Synbiotika und fäkale Mikrobiota-Transplantation zur Behandlung von alkoholfreier Steatohepatitis (SYNCH)

Hauptziel Untersuchung des therapeutischen Potenzials von A. soehngenii und pasteurisierter A. muciniphila in Kombination mit B. animalis subsp. Lactis und Fructo-Oligosaccharide mit und ohne konditionierte vegane lyophilisierte fäkale Mikrobiota-Transplantationskapseln (LFMT) zur Reduzierung von NASH bei Patienten mit NASH und NASH-Fibrose.

Sekundäres Ziel Untersuchung der Mechanismen von A. soehngenii und pasteurisierter A. muciniphila in Kombination mit B. animalis subsp. lactis und FOS mit und ohne konditionierte vegane LFMT-Kapseln zur Reduktion von NASH bei Patienten mit NASH und NASH-Fibrose.

Studiendesign:

Doppelblinde, randomisierte, Placebo-kontrollierte Interventionsstudie.

Studienpopulation:

Patienten im Alter zwischen 18 und 75 Jahren mit durch Biopsie nachgewiesenem NASH, erhalten bis zu 32 Wochen vor dem Screening, basierend auf Tandem-Reading von zwei erfahrenen Leberpathologen: SAF-Steatose-Score ≥ 1, Aktivität ≥ 2, Fibrose < 4; 50 % der Teilnehmer sollten mindestens das NASH-Fibrose-Stadium 1, 2 oder 3 gemäß dem NASH-CRN-Fibrose-Staging-System aufweisen.

Ausschlusskriterien sind: Aktueller oder früherer signifikanter Alkoholkonsum über einen Zeitraum von mehr als 3 aufeinanderfolgenden Monaten innerhalb von 1 Jahr vor dem Screening (signifikanter Alkoholkonsum ist definiert als mehr als 2 Einheiten/Tag für Frauen und mehr als 3 Internationale Einheiten/Tag für Männer , im Durchschnitt; 1 internationale Einheit enthält ±14 Gramm Alkohol), Leberzirrhose oder hepatozelluläres Karzinom, Hepatitis B und/oder C, Autoimmunhepatitis, Morbus Wilson, primär sklerosierende Cholangitis, primär biliäre Cholangitis, Alpha-1-Antitripsin-Mangel und Hämochromatose, Lebertransplantation in der Vorgeschichte, aktuelle Platzierung auf einer Lebertransplantationsliste, Verwendung von Prä-, Pro- oder Synbiotika, Verwendung von systemischen Antibiotika 3 Monate vor der Randomisierung, Verwendung von Tamoxifen, Methotrexat oder Amiodaron, vorherige oder geplante bariatrische Operation, Diabetes mellitus mit Behandlung mit aktivem GLP-1-Rezeptoragonisten, Blutgerinnungsstörung, international normalisierte Ratio (INR) der Prothrombinzeit > 1,4 oder Thrombozytenzahl < 50 109/l beim Screening, Anwendung von Thrombozytenaggregationshemmern/Gerinnungsmitteln, die nicht vorübergehend abgesetzt werden kann, irgendwelche größeres kardiovaskuläres Ereignis innerhalb von 6 Monaten vor dem Screening (z. Myokardinfarkt, zerebrovaskulärer Insult), verlängerte geschwächte Immunität (z. kürzlich durchgeführte zytotoxische Chemotherapie, HIV-Infektion mit einer CD4-Zahl < 240), aktive oder frühere invasive Malignität (außer bei kurativ behandelten in situ-Karzinomen [z die während der Studiendauer vorgesehen sind, mit Ausnahme kleinerer chirurgischer Eingriffe nach Ansicht des Prüfarztes, schwangerer oder stillender Frauen, aller Umstände, die nach Ansicht des Prüfarztes die Sicherheit der Teilnehmer oder die Einhaltung des Protokolls gefährden könnten, und die Teilnahme an einer anderen begleitenden klinischen Studie Gerichtsverhandlung.

Insgesamt 48 Patienten erhalten eine synbiotische Behandlung mit A. soehngenii, pasteurisierter A. muciniphila, B. animalis subsp. Lactis und Fructo-Oligosaccharide und werden 1:1 für die Behandlung mit FMT oder Placebo randomisiert, stratifiziert nach Anwendung von Protonenpumpenhemmern, Anwendung von Metformin und histopathologischem Fibrose-Score.

Intervention:

Empfängerteilnehmer Ab Tag -3 vor dem ersten FMT bis zum Abschluss der Studie erhalten alle Empfängerteilnehmer täglich eine orale Einzeldosis von 5 g FOS. Anschließend werden die Teilnehmer auf magere Spender-FMT-Kapseln (mit WholeFiber konditionierte Spender) oder Placebo (blindes Design)1 randomisiert.

Zu Beginn (Tag 0) und in Woche 8 (Tag 56) und Woche 16 (Tag 112) nehmen die Teilnehmer 21 LFMT- oder Placebo-Kapseln ein. Die Studienbesuche liegen im Abstand von 8 Wochen, obwohl ein Spielraum von -3 Tagen bis +3 Tagen eingeführt wird, um den Zeitplan und die Verfügbarkeit der Teilnehmer zu berücksichtigen. Darüber hinaus nehmen die Teilnehmer während des gesamten Studienzeitraums (24 Wochen) täglich 2 Kapseln LFMT oder Placebo ein.

Die Forscher haben zuvor beobachtet, dass die Zusammensetzung der Darmmikrobiota im Empfänger bis zu 8-12 Wochen nach Spender-FMT1 beeinflusst wird, sodass dieses Zeitfenster eine stabile Zusammensetzung der Darmmikrobiota des Spenders während der Studie gewährleistet.

Während des 24-wöchigen Interventionszeitraums nehmen alle Teilnehmer tägliche Dosen von 109 A. soehngenii CH-106-Zellen (Dosierung basierend auf früheren Studien, einschließlich Toxikologiestudie)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (ein gut untersuchter Stamm, der von Sacco SRL als Probiotikum vermarktet wird) und 3 x 1010 pasteurisierte A. muciniphila ATCC BAA-835T-Zellen (Dosierung basiert auf EFSA-Zulassung und erhalten von A-Mansia Biotech).

Perkutane Leberbiopsien werden als Teil des Screenings durchgeführt, wenn die Teilnehmer theoretisch zur Teilnahme berechtigt sind, es sei denn, in den letzten 36 Wochen wurde eine Leberbiopsie durchgeführt. Ein Tandem-Read durch zwei Leberpathologen, die für andere Ergebnisse verblindet sind, wird entscheiden, ob Patienten in die Studie aufgenommen werden. Nach 24 Wochen wird eine weitere Leberbiopsie durchgeführt, um die Wirkung des FMT zu untersuchen, die auch von zwei Leberpathologen überprüft wird (wiederum blind für alle anderen Ergebnisse). Die NASH-CRN-Klassifikation wird auf H&E-Objektträgern für Steatose, Entzündung und Ballonbildung und mit einem rot gefärbten Sirius-Objektträger zur Beurteilung von Fibrose bewertet. RNA für die RNA-Sequenzierung wird isoliert.

Die unterschiedliche Genexpression wird im Laufe der Zeit (Basislinie und 24 Wochen) und nach Behandlungszuteilung (veganer Spender FMT versus Placebo) bewertet.

Der Kot wird zu Studienbeginn und nach Woche 2, 8, 10, 16, 18 und 24 gesammelt, um die Veränderungen im Darmmikrobiom zu untersuchen. Außerdem werden Marker der Darmbarrierefunktion bewertet.

Blut wird zu Studienbeginn sowie nach 8, 16 und 24 Wochen entnommen, um allgemeine Leberenzyme, Indikatoren der glykämischen Kontrolle, Lipide sowie allgemeine und eher NASH-spezifische Entzündungsparameter zu untersuchen.

Eine multiparametrische MRT der Leber (MRT-PDFF, MR-Elastographie, korrigiertes T1) und des viszeralen und subkutanen Fetts wird zu Studienbeginn und nach 24 Wochen durchgeführt, um das Depotvolumen des viszeralen und subkutanen Fettgewebes, den Leberfettgehalt sowie die Leberfibrose abzuschätzen und Entzündung.

Kontinuierliche Glukosemessungen werden zu Hause mit tragbaren Geräten während eines aufeinanderfolgenden Zeitraums von 1 Woche (7 Tagen) in der Woche vor dem Ausgangswert, Woche 1, 9, 17 und 25 durchgeführt.

Vegane Spender

Die fäkalen Spenderproben werden gesammelt, lyophilisiert („gefriergetrocknet“) und eingekapselt (siehe Abschnitt 6.8). Danach werden die LFMT-Kapseln bei -80°C gelagert. Spender werden umfassend auf Infektionskrankheiten untersucht.

Primäres Ergebnis

Um zu zeigen, dass A. soehngenii in Kombination mit pasteurisiertem A. muciniphila und B. animalis subsp. lactis, FOS und konditionierte vegane LFMT-Kapseln reduzieren NASH, definiert durch eine Verbesserung der Leberhistologie bei Personen mit NASH und Fibrose im Stadium 0-3, wobei die Verbesserung als Reduktion der Steatohepatitis um ≥1 SAF-A-Punkt und keine Verschlechterung der Leberfibrose definiert ist, oder Besserung der Leberfibrose im Stadium ≥ 1 und keine Verschlechterung der Steatohepatitis.

Sekundäre Ergebnisse

Um zu zeigen, dass sich die kombinierte Behandlung verbessert:

• nicht-invasive Ergebnisse von NAFLD, d. h. multiparametrische MRT der Leber und des umgebenden subkutanen Fettgewebes (MRT-PDFF, MR-Elastographie, korrigiertes T1), FibroScan-Elastographie und kontrollierte Dämpfungsparameter und Plasmapanel Enhanced Liver Fibrosis (ELF) Panel, pro-C3 .
• Veränderung der Blutmarker vom Ausgangswert bis zum Ende der Behandlung, nämlich: Leberenzyme (d. h. Alanin-Aminotransferase (ALT), Aspartat-Aminotransferase (AST), Gamma-Glutamyl-Transferase (GGT), alkalische Phosphatase (ALP)), entzündliche Blutmarker (d. h. Leukozyten, Monozyten, CRP, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-α, IFN-γ, andere Entzündungsmarker), SCFA (d.h. Propionat, Butyrat, Acetat), Laktat, Ethanol, Plasmalipide (d.h. LDL, HDL, Triglyceride, Gesamtcholesterin), Albumin, Kreatinin, Hämoglobin, FGF-21, Adiponectin, Leptin, Lipopolysaccharide, Östrogen, Vitamin B12, Folsäure, Zonulin und andere metabolomische und lipodomische Ergebnisse.
• Auslesen des Mikrobioms (Zusammensetzung, Transplantation, Stammverfolgung) und Metaboliten, fäkale SCFA-Zusammensetzung und fäkales Albumin.
• glykämische Kontrolle, Insulinresistenz, Körpergewicht/BMI, Taillenumfang und Körperfettanteil
• MetSy-Kriterien / %
• SCFA-Produktion und GLP1-Freigabe
• Genexpressionsprofil der Leber: Lipogene, entzündliche und fibrogene Wege.
• Leberpathologie, histopathologische Merkmale, Immunfluoreszenz und Beurteilung pathophysiologischer Proteine.
• NAFLD-Histologie, bewertet mit einem tief erlernten Algorithmus, der ganze Objektträgerbilder von Leberbiopsien bewertet.
• Kontinuierliche Glukosemessung (4x 7 aufeinanderfolgende Tage)
• Lebensqualität (allgemein (SF36) und NAFLD/NASH-spezifisch (CDLQ-NAFLD)).