Оценка клинических, клеточных и молекулярных эффектов Роялактина-маточного молочка на заживление диабетических язв стопы по Вагнеру II степени. (ROYALACIN)

Материалы и методы

Этические соображения Исследование проводилось в соответствии с руководящими принципами Надлежащей клинической практики (GCP). Все процедуры соответствовали этическим стандартам Комитета по исследованиям и биоэтике XXXXXXXXXX, Хельсинкской декларации и Общему закону о здравоохранении. Протоколы строго соблюдались, данные обрабатывались с соблюдением строгой конфиденциальности, и от всех участников было получено информированное согласие.

Критерии включения В исследование были включены взрослые пациенты с сахарным диабетом, проходящие лечение ран стопы и голеностопного сустава. Критерии приемлемости требовали наличия ран размером более 4 см², с более чем 80% грануляционной ткани, затрагивающих кожу, жировую ткань или связки без вовлечения кости, и неинфицированных (степень II по Вагнеру). Дополнительные требования включали продолжительность более 2 месяцев, лодыжечно-плечевой индекс (ЛПИ) более 0,5, подписание формы информированного согласия и возможность посещения перевязок три раза в неделю в течение 4 недель.

Экспериментальные агенты и рандомизация Лаборатория Центра биотехнологий FEMSA произвела 20 тюбиков (50 мл), содержащих золотые наночастицы и эмульгаторы. Десять тюбиков были приготовлены с Роялактином в концентрации 0,2 г/л, а остальные 10 служили контролем без пептида. Лаборатория рандомизировала, пронумеровала и спарила тюбики, предоставив список для парного применения.

Протокол лечения Стандартизированные перевязки проводились три раза в неделю в течение 4 недель в Центре лечения хронических ран, диабетической стопы и гипербарической медицины XXXXX. Каждая рана сначала промывалась стерильной водой и высушивалась стерильной марлей. Затем рана делилась (или деление отмечалось) с помощью черных чернил на коже, и наносилась полоска Hypafix (BSN medical GmbH, ESSITY) шириной 0,5 см. Круглая этикетка размещалась на перилезионной коже для идентификации номера тюбика (внизу), идентификатора пациента (вверху справа) и номера перевязки (вверху слева).

Делались стандартные фотографии (приложение Camera+, iPhone 15 Pro Max). Область трижды аккуратно очищалась стерильной марлей, смоченной 0,12% Хлоргексидином (Clorhexi-Clean®, PISA). На обе стороны наносился гель Кетансерина 2% (Sufrexal®, Janssen), затем на каждый предназначенный участок раны наносился соответствующий гель (Роялактин или плацебо). Наконец, накладывалась первичная повязка из гидроволокна карбоксиметилцеллюлозы натрия и регенерированного целлюлозного волокна (Aquacell extra®, Convatec), защищенная вторичной адгезивной марлевой повязкой с бордюром (Border gauze®, Medline).

Сбор данных и гистологический анализ Во время первой и последней перевязок (сессии 1 и 13) делались фотографии для измерения площади каждой стороны в см² (приложение IMITO measure, iPhone 15 Pro Max). Кроме того, были взяты биопсии грануляционной ткани размером 3 мм с дистального края каждой стороны.

Образцы биопсий были разрезаны, промаркированы и окрашены с использованием гематоксилина и эозина (H&E), трихрома Массона и иммуногистохимии (ИГХ) для определения экспрессии:

• CD31 (Roche)
• Фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) (Biocare)
• Рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (Cell Marque).

Статистический анализ и оценка Результаты сессий 1 и 13 были оценены. Размер раны регистрировался в см². Эпителизация, полиморфноядерные нейтрофилы (ПМЯ), фибробласты, ангиогенез и коллаген оценивались по полуколичественной гистологической шкале для оценки ран. Процент ткани, экспрессирующей VEGF и EGFR, а также интенсивность экспрессии (оценка от 0 до 3+) сообщались отдельно (Рисунок 1 G-I). Данные сравнивались на исходном уровне и через четыре недели как для всей когорты, так и при сравнении групп Контроль и Роялактин; также анализировались отдельные переменные.