Синбиотики и трансплантация фекальной микробиоты для лечения неалкогольного стеатогепатита (SYNCH)

Основная цель Изучить терапевтический потенциал A. soehngenii и пастеризованной A. muciniphila в сочетании с B. animalis subsp. lactis и фруктоолигосахариды с капсулами кондиционированной веганской лиофилизированной фекальной микробиоты (LFMT) и без них для снижения НАСГ у пациентов с НАСГ и НАСГ-фиброзом.

Второстепенная цель. Исследовать механизмы A. soehngenii и пастеризованной A. muciniphila в сочетании с B. animalis subsp. lactis и ФОС с кондиционированными веганскими капсулами LFMT и без них в снижении НАСГ у пациентов с НАСГ и НАСГ-фиброзом.

Дизайн исследования:

Двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое интервенционное исследование.

Исследуемая популяция:

Пациенты в возрасте от 18 до 75 лет с подтвержденным биопсией НАСГ, полученным за 32 недели до скрининга на основе тандемного чтения двух опытных патологов печени: SAF Оценка стеатоза ≥1, Активность ≥2, Фиброз <4; 50% участников должны иметь как минимум 1, 2 или 3 стадию фиброза НАСГ в соответствии с системой стадирования фиброза НАСГ CRN.

Критерии исключения: Текущее или история значительного употребления алкоголя в течение более 3 месяцев подряд в течение 1 года до скрининга (значительное потребление алкоголя определяется как более 2 единиц в день для женщин и более 3 международных единиц в день для мужчин). , в среднем; 1 международная единица содержит ±14 г алкоголя), цирроз печени или гепатоцеллюлярная карцинома, гепатит В и/или С, аутоиммунный гепатит, болезнь Вильсона, первичный склерозирующий холангит, первичный билиарный холангит, дефицит альфа-1-антитрипсина и гемохроматоз, пересадка печени в анамнезе, текущее положение в списке пересадки печени, использование пре-, про- или синбиотиков, использование системных антибиотиков за 3 месяца до рандомизации, использование тамоксифена, метотрексата или амиодарона, предшествующая или планируемая бариатрическая операция, сахарный диабет с лечением активными агонистами рецептора ГПП-1, нарушение свертываемости крови, международное нормализованное отношение (МНО) протромбинового времени >1,4 или количество тромбоцитов <50 109/л при скрининге, применение антитромбоцитарной/коагулянтной терапии, которая не может быть временно прекращена, любое серьезное сердечно-сосудистое событие в течение 6 месяцев до скрининга (например, инфаркт миокарда, нарушение мозгового кровообращения), длительное ослабление иммунитета (например, недавняя цитотоксическая химиотерапия, ВИЧ-инфекция с количеством CD4 < 240), активное или предшествующее инвазивное злокачественное новообразование в анамнезе (за исключением карциномы in situ [например, шейки матки] или немеланомного рака кожи), если не была достигнута полная ремиссия, хирургическое вмешательство запланированные на период продолжительности исследования, за исключением незначительных хирургических вмешательств по мнению исследователя, беременных или кормящих женщин, любых состояний, которые, по мнению исследователя, могут поставить под угрозу безопасность участников или соблюдение протокола, а также участия в других сопутствующих клинических пробный.

В общей сложности 48 пациентов получат синбиотическое лечение A. soehngenii, пастеризованным A. muciniphila, B. animalis subsp. lactis и фруктоолигосахаридов, и будут рандомизированы 1:1 для лечения FMT или плацебо, стратифицированы для использования ингибитора протонной помпы, использования метформина и оценки гистопатологического фиброза.

Вмешательство:

Участники-реципиенты Со дня -3 до первого ТФМ и до завершения исследования все участники-реципиенты будут получать пероральную суточную разовую дозу 5 г ФОС. Впоследствии участники будут рандомизированы для получения капсул ТФМ от худых доноров (доноры, обработанные WholeFiber) или плацебо (слепой дизайн)1.

На исходном уровне (0-й день), на 8-й неделе (56-й день) и 16-й неделе (112-й день) участники будут принимать 21 капсулу LFMT или плацебо. Учебные визиты будут проходить с разницей в 8 недель, хотя предусмотрен запас от -3 дней до +3 дней, чтобы учесть расписание и доступность участников. Кроме того, участники будут ежедневно принимать по 2 капсулы LFMT или плацебо в течение всего периода исследования (24 недели).

Исследователи ранее наблюдали, что состав кишечной микробиоты у реципиента изменяется в течение 8-12 недель после FMT1 донора, поэтому это временное окно обеспечивает стабильный состав кишечной микробиоты донора во время исследования.

В течение 24-недельного периода вмешательства все участники будут принимать ежедневные дозы 109 клеток A. soehngenii CH-106 (дозировка основана на предыдущих исследованиях, включая токсикологические исследования)2,3, 1010 клеток B. animalis subsp. lactis BLC1 (хорошо изученный штамм, продаваемый Sacco SRL в качестве пробиотика) и 3x1010 пастеризованных клеток A. muciniphila ATCC BAA-835T (дозировка основана на одобрении EFSA и получена от A-Mansia Biotech).

Чрескожная биопсия печени будет проводиться как часть скрининга, когда участники теоретически имеют право на участие, если биопсия печени не проводилась в течение предыдущих 36 недель. Тандемное чтение двумя патологами печени, ослепленными любыми другими результатами, определит, будут ли пациенты включены в исследование. Через 24 недели будет проведена еще одна биопсия печени для изучения эффекта ТФМ, которая также будет рассмотрена двумя патологами печени (опять же ослепленными для любого другого результата). Классификация NASH-CRN будет оцениваться на предметных стеклах H&E для стеатоза, воспаления и баллонирования, а также на предметном стекле, окрашенном Sirius red, для оценки фиброза. РНК для секвенирования РНК будет выделена.

Дифференциальную экспрессию генов будут оценивать с течением времени (базовый уровень и 24 недели) и в зависимости от назначения лечения (ТФМ донора-вегана по сравнению с плацебо).

Фекалии будут собираться в начале исследования, а также через 2, 8, 10, 16, 18 и 24 недели, чтобы исследовать изменения в микробиоме кишечника. Также будут оцениваться маркеры барьерной функции кишечника.

Кровь будет собираться на исходном уровне и через 8, 16 и 24 недели для исследования общих ферментов печени, показателей гликемического контроля, липидов, а также общих и более специфичных для НАСГ параметров воспаления.

Многопараметрическая МРТ печени (МРТ-PDFF, МР-эластография, скорректированный Т1), а также висцерального и подкожного жира будет выполнена в начале исследования и через 24 недели для оценки объема депо висцеральной и подкожной жировой ткани, содержания жира в печени, а также фиброза печени и воспаление.

Непрерывные измерения уровня глюкозы будут выполняться дома с помощью портативных устройств в течение последовательного периода в 1 неделю (7 дней) за неделю до исходного уровня, недели 1, 9, 17 и 25.

Веганские доноры

Образцы фекалий доноров будут собраны, лиофилизированы («лиофилизированы») и инкапсулированы (см. параграф 6.8). После этого капсулы LFMT будут храниться при температуре -80°C. Доноры будут тщательно проверяться на инфекционные заболевания.

Первичный результат

Чтобы продемонстрировать, что A. soehngenii в сочетании с пастеризованными A. muciniphila и B. animalis subsp. lactis, FOS и кондиционированные веганские капсулы LFMT снижают НАСГ, что определяется улучшением гистологии печени у лиц с НАСГ и фиброзом стадии 0–3, при этом улучшение определяется как уменьшение стеатогепатита на ≥1 балл SAF-A и отсутствие ухудшения фиброза печени, или улучшение ≥ 1 стадии фиброза печени и отсутствие ухудшения стеатогепатита.

Вторичные результаты

Чтобы продемонстрировать, что комбинированное лечение улучшает:

• неинвазивные исходы НАЖБП, т.е. многопараметрическая МРТ печени и окружающей подкожной жировой ткани (MRI-PDFF, MR эластография, скорректированный T1), FibroScan Elastography and Controlled Attenuation Parameters и панель плазмы Панель Enhanced Liver Fibrosis (ELF), pro-C3 .
• изменение маркеров крови от исходного уровня до конца лечения, а именно: ферментов печени (т.е. аланинаминотрансфераза (АЛТ), аспартатаминотрансфераза (АСТ), гамма-глутамилтрансфераза (ГГТ), щелочная фосфатаза (ЩФ)), воспалительные маркеры крови (т.е. лейкоциты, моноциты, СРБ, ИЛ-1(β), ИЛ-6, ИЛ-11, ИЛ-17, ИЛ-32, TNF-α, IFN-γ, другие маркеры воспаления), SCFA (т.е. пропионат, бутират, ацетат), лактат, этанол, липиды плазмы (т.е. ЛПНП, ЛПВП, триглицериды, общий холестерин), альбумин, креатинин, гемоглобин, FGF-21, адипонектин, лептин, липополисахариды, эстроген, витамин B12, фолиевая кислота, зонулин и другие метаболические и липодомические результаты.
• показатели микробиома (состав, приживление, отслеживание деформации) и метаболитов, фекальный состав SCFA и фекальный альбумин.
• гликемический контроль, инсулинорезистентность, масса тела/ИМТ, окружность талии и процент жира в организме
• Критерии MetSy / %
• Производство SCFAs и высвобождение GLP1
• профиль экспрессии генов печени: липогенный, воспалительный и фиброгенный пути.
• патология печени, гистопатологические признаки, иммунофлуоресценция и оценка патофизиологических белков.
• Гистология НАЖБП, оцененная с помощью алгоритма глубокого обучения, оценивающего цельные изображения слайдов биоптатов печени.
• Непрерывный мониторинг глюкозы (4x 7 дней подряд)
• качество жизни (общее (SF36) и специфическое для НАЖБП/НАСГ (CDLQ-NAFLD)).