Vurdering af de kliniske, cellulære og molekylære effekter af Royalactin-Royal Jelly på helingen af Wagner Grad II diabetiske fodsår. (ROYALACIN)

Materialer og metoder

Etiske overvejelser: Studiet blev gennemført i overensstemmelse med retningslinjerne for god klinisk praksis (GCP). Alle procedurer overholdt de etiske standarder for Forsknings- og Bioetikudvalget ved XXXXXXXXXX, Helsinkideklarationen og den generelle sundhedslovgivning. Protokoller blev strengt fulgt, data blev håndteret med streng fortrolighed, og informeret samtykke blev indhentet fra alle deltagere.

Inklusionskriterier: Voksne patienter med diabetes mellitus under behandling for fod- og ankelsår blev inkluderet. Berettigelseskriterier krævede sår større end 4 cm², med mere end 80% granulationsvæv, involverende hud, fedt eller ligamenter uden knogleinvolvering, og ikke-infekterede (Wagner grad II). Yderligere krav inkluderede en varighed på mere end 2 måneder, en ankel-brakial indeks (ABI) større end 0,5, underskrivelse af det informerede samtykkeformular og evnen til at deltage i forbindingsskift tre gange om ugen i 4 uger.

Eksperimentelle agenser og randomisering: FEMSA Biotechnology Center-laboratoriet producerede 20 tuber (50 ml) indeholdende guldnanopartikler og emulgatorer. Ti tuber blev formuleret med Royalactin ved 0,2 g/L, mens de andre 10 tjente som kontrol uden peptidet. Laboratoriet randomiserede, nummererede og parrede tuberne og leverede en liste til parret anvendelse.

Behandlingsprotokol: Standardiserede forbindingsskift blev udført tre gange om ugen i 4 uger ved Kronisk Sår, Diabetisk Fod og Hyperbar Medicin Center i XXXXX. Hvert sår blev først skyllet med sterilt vand og tørret med steril gaz. Såret blev derefter opdelt (eller opdelingen blev markeret) ved brug af sort blæk på huden, og en 0,5 cm strimmel Hypafix (BSN medical GmbH, ESSITY) blev påført. Et cirkulært mærkat blev placeret på den perilesionelle hud for at identificere tubenummeret (bund), patient-ID (øverst til højre) og forbindingsskiftnummeret (øverst til venstre).

Standardfotografier blev taget (Camera+ App, iPhone 15 Pro Max). Området blev forsigtigt debridéret tre gange med steril gaz fugtet med 0,12% Chlorhexidin (Clorhexi-Clean®, PISA). Ketanserin 2% gel (Sufrexal®, Janssen) blev påført på begge sider, efterfulgt af påføring af den tilsvarende gel (Royalactin eller placebo) til hver udpegede sårsektion. Til sidst blev en primær forbinding af natriumcarboxymethylcellulose hydrofiber og regenereret cellulosefiber (Aquacell extra®, Convatec) påført, beskyttet af en sekundær adhesiv kantgazforbinding (Border gauze®, Medline).

Dataindsamling og histologisk analyse: Under det første og sidste forbindingsskift (session 1 og 13) blev fotografier taget for at måle området af hver side i cm² (IMITO measure App, iPhone 15 Pro Max). Derudover blev der taget 3 mm punch-biopsier af granulationsvævet fra den distale kant af hver side.

Biopsiprøver blev sektioneret, mærket og farvet ved brug af Hematoxylin og Eosin (H&E), Massons Trichrome og immunohistokemi (IHC) for udtrykket af:

• CD31 (Roche)
• Vaskulær endotel vækstfaktor (VEGF) (Biocare)
• Epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) (Cell Marque).

Statistisk analyse og evaluering: Resultater fra session 1 og 13 blev evalueret. Sårstørrelse blev registreret i cm². Epitelialisering, polymorfonukleære neutrofile (PMN), fibroblaster, angiogenese og kollagen blev scoret efter en semikvantitativ histologisk skala til sårvurdering. Procentdelen af væv, der udtrykker VEGF og EGFR, samt intensiteten af udtrykket (scoret 0 til 3+), blev rapporteret separat (Figur 1 G-I). Data blev sammenlignet ved baseline og efter fire uger, både som en total kohort og ved at sammenligne kontrol- vs. Royalactin-grupperne; individuelle variable blev også analyseret.