístico Este estudio es un estudio de exploración de dosis temprana con el objetivo principal de evaluar la seguridad, por lo tanto, no se realizó un cálculo formal del tamaño de la muestra.

La seguridad y la tolerabilidad del tratamiento se evalúan en función de la frecuencia y la gravedad de los eventos adversos que ocurren dentro de un año posterior a la administración. La proporción de sujetos con cualquier AE, cualquier SAE, cualquier AE relacionado con el fármaco de investigación y cualquier ≥ Grado 3 AE se analizará estadísticamente en su conjunto y por clases de órganos del sistema (SOC) y término preferido (PT), respectivamente. La incidencia de eventos adversos en diferentes cohortes de dosis también se analizará estadísticamente por separado.

Debido al pequeño tamaño de la muestra y la posibilidad de indicadores de efectividad variables entre los sujetos en diferentes etapas de la enfermedad, todos los análisis de eficacia en este estudio son descriptivos y no implican estadísticas inferenciales.