Ocena klinicznych, komórkowych i molekularnych efektów Royalactin-Żelu Królewskiego na gojenie się owrzodzeń stopy cukrzycowej w stopniu II według Wagnera. (ROYALACIN)

Materiały i metody

Uwagi etyczne Badanie przeprowadzono zgodnie z wytycznymi Dobrej Praktyki Klinicznej (GCP). Wszystkie procedury przestrzegały standardów etycznych Komisji ds. Badań i Bioetyki XXXXXXXXXX, Deklaracji Helsińskiej oraz Ustawy o Ogólnej Ochronie Zdrowia. Protokoły były ściśle przestrzegane, dane były przetwarzane z rygorystyczną poufnością, a od wszystkich uczestników uzyskano świadomą zgodę.

Kryteria włączenia Włączono dorosłych pacjentów z cukrzycą, poddawanych leczeniu ran stopy i kostki. Kryteria kwalifikowalności wymagały ran większych niż 4 cm², z ponad 80% tkanki ziarninowej, obejmujących skórę, tkankę tłuszczową lub więzadła bez zajęcia kości, i niezakazanych (stopień II wg Wagnera). Dodatkowe wymagania obejmowały czas trwania ponad 2 miesiące, wskaźnik kostka-ramię (ABI) większy niż 0,5, podpisanie formularza świadomej zgody oraz zdolność do uczestnictwa w zmianach opatrunków trzy razy w tygodniu przez 4 tygodnie.

Czynniki eksperymentalne i randomizacja Laboratorium Centrum Biotechnologii FEMSA wyprodukowało 20 tubek (50 ml) zawierających nanocząsteczki złota i emulgatory. Dziesięć tubek było formulowanych z Royalactin w stężeniu 0,2 g/L, podczas gdy pozostałe 10 służyło jako kontrola bez peptydu. Laboratorium przeprowadziło randomizację, ponumerowało i sparowało tubki, dostarczając listę do sparowanego stosowania.

Protokół leczenia Standardowe zmiany opatrunków przeprowadzano trzy razy w tygodniu przez 4 tygodnie w Centrum Ran Przewlekłych, Stopy Cukrzycowej i Medycyny Hiperbarycznej XXXXX. Każdą ranę najpierw przepłukiwano sterylną wodą i osuszano sterylną gazą. Następnie ranę dzielono (lub zaznaczano podział) za pomocą czarnego tuszu na skórze i nakładano pasek Hypafix (BSN medical GmbH, ESSITY) o szerokości 0,5 cm. Okrągłą etykietę umieszczano na skórze około rany, aby zidentyfikować numer tubki (dół), identyfikator pacjenta (góra po prawej) i numer zmiany opatrunku (góra po lewej).

Wykonywano standardowe fotografie (aplikacja Camera+, iPhone 15 Pro Max). Obszar delikatnie oczyszczano trzy razy sterylną gazą zwilżoną 0,12% chlorheksydyną (Clorhexi-Clean®, PISA). Żel ketanseryny 2% (Sufrexal®, Janssen) nakładano na obie strony, a następnie na każdą wyznaczoną sekcję rany nakładano odpowiedni żel (Royalactin lub placebo). Na koniec nakładano opatrunek pierwotny z hydrowłókna karboksymetylocelulozy sodowej i włókien celulozowych regenerowanych (Aquacell extra®, Convatec), chroniony wtórnym opatrunkiem z gazy z klejącą obwódką (Border gauze®, Medline).

Zbieranie danych i analiza histologiczna Podczas pierwszej i ostatniej zmiany opatrunku (sesje 1 i 13) wykonano fotografie, aby zmierzyć powierzchnię każdej strony w cm² (aplikacja IMITO measure, iPhone 15 Pro Max). Dodatkowo pobierano biopsje wycinkowe tkanki ziarninowej o średnicy 3 mm z dystalnej krawędzi każdej strony.

Próbki z biopsji były cięte, etykietowane i barwione za pomocą hematoksyliny i eozyny (H&E), barwienia trichromem Massona oraz immunohistochemii (IHC) w celu oceny ekspresji:

• CD31 (Roche)
• czynnika wzrostu śródbłonka naczyniowego (VEGF) (Biocare)
• receptora naskórkowego czynnika wzrostu (EGFR) (Cell Marque).

Analiza statystyczna i ocena Oceniano wyniki z sesji 1 i 13. Wielkość rany rejestrowano w cm². Nabłonkowanie, neutrofile wielojądrzaste (PMN), fibroblasty, angiogenezę i kolagen oceniano według półilościowej skali histologicznej do oceny ran. Procent tkanki eksprimującej VEGF i EGFR oraz intensywność ekspresji (oceniana od 0 do 3+) podano oddzielnie (Rycina 1 G-I). Dane porównano na początku i po czterech tygodniach, zarówno dla całej kohorty, jak i porównując grupy Kontrolną vs. Royalactin; analizowano również poszczególne zmienne.