Posouzení klinických, buněčných a molekulárních účinků Royalactinu – mateří kašičky na hojení diabetických bércových vředů Wagnerova stupně II. (ROYALACIN)

Materiály a metody

Etická hlediska Studie byla provedena v souladu s pokyny správné klinické praxe (GCP). Všechny postupy dodržovaly etické standardy Výzkumného a bioetického výboru XXXXXXXXXX, Helsinské deklarace a obecného zákona o zdraví. Protokoly byly přísně dodržovány, data byla zpracována s přísnou důvěrností a od všech účastníků byl získán informovaný souhlas.

Kriteria zařazení Byli zařazeni dospělí pacienti s diabetes mellitus, kteří podstupují léčbu ran na nohou a kotnících. Kritéria způsobilosti vyžadovala rány větší než 4 cm², s více než 80 % granulační tkáně, zahrnující kůži, tuk nebo vazy bez postižení kosti, a neinfikované (Wagnerův stupeň II). Další požadavky zahrnovaly trvání více než 2 měsíce, kotníkovo-pažní index (ABI) větší než 0,5, podepsání formuláře informovaného souhlasu a schopnost účastnit se převazů třikrát týdně po dobu 4 týdnů.

Experimentální látky a randomizace Laboratoř biotechnologického centra FEMSA vyrobila 20 zkumavek (50 ml) obsahujících zlaté nanočástice a emulgátory. Deset zkumavek bylo formulováno s Royalactin v koncentraci 0,2 g/l, zatímco dalších 10 sloužilo jako kontrola bez peptidu. Laboratoř zkumavky randomizovala, očíslovala a spárovala a poskytla seznam pro spárovanou aplikaci.

Léčebný protokol Standardizované převazy byly prováděny třikrát týdně po dobu 4 týdnů v Centru chronických ran, diabetické nohy a hyperbarické medicíny XXXXX. Každá rána byla nejprve propláchnuta sterilní vodou a osušena sterilním gázovým čtvercem. Rána pak byla rozdělena (nebo rozdělení bylo vyznačeno) pomocí černého inkoustu na kůži a byl nanesen 0,5 cm pruh Hypafixu (BSN medical GmbH, ESSITY). Kruhová nálepka byla umístěna na perilezionální kůži k identifikaci čísla zkumavky (dole), ID pacienta (vpravo nahoře) a čísla převazu (vlevo nahoře).

Byly pořízeny standardní fotografie (aplikace Camera+, iPhone 15 Pro Max). Oblast byla jemně debridována třikrát sterilním gázovým čtvercem navlhčeným 0,12% chlorhexidinem (Clorhexi-Clean®, PISA). Na obě strany byla aplikována 2% ketanserinová gél (Sufrexal®, Janssen), následovaná aplikací odpovídajícího gél (Royalactin nebo placebo) na každou určenou část rány. Nakonec byla aplikována primární krytí z hydrovláken karboxymethylcelulózy sodné a regenerované celulózové vlákniny (Aquacell extra®, Convatec), chráněné sekundárním adhezivním lemovaným gázovým krytím (Border gauze®, Medline).

Sběr dat a histologická analýza Během prvního a posledního převazu (sezení 1 a 13) byly pořízeny fotografie k měření plochy každé strany v cm² (aplikace IMITO measure, iPhone 15 Pro Max). Dále byly získány 3 mm punch biopsie granulační tkáně z distálního okraje každé strany.

Vzorky biopsie byly rozřezány, označeny a obarveny pomocí hematoxylinu a eosinu (H&E), Massonova trichromu a imunohistochemie (IHC) pro expresi:

• CD31 (Roche)
• Vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF) (Biocare)
• Receptoru pro epidermální růstový faktor (EGFR) (Cell Marque).

Statistická analýza a vyhodnocení Byly vyhodnoceny výsledky ze sezení 1 a 13. Velikost rány byla zaznamenána v cm². Epitelizace, polymorfonukleární neutrofily (PMN), fibroblasty, angiogeneze a kolagen byly hodnoceny podle semikvantitativní histologické stupnice pro hodnocení ran. Procento tkáně exprimující VEGF a EGFR, stejně jako intenzita exprese (hodnocená 0 až 3+), byly uvedeny samostatně (obrázek 1 G-I). Data byla porovnána na začátku a po čtyřech týdnech, a to jak jako celková kohorta, tak porovnáním skupin Kontrola vs. Royalactin; byly analyzovány také jednotlivé proměnné.