Valutazione degli effetti clinici, cellulari e molecolari della Royalactina-Gelatina Reale sulla guarigione delle ulcere diabetiche del piede di grado II di Wagner. (ROYALACIN)

Materiali e metodi

Considerazioni etiche Lo studio è stato condotto in conformità con le linee guida della Buona Pratica Clinica (GCP). Tutte le procedure hanno rispettato gli standard etici del Comitato di Ricerca e Bioetica di XXXXXXXXXX, la Dichiarazione di Helsinki e la Legge Generale sulla Salute. I protocolli sono stati seguiti rigorosamente, i dati sono stati gestiti con riservatezza rigorosa e il consenso informato è stato ottenuto da tutti i partecipanti.

Criteri di inclusione Sono stati inclusi pazienti adulti con Diabete Mellito in trattamento per ferite del piede e della caviglia. I criteri di eleggibilità richiedevano ferite più grandi di 4 cm², con più dell'80% di tessuto di granulazione, che coinvolgessero pelle, grasso o legamenti senza coinvolgimento osseo, e non infette (Grado II di Wagner). Ulteriori requisiti includevano una durata di più di 2 mesi, un indice caviglia-braccio (ABI) superiore a 0,5, la firma del modulo di consenso informato e la capacità di partecipare ai cambi di medicazione tre volte a settimana per 4 settimane.

Agenti sperimentali e randomizzazione Il laboratorio del Centro di Biotecnologia FEMSA ha prodotto 20 tubi (50 ml) contenenti nanoparticelle d'oro ed emulsionanti. Dieci tubi sono stati formulati con Royalactin a 0,2 g/L, mentre gli altri 10 hanno servito come controllo senza il peptide. Il laboratorio ha randomizzato, numerato e accoppiato i tubi, fornendo un elenco per l'applicazione accoppiata.

Protocollo di trattamento I cambi di medicazione standardizzati sono stati eseguiti tre volte a settimana per 4 settimane presso il Centro per le Ferite Croniche, il Piede Diabetico e la Medicina Iperbarica di XXXXX. Ogni ferita è stata prima irrigata con acqua sterile e asciugata con garza sterile. La ferita è stata quindi divisa (o la divisione è stata rimarcata) utilizzando inchiostro nero sulla pelle, ed è stata applicata una striscia di 0,5 cm di Hypafix (BSN medical GmbH, ESSITY). Un'etichetta circolare è stata posizionata sulla pelle perilesionale per identificare il numero del tubo (in basso), l'ID del paziente (in alto a destra) e il numero del cambio di medicazione (in alto a sinistra).

Sono state scattate fotografie standard (App Camera+, iPhone 15 Pro Max). L'area è stata delicatamente detersa tre volte con garza sterile inumidita con Clorexidina allo 0,12% (Clorhexi-Clean®, PISA). Il gel di Ketanserina al 2% (Sufrexal®, Janssen) è stato applicato su entrambi i lati, seguito dall'applicazione del gel corrispondente (Royalactin o placebo) su ciascuna sezione di ferita designata. Infine, è stata applicata una medicazione primaria di idrofibra di carbossimetilcellulosa sodica e fibra di cellulosa rigenerata (Aquacell extra®, Convatec), protetta da una medicazione secondaria di garza adesiva con bordo (Border gauze®, Medline).

Raccolta dei dati e analisi istologica Durante il primo e l'ultimo cambio di medicazione (sessioni 1 e 13), sono state scattate fotografie per misurare l'area di ciascun lato in cm² (App IMITO measure, iPhone 15 Pro Max). Inoltre, sono state ottenute biopsie a punch di 3 mm del tessuto di granulazione dal margine distale di ciascun lato.

I campioni di biopsia sono stati sezionati, etichettati e colorati utilizzando Ematossilina e Eosina (H&E), Tricromo di Masson e immunoistochimica (IHC) per l'espressione di:

• CD31 (Roche)
• Fattore di Crescita dell'Endotelio Vascolare (VEGF) (Biocare)
• Recettore del Fattore di Crescita Epidermico (EGFR) (Cell Marque).

Analisi statistica e valutazione I risultati delle sessioni 1 e 13 sono stati valutati. La dimensione della ferita è stata registrata in cm². L'epitelizzazione, i neutrofili polimorfonucleati (PMN), i fibroblasti, l'angiogenesi e il collagene sono stati valutati secondo una scala istologica semiquantitativa per la valutazione delle ferite. La percentuale di tessuto che esprime VEGF e EGFR, nonché l'intensità dell'espressione (valutata da 0 a 3+), sono state riportate separatamente (Figura 1 G-I). I dati sono stati confrontati al basale e a quattro settimane, sia come coorte totale che confrontando i gruppi Controllo vs. Royalactin; sono state analizzate anche variabili individuali.