Synbiotika og fækal mikrobiotatransplantation til behandling af ikke-alkoholisk Steatohepatitis (SYNCH)

Hovedformål At undersøge det terapeutiske potentiale af A. soehngenii og pasteuriseret A. muciniphila kombineret med B. animalis subsp. lactis og fructo-oligosaccharider med og uden konditionerede veganske lyofiliseret fækal mikrobiota transplantation (LFMT) kapsler for at reducere NASH hos patienter med NASH og NASH-fibrose.

Sekundært mål At undersøge mekanismerne for A. soehngenii og pasteuriseret A. muciniphila kombineret med B. animalis subsp. lactis og FOS med og uden konditionerede veganske LFMT-kapsler til at reducere NASH hos patienter med NASH og NASH-fibrose.

Studere design:

Dobbeltblind randomiseret placebokontrolleret interventionsstudie.

Undersøgelsespopulation:

Patienter mellem 18-75 år med biopsi-bevist NASH opnået op til 32 uger før screening baseret på tandemlæsning af to ekspert leverpatologer: SAF Steatosis score ≥1, Aktivitet ≥2, Fibrose <4; 50 % af deltagerne bør mindst have NASH fibrose stadie 1, 2 eller 3 i henhold til NASH CRN fibrose stadiesystem.

Eksklusionskriterier er: Aktuelt eller historie med betydeligt alkoholforbrug i en periode på mere end 3 på hinanden følgende måneder inden for 1 år før screening (betydeligt alkoholforbrug er defineret som mere end 2 enheder/dag for kvinder og mere end 3 internationale enheder/dag for mænd 1 international enhed indeholder i gennemsnit ±14 gram alkohol), levercirrhose eller hepatocellulært karcinom, hepatitis B og/eller C, autoimmun hepatitis, Wilsons sygdom, primær skleroserende kolangitis, primær galdekolangitis, alfa-1-antitripsinmangel og hæmokromatose, levertransplantationshistorie, nuværende placering på en levertransplantationsliste, brug af præ-, pro- eller synbiotika, brug af systemiske antibiotika 3 måneder før randomisering, brug af tamoxifen, methotrexat eller amiodaron, forudgående eller planlagt fedmekirurgi, diabetes mellitus med aktiv GLP-1 receptor agonist behandling, blødningsforstyrrelse, International normalized ratio (INR) af protrombintid >1,4 eller trombocyttal <50 109/L ved screening, brug af anti-trombocyt/koagulant terapi, som ikke kan afbrydes midlertidigt, evt. større kardiovaskulær hændelse inden for 6 måneder før screening (f. myokardieinfarkt, cerebrovaskulær ulykke), langvarig kompromitteret immunitet (f.eks. nylig cytotoksisk kemoterapi, HIV-infektion med et CD4-tal < 240), aktiv eller tidligere invasiv malignitet (undtagen kurativt behandlede in situ carcinomer [f.eks. livmoderhalskræft] eller ikke-melanom hudkræft), medmindre en fuldstændig remission blev opnået, operation planlagt til forsøgsperioden, bortset fra mindre kirurgiske indgreb efter investigator, gravide eller ammende kvinder, enhver tilstand, der efter investigatorens mening kan bringe deltagernes sikkerhed eller overholdelse af protokollen i fare, og deltagelse i en anden samtidig klinisk forsøg.

I alt 48 patienter vil modtage synbiotisk behandling med A. soehngenii, pasteuriseret A. muciniphila, B. animalis subsp. lactis og fructo-oligosaccharider, og vil blive randomiseret 1:1 til behandling med FMT eller placebo, stratificeret til brug af protonpumpehæmmere, metforminbrug og histopatologisk fibrose-score.

Intervention:

Modtagerdeltagere Fra dag -3 før den første FMT indtil afslutningen af ​​undersøgelsen vil alle modtagerdeltagere modtage en oral daglig enkeltdosis på 5 g FOS. Efterfølgende vil deltagerne blive randomiseret til magre donor FMT-kapsler (donorer konditioneret med WholeFiber) eller placebo (blindet design)1.

Ved baseline (dag 0) og i uge 8 (dag 56) og uge 16 (dag 112) vil deltagerne indtage 21 LFMT- eller placebokapsler. Studiebesøgene vil være med 8 ugers mellemrum, selvom en margin på -3 dage til +3 dage er implementeret for at tage deltagernes tidsplan og tilgængelighed i betragtning. Derudover vil deltagerne dagligt tage 2 kapsler LFMT eller placebo i hele undersøgelsesperioden (24 uger).

Forskerne har tidligere observeret, at tarmmikrobiotasammensætningen hos modtageren er påvirket op til 8-12 uger efter donor FMT1, så dette tidsvindue sikrer en stabil donortarmmikrobiotasammensætning under undersøgelsen.

I løbet af den 24-ugers interventionsperiode vil alle deltagere tage daglige doser af 109 A. soehngenii CH-106-celler (dosis baseret på tidligere undersøgelser inklusive toksikologisk undersøgelse)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (en velundersøgt stamme markedsført som et probiotikum af Sacco SRL) og 3x1010 pasteuriserede A. muciniphila ATCC BAA-835T-celler (dosering baseret på EFSA-godkendelse og opnået fra A-Mansia Biotech).

Perkutane leverbiopsier vil blive udført som en del af screeningen, når deltagerne teoretisk er berettigede til deltagelse, medmindre der er udført en leverbiopsi inden for de foregående 36 uger. En tandem-læsning af to leverpatologer, der er blindet for ethvert andet resultat, vil afgøre, om patienter vil blive inkluderet i undersøgelsen. Ved 24 uger vil der blive udført endnu en leverbiopsi for at undersøge effekten af ​​FMT, som også vil blive gennemgået af to leverpatologer (igen blindet for ethvert andet resultat). NASH-CRN-klassificeringen vil blive vurderet på H&E-objektglas, for steatose, inflammation og ballondannelse, og med et Sirius-rødfarvet objektglas til evaluering af fibrose. RNA til RNA-sekventering vil blive isoleret.

Differentiel genekspression vil blive vurderet over tid (baseline og 24 uger) og ved behandlingstildeling (vegansk donor FMT versus placebo).

Afføring vil blive opsamlet ved baseline og efter uge 2, 8, 10, 16, 18 og 24 for at undersøge ændringerne i tarmmikrobiom. Markører for tarmbarrierefunktion vil også blive vurderet.

Blod vil blive indsamlet ved baseline og ved 8, 16 og 24 uger for at undersøge almindelige leverenzymer, indikatorer for glykæmisk kontrol, lipider og generelle og mere NASH-specifikke inflammationsparametre.

En multiparametrisk MRI af lever (MRI-PDFF, MR elastografi, korrigeret T1) og af visceralt og subkutant fedt vil blive udført ved baseline og efter 24 uger for at estimere visceralt og subkutant fedtvævsdepotvolumen, leverfedtindhold samt leverfibrose og betændelse.

Kontinuerlige glukosemålinger vil blive udført derhjemme ved hjælp af bærbare enheder i en sammenhængende periode på 1 uge (7 dage) i ugen før baseline, uge ​​1, 9, 17 og 25.

Veganske donorer

Fækale donorprøver vil blive opsamlet, lyofiliseret ('frysetørret') og indkapslet (se afsnit 6.8). Derefter vil LFMT-kapslerne blive opbevaret ved -80°C. Donorer vil blive grundigt screenet for infektionssygdomme.

Primært resultat

For at påvise, at A. soehngenii kombineret med pasteuriseret A. muciniphila og B. animalis subsp. lactis, FOS og konditionerede veganske LFMT-kapsler reducerer NASH som defineret ved en forbedring af leverens histologi hos personer med NASH og fibrose stadie 0-3, med forbedring defineret som reduktion af steatohepatitis med ≥1 SAF-A-punkt og ingen forværring af leverfibrose, eller forbedring af ≥ 1-trins leverfibrose og ingen forværring af steatohepatitis.

Sekundære resultater

For at demonstrere, at den kombinerede behandling forbedrer:

• ikke-invasive resultater af NAFLD, dvs. multiparametrisk MRI af lever og omgivende subkutant fedtvæv (MRI-PDFF, MR elastografi, korrigeret T1), FibroScan Elastografi og kontrollerede dæmpningsparametre og plasmapanel Enhanced Liver Fibrosis (ELF) panel, pro-C3 .
• ændring i blodmarkører fra baseline til afslutning af behandlingen, nemlig: leverenzymer (dvs. alanin amino transferase (ALT), aspartat amino transferase (AST), gamma glutamyl transferase (GGT), alkalisk phosphatase (ALP)), inflammatoriske blodmarkører (dvs. leukocytter, monocytter, CRP, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-a, IFN-y, andre inflammatoriske markører), SCFA (dvs. propionat, butyrat, acetat), laktat, ethanol, plasmalipider (dvs. LDL, HDL, triglycerider, totalt kolesterol), albumin, kreatinin, hæmoglobin, FGF-21, adiponectin, leptin, lipopolysaccharider, østrogen, vitamin B12, folatsyre, zonulin og andre metabolomiske og lipodomiske resultater.
• mikrobiom-udlæsninger (sammensætning, engraftment, stammesporing) og metabolitter, fækal SCFA-sammensætning og fækal albumin.
• glykæmisk kontrol, insulinresistens, kropsvægt/BMI, taljeomkreds og kropsfedtprocent
• MetSy-kriterier / %
• SCFA-produktion og GLP1-udgivelse
• levergenekspressionsprofil: lipogene, inflammatoriske og fibrogene veje.
• leverpatologi, histopatologiske træk, immunfluorescens og vurdering af patofysiologiske proteiner.
• NAFLD histologi som vurderet med en dybt indlært algoritme, der scorer hele diasbilleder af leverbiopsier.
• Kontinuerlig glukosemonitorering (4x 7 dage i træk)
• livskvalitet (generel (SF36) og NAFLD/NASH-specifik (CDLQ-NAFLD)).