Transplante de simbióticos e microbiota fecal para tratar a esteato-hepatite não alcoólica (SYNCH)

Objetivo principal Investigar o potencial terapêutico de A. soehngenii e A. muciniphila pasteurizada combinada com B. animalis subsp. lactis e fruto-oligossacarídeos com e sem cápsulas de transplante de microbiota fecal liofilizada vegana condicionada (LFMT) para reduzir NASH em pacientes com NASH e NASH-fibrose.

Objetivo secundário Investigar os mecanismos de A. soehngenii e A. muciniphila pasteurizada combinada com B. animalis subsp. lactis e FOS com e sem cápsulas LFMT veganas condicionadas na redução da NASH em pacientes com NASH e NASH-fibrose.

Design de estudo:

Estudo de intervenção randomizado duplo-cego controlado por placebo.

População do estudo:

Pacientes entre 18 e 75 anos de idade com NASH comprovado por biópsia obtidos até 32 semanas antes da triagem com base na leitura em conjunto de dois patologistas especializados em fígado: pontuação SAF Esteatose ≥1, Atividade ≥2, Fibrose <4; 50% dos participantes devem ter pelo menos estágio de fibrose NASH 1, 2 ou 3 de acordo com o sistema de estadiamento de fibrose NASH CRN.

Os critérios de exclusão são: Atual ou história de consumo significativo de álcool por um período de mais de 3 meses consecutivos dentro de 1 ano antes da triagem (consumo significativo de álcool é definido como mais de 2 unidades/dia para mulheres e mais de 3 unidades internacionais/dia para homens , em média; 1 unidade internacional contém ±14 gramas de álcool), cirrose hepática ou carcinoma hepatocelular, hepatite B e/ou C, hepatite autoimune, doença de Wilson, colangite esclerosante primária, colangite biliar primária, deficiência de alfa-1-antitripsina e hemocromatose, história de transplante de fígado, colocação atual em lista de transplante de fígado, uso de pré, pró ou simbióticos, uso de antibióticos sistêmicos 3 meses antes da randomização, uso de tamoxifeno, metotrexato ou amiodarona, cirurgia bariátrica prévia ou planejada, diabetes mellitus com tratamento ativo com agonista do receptor GLP-1, distúrbio hemorrágico, razão normalizada internacional (INR) do tempo de protrombina >1,4 ou contagem de plaquetas <50 109/L na triagem, uso de terapia antiplaquetária/coagulante que não pode ser temporariamente descontinuado, qualquer evento cardiovascular maior dentro de 6 meses antes da triagem (por exemplo, enfarte do miocárdio, acidente vascular cerebral), imunidade comprometida prolongada (p. quimioterapia citotóxica recente, infecção por HIV com contagem de CD4 < 240), história ativa ou prévia de malignidade invasiva (exceto para carcinomas in situ tratados curativamente [por exemplo, colo do útero] ou câncer de pele não melanoma), a menos que uma remissão completa tenha sido alcançada, cirurgia programado para o período de duração do estudo, exceto pequenos procedimentos cirúrgicos na opinião do investigador, mulheres grávidas ou lactantes, qualquer condição que, na opinião do investigador, possa comprometer a segurança dos participantes ou o cumprimento do protocolo e a participação em outra clínica concomitante julgamento.

Um total de 48 pacientes receberá tratamento simbiótico com A. soehngenii, pasteurizado A. muciniphila, B. animalis subsp. lactis e fruto-oligossacarídeos, e serão randomizados 1:1 para tratamento com FMT ou placebo, estratificados para uso de inibidor de bomba de prótons, uso de metformina e escore histopatológico de fibrose.

Intervenção:

Participantes receptores Do dia -3 antes do primeiro FMT até a conclusão do estudo, todos os participantes receptores receberão uma dose oral diária única de 5 g de FOS. Posteriormente, os participantes serão randomizados para cápsulas FMT de doadores magros (doadores condicionados com WholeFiber) ou placebo (design cego)1.

No início (dia 0) e na semana 8 (dia 56) e na semana 16 (dia 112), os participantes ingerirão 21 cápsulas de LFMT ou placebo. As visitas do estudo terão 8 semanas de intervalo, embora seja implementada uma margem de -3 dias a +3 dias para levar em consideração o cronograma e a disponibilidade dos participantes. Além disso, os participantes tomarão diariamente 2 cápsulas de LFMT ou placebo durante todo o período do estudo (24 semanas).

Os pesquisadores observaram anteriormente que a composição da microbiota intestinal no receptor é afetada até 8-12 semanas após o doador FMT1, portanto, essa janela de tempo garante uma composição estável da microbiota intestinal do doador durante o estudo.

Durante o período de intervenção de 24 semanas, todos os participantes tomarão doses diárias de 109 células A. soehngenii CH-106 (dosagem baseada em estudos anteriores, incluindo estudo toxicológico)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (uma cepa bem estudada comercializada como um probiótico pela Sacco SRL) e 3x1010 células pasteurizadas de A. muciniphila ATCC BAA-835T (dosagem baseada na aprovação da EFSA e obtida da A-Mansia Biotech).

Biópsias hepáticas percutâneas serão realizadas como parte da triagem quando os participantes forem teoricamente elegíveis para participação, a menos que uma biópsia hepática tenha sido realizada nas 36 semanas anteriores. Uma leitura conjunta por dois patologistas hepáticos cegos para qualquer outro resultado determinará se os pacientes serão incluídos no estudo. Às 24 semanas, outra biópsia hepática será realizada para examinar o efeito do FMT, que também será revisado por dois patologistas hepáticos (novamente cegos para qualquer outro resultado). A classificação NASH-CRN será avaliada em lâminas H&E, para esteatose, inflamação e balonização, e com lâmina de Sirius red para avaliação de fibrose. O RNA para sequenciamento de RNA será isolado.

A expressão gênica diferencial será avaliada ao longo do tempo (basal e 24 semanas) e pela alocação do tratamento (doador vegano FMT versus placebo).

As fezes serão coletadas no início e após as semanas 2, 8, 10, 16, 18 e 24, a fim de investigar as alterações no microbioma intestinal. Além disso, serão avaliados marcadores da função de barreira intestinal.

O sangue será coletado no início e em 8, 16 e 24 semanas para investigar enzimas hepáticas comuns, indicadores de controle glicêmico, lipídios e parâmetros de inflamação geral e mais específicos da NASH.

Uma ressonância magnética multiparamétrica do fígado (MRI-PDFF, elastografia por RM, T1 corrigida) e da gordura visceral e subcutânea será realizada no início e após 24 semanas para estimar o volume do depósito de tecido adiposo visceral e subcutâneo, o conteúdo de gordura hepática, bem como a fibrose hepática e inflamação.

As medições contínuas de glicose serão realizadas em casa usando dispositivos portáteis, durante um período consecutivo de 1 semana (7 dias) na semana anterior à linha de base, semana 1, 9, 17 e 25.

Doadores veganos

As amostras de doadores fecais serão coletadas, liofilizadas ('liofilizadas') e encapsuladas (ver parágrafo 6.8). Posteriormente, as cápsulas LFMT serão armazenadas a -80°C. Os doadores serão extensivamente testados para doenças infecciosas.

Resultado primário

Demonstrar que A. soehngenii combinado com A. muciniphila e B. animalis subsp. lactis, FOS e cápsulas LFMT veganas condicionadas reduzem a NASH conforme definido por uma melhora da histologia hepática em indivíduos com NASH e estágio de fibrose 0-3, com melhora definida como redução da esteato-hepatite em ≥1 ponto SAF-A e sem piora da fibrose hepática, ou melhora em ≥ 1 estágio de fibrose hepática e sem piora da esteato-hepatite.

Resultados secundários

Para demonstrar que o tratamento combinado melhora:

• resultados não invasivos de DHGNA, ou seja, ressonância magnética multiparamétrica do fígado e tecido adiposo subcutâneo circundante (MRI-PDFF, elastografia por RM, T1 corrigido), FibroScan Elastografia e Parâmetros de atenuação controlada e painel de plasma Painel de fibrose hepática aprimorada (ELF), pro-C3 .
• alteração nos marcadores sanguíneos desde o início até ao final do tratamento, nomeadamente: enzimas hepáticas (i.e. alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), gama glutamiltransferase (GGT), fosfatase alcalina (ALP)), marcadores sanguíneos inflamatórios (i.e. leucócitos, monócitos, PCR, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-α, IFN-γ, outros marcadores inflamatórios), SCFA (i.e. propionato, butirato, acetato), lactato, etanol, lipídios plasmáticos (i.e. LDL, HDL, triglicerídeos, colesterol total), albumina, creatinina, hemoglobina, FGF-21, adiponectina, leptina, lipopolissacarídeos, estrogênio, vitamina B12, ácido folato, zonulina e outros resultados metabolômicos e lipodômicos.
• leituras de microbioma (composição, enxerto, rastreamento de tensão) e metabólitos, composição fecal de SCFA e albumina fecal.
• controle glicêmico, resistência à insulina, peso corporal/IMC, circunferência da cintura e percentual de gordura corporal
• Critérios MetSy / %
• Produção de SCFA e lançamento de GLP1
• perfil de expressão gênica hepática: vias lipogênica, inflamatória e fibrogênica.
• patologia hepática, características histopatológicas, imunofluorescência e avaliação de proteínas fisiopatológicas.
• Histologia NAFLD avaliada com um algoritmo de aprendizado profundo pontuando imagens de lâminas inteiras de biópsias hepáticas.
• Monitorização contínua da glicose (4x 7 dias consecutivos)
• qualidade de vida (geral (SF36) e NAFLD/NASH-específico (CDLQ-NAFLD)).