Avaliação dos Efeitos Clínicos, Celulares e Moleculares da Royalactina-Geléia Real na Cicatrização de Úlceras do Pé Diabético de Wagner Grau II. (ROYALACIN)

Materiais e métodos

Considerações Éticas O estudo foi conduzido em conformidade com as diretrizes da Boa Prática Clínica (BPC). Todos os procedimentos aderiram aos padrões éticos do Comité de Investigação e Bioética do XXXXXXXXXX, à Declaração de Helsínquia e à Lei Geral da Saúde. Os protocolos foram rigorosamente seguidos, os dados foram tratados com confidencialidade rigorosa e o consentimento informado foi obtido de todos os participantes.

Critérios de Inclusão Foram incluídos pacientes adultos com Diabetes Mellitus em tratamento para feridas do pé e tornozelo. Os critérios de elegibilidade exigiam feridas maiores que 4 cm², com mais de 80% de tecido de granulação, envolvendo pele, gordura ou ligamentos sem envolvimento ósseo, e não infetadas (Grau II de Wagner). Requisitos adicionais incluíam uma duração superior a 2 meses, um índice tornozelo-braquial (ITB) superior a 0,5, a assinatura do formulário de consentimento informado e a capacidade de comparecer a mudanças de penso três vezes por semana durante 4 semanas.

Agentes Experimentais e Randomização O laboratório do Centro de Biotecnologia FEMSA produziu 20 tubos (50 ml) contendo nanopartículas de ouro e emulsionantes. Dez tubos foram formulados com Royalactin a 0,2 g/L, enquanto os outros 10 serviram como controlo sem o péptido. O laboratório randomizou, numerou e emparelhou os tubos, fornecendo uma lista para aplicação emparelhada.

Protocolo de Tratamento Mudanças de penso padronizadas foram realizadas três vezes por semana durante 4 semanas no Centro de Feridas Crónicas, Pé Diabético e Medicina Hiperbárica do XXXXX. Cada ferida foi primeiro irrigada com água estéril e seca com gaze estéril. A ferida foi então dividida (ou a divisão foi marcada) usando tinta preta na pele, e aplicada uma tira de 0,5 cm de Hypafix (BSN medical GmbH, ESSITY). Uma etiqueta circular foi colocada na pele perilesional para identificar o número do tubo (inferior), o ID do paciente (superior-direito) e o número da mudança de penso (superior-esquerdo).

Fotografias padrão foram tiradas (App Camera+, iPhone 15 Pro Max). A área foi suavemente desbridada três vezes com gaze estéril humedecida com Clorexidina a 0,12% (Clorhexi-Clean®, PISA). Gel de Ketanserina a 2% (Sufrexal®, Janssen) foi aplicado em ambos os lados, seguido da aplicação do gel correspondente (Royalactin ou placebo) em cada secção designada da ferida. Finalmente, foi aplicado um penso primário de hidrofibra de carboximetilcelulose sódica e fibra de celulose regenerada (Aquacell extra®, Convatec), protegido por um penso secundário de gaze adesiva com borda (Border gauze®, Medline).

Recolha de Dados e Análise Histológica Durante a primeira e última mudanças de penso (sessões 1 e 13), foram tiradas fotografias para medir a área de cada lado em cm² (App IMITO measure, iPhone 15 Pro Max). Além disso, foram obtidas biópsias por punch de 3 mm do tecido de granulação da borda distal de cada lado.

As amostras de biópsia foram seccionadas, etiquetadas e coradas usando Hematoxilina e Eosina (H&E), Tricrómio de Masson e imuno-histoquímica (IHQ) para a expressão de:

• CD31 (Roche)
• Fator de Crescimento do Endotélio Vascular (VEGF) (Biocare)
• Recetor do Fator de Crescimento Epidérmico (EGFR) (Cell Marque).

Análise Estatística e Avaliação Os resultados das sessões 1 e 13 foram avaliados. O tamanho da ferida foi registado em cm². A epitelização, neutrófilos polimorfonucleares (PMN), fibroblastos, angiogénese e colagénio foram classificados de acordo com uma escala histológica semiquantitativa para avaliação de feridas. A percentagem de tecido expressando VEGF e EGFR, bem como a intensidade da expressão (classificada de 0 a 3+), foram reportadas separadamente (Figura 1 G-I). Os dados foram comparados na linha de base e às quatro semanas, tanto como coorte total como comparando os grupos Controlo vs. Royalactin; variáveis individuais também foram analisadas.