Kliinisten, solutason ja molekyylitason vaikutusten arviointi Royalactin-sisältöisen kuningatarhyytelön vaikutuksesta Wagner-luokan II diabeteksen jalkahaavojen paranemisessa. (ROYALACIN)

Materiaalit ja menetelmät

Eettiset näkökohdat Tutkimus suoritettiin Hyvän kliinisen käytännön (GCP) ohjeiden mukaisesti. Kaikki toimenpiteet noudattivat XXXXXXXXXX:n tutkimus- ja bioetiikkakomitean eettisiä standardeja, Helsingin julistusta ja yleistä terveyslakia. Protokollia noudatettiin tarkasti, tietoja käsiteltiin tiukassa luottamuksellisuudessa ja kaikilta osallistujilta saatiin tietoon perustuva suostumus.

Ottamiskriteerit Mukaan otettiin aikuiset diabetes mellitus -potilaat, joilla hoidettiin jalka- ja nilkkahaavoja. Kelpoisuuskriteerit edellyttivät yli 4 cm²:n haavoja, joissa oli yli 80 % granulaatiokudosta, ja jotka koskettivat ihoa, rasvaa tai ligamentteja ilman luun osallistumista sekä olivat infektioittomia (Wagner-luokka II). Lisävaatimuksina olivat yli 2 kuukauden kesto, nilkkaolkavaltimoiden indeksi (ABI) yli 0,5, tietoon perustuvan suostumuslomakkeen allekirjoittaminen sekä kyky osallistua siteidenvaihtoihin kolme kertaa viikossa 4 viikon ajan.

Kokeelliset aineet ja satunnaistaminen FEMSA Biotechnology Center -laboratorio valmisti 20 putkea (50 ml), jotka sisälsivät kultananopartikkeleita ja emulgointiaineita. Kymmenen putkea oli valmistettu Royalactinilla 0,2 g/l, kun taas muut 10 toimivat kontrollina ilman peptidia. Laboratorio satunnaisti, numeroi ja paritteli putket ja antoi listan parillista sovellusta varten.

Hoitoprotokolla Standardoituja siteidenvaihtoja suoritettiin kolme kertaa viikossa 4 viikon ajan XXXX:n kroonisten haavojen, diabeettisen jalan ja hyperbaarisen lääketieteen keskuksessa. Jokainen haava huuhteltiin ensin steriilillä vedellä ja kuivattiin steriilillä sideharsolla. Haava jaettiin (tai jako merkittiin uudelleen) mustalla musteella iholla, ja 0,5 cm:n Hypafix-nauha (BSN medical GmbH, ESSITY) asetettiin. Pyöreä tarra asetettiin haavan ympärillä olevaan ihoon tunnistamaan putken numero (alhaalla), potilaan tunniste (oikealla ylhäällä) ja siteidenvaihdon numero (vasemmalla ylhäällä).

Otettiin vakioidut valokuvat (Camera+ App, iPhone 15 Pro Max). Alue puhdistettiin varovasti kolme kertaa steriilillä sideharsolla, joka oli kosteutettu 0,12 % klooriheksidiinillä (Clorhexi-Clean®, PISA). Ketanseriini 2 % geeli (Sufrexal®, Janssen) levitettiin molemmille puolille, minkä jälkeen vastaava geeli (Royalactin tai lumelääke) levitettiin kullekin osoitetulle haavaosalle. Lopuksi asetettiin ensisijainen side natriumkarboksimetyyliselluloosahydrokuitu- ja regeneroidusta selluloosakuidusta (Aquacell extra®, Convatec), suojattu toissijaisella adheesiivisella reunussideharsosideella (Border gauze®, Medline).

Tietojen kerääminen ja histologinen analyysi Ensimmäisen ja viimeisen siteidenvaihdon aikana (istunnot 1 ja 13) otettiin valokuvia kummankin puolen pinta-alan mittaamiseksi cm² (IMITO measure App, iPhone 15 Pro Max). Lisäksi otettiin 3 mm:n rei'itysnäytteet granulaatiokudoksesta kummankin puolen kaukaiselta reunasta.

Biopsianäytteet leikattiin, merkittiin ja värjättiin käyttäen hematoksiliinia ja eosiinia (H&E), Massonin trikromia ja immunohistokemiaa (IHC) seuraavien ilmentymien osalta:

• CD31 (Roche)
• Vaskulaarinen endoteliaalinen kasvutekijä (VEGF) (Biocare)
• Epidermaalisen kasvutekijäreseptorin (EGFR) (Cell Marque).

Tilastollinen analyysi ja arviointi Istuntojen 1 ja 13 tuloksia arvioitiin. Haavan koko tallennettiin cm². Epitelisaatio, polymorphonuclear neutrofiilit (PMN), fibroblastit, angiogeneesi ja kollageeni pisteytettiin puolikvantitatiivisen histologisen haava-arviointiasteikon mukaan. VEGF:ää ja EGFR:ää ilmentävän kudoksen prosenttiosuus sekä ilmentymisen intensiteetti (pisteytetty 0–3+) raportoitiin erikseen (kuva 1 G–I). Tietoja verrattiin lähtötilanteessa ja neljän viikon jälkeen sekä kokonaiskohorttina että vertaamalla Kontrolli vs. Royalactin -ryhmiä; yksittäisiä muuttujia analysoitiin myös erikseen.