Synbiotika och fekal mikrobiotatransplantation för att behandla icke-alkoholisk Steatohepatit (SYNCH)

Huvudmål Att undersöka den terapeutiska potentialen hos A. soehngenii och pastöriserad A. muciniphila i kombination med B. animalis subsp. laktis och frukto-oligosackarider med och utan konditionerade veganska lyofiliserade fekal mikrobiota transplantation (LFMT) kapslar för att minska NASH hos patienter med NASH och NASH-fibros.

Sekundärt mål Att undersöka mekanismerna för A. soehngenii och pastöriserad A. muciniphila i kombination med B. animalis subsp. lactis och FOS med och utan konditionerade veganska LFMT-kapslar för att minska NASH hos patienter med NASH och NASH-fibros.

Studera design:

Dubbelblind randomiserad placebokontrollerad interventionsstudie.

Studera befolkning:

Patienter mellan 18-75 år med biopsibeprövad NASH erhölls upp till 32 veckor före screening baserat på tandemläsning av två expertleverpatologer: SAF Steatos-poäng ≥1, Aktivitet ≥2, Fibros <4; 50% av deltagarna bör ha minst NASH fibros steg 1, 2 eller 3 enligt NASH CRN fibros stadiesystem.

Uteslutningskriterier är: Aktuell eller historia av betydande alkoholkonsumtion under en period av mer än 3 månader i följd inom 1 år före screening (signifikant alkoholkonsumtion definieras som mer än 2 enheter/dag för kvinnor och mer än 3 internationella enheter/dag för män , i genomsnitt; 1 internationell enhet innehåller ±14 gram alkohol), levercirros eller hepatocellulärt karcinom, hepatit B och/eller C, autoimmun hepatit, Wilsons sjukdom, primär skleroserande kolangit, primär biliär kolangit, alfa-1-antitripsinbrist och hemokromatos, levertransplantationshistoria, aktuell placering på en levertransplantationslista, användning av pre-, pro- eller synbiotika, användning av systemiska antibiotika 3 månader före randomisering, användning av tamoxifen, metotrexat eller amiodaron, tidigare eller planerad bariatrisk operation, diabetes mellitus med aktiv GLP-1-receptoragonistbehandling, blödningsrubbning, International normalized ratio (INR) av protrombintid >1,4 eller trombocytantal <50 109/L vid screening, användning av antitrombocyt/koagulantterapi som inte kan avbrytas tillfälligt, ev. större kardiovaskulär händelse inom 6 månader före screening (t.ex. hjärtinfarkt, cerebrovaskulär olycka), förlängd nedsatt immunitet (t.ex. nyligen genomförd cytotoxisk kemoterapi, HIV-infektion med CD4-tal < 240), aktiv eller tidigare invasiv malignitet (förutom kurativt behandlade in situ-karcinom [t.ex. livmoderhalscancer] eller icke-melanom hudcancer) om inte en fullständig remission uppnåddes, operation schemalagd för försöksperioden, med undantag för mindre kirurgiska ingrepp enligt utredarens åsikt, gravida eller ammande kvinnor, alla tillstånd som enligt utredarens åsikt kan äventyra deltagarnas säkerhet eller överensstämmelse med protokollet, och deltagande i en annan samtidig klinisk rättegång.

Totalt 48 patienter kommer att få synbiotisk behandling med A. soehngenii, pastöriserad A. muciniphila, B. animalis subsp. laktis och frukto-oligosackarider, och kommer att randomiseras 1:1 till behandling med FMT eller placebo, stratifierad för användning av protonpumpshämmare, metforminanvändning och histopatologisk fibros-poäng.

Intervention:

Mottagardeltagare Från dag -3 före den första FMT tills studien avslutats kommer alla mottagardeltagare att få en oral daglig singeldos på 5 g FOS. Därefter kommer deltagarna att randomiseras till magra donator-FMT-kapslar (donatorer konditionerade med WholeFiber) eller placebo (blindad design)1.

Vid baslinjen (dag 0) och vecka 8 (dag 56) och vecka 16 (dag 112) kommer deltagarna att inta 21 LFMT- eller placebokapslar. Studiebesöken kommer att vara 8 veckors mellanrum, även om en marginal på -3 dagar till +3 dagar implementeras för att ta hänsyn till deltagarnas schema och tillgänglighet. Dessutom kommer deltagarna dagligen att ta 2 kapslar LFMT eller placebo under hela studieperioden (24 veckor).

Utredarna har tidigare observerat att tarmmikrobiotasammansättningen hos mottagaren påverkas upp till 8-12 veckor efter donator FMT1, så detta tidsfönster säkerställer en stabil donatortarmmikrobiotasammansättning under studien.

Under den 24 veckor långa interventionsperioden kommer alla deltagare att ta dagliga doser av 109 A. soehngenii CH-106-celler (dosering baserad på tidigare studier inklusive toxikologisk studie)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (en väl studerad stam som marknadsförs som probiotika av Sacco SRL) och 3x1010 pastöriserade A. muciniphila ATCC BAA-835T-celler (dosering baserad på EFSA-godkännande och erhållen från A-Mansia Biotech).

Perkutan leverbiopsi kommer att utföras som en del av screeningen när deltagare teoretiskt sett är berättigade att delta, såvida inte en leverbiopsi har utförts under de senaste 36 veckorna. En tandemläsning av två leverpatologer som är blinda för något annat resultat kommer att avgöra om patienter kommer att inkluderas i studien. Vid 24 veckor kommer ytterligare en leverbiopsi att utföras för att undersöka effekten av FMT, som också kommer att granskas av två leverpatologer (återigen förblindad för alla andra resultat). NASH-CRN-klassificeringen kommer att bedömas på H&E-objektglas, för steatos, inflammation och ballongbildning, och med ett Sirius rödfärgat objektglas för utvärdering av fibros. RNA för RNA-sekvensering kommer att isoleras.

Differentiellt genuttryck kommer att bedömas över tid (baslinje och 24 veckor) och genom behandlingsallokering (vegansk donator FMT kontra placebo).

Avföring kommer att samlas in vid baslinjen och efter vecka 2, 8, 10, 16, 18 och 24, för att undersöka förändringarna i tarmmikrobiomet. Markörer för tarmbarriärens funktion kommer också att bedömas.

Blod kommer att samlas in vid baslinjen och vid 8, 16 och 24 veckor för att undersöka vanliga leverenzymer, indikatorer på glykemisk kontroll, lipider och allmänna och mer NASH-specifika inflammationsparametrar.

En multiparametrisk MRT av lever (MRI-PDFF, MR-elastografi, korrigerad T1) och av visceralt och subkutant fett kommer att utföras vid baslinjen och efter 24 veckor för att uppskatta visceral och subkutan fettvävnadsdepåvolym, leverfetthalt samt leverfibros och inflammation.

Kontinuerliga glukosmätningar kommer att utföras hemma med hjälp av bärbara enheter, under en sammanhängande period av 1 vecka (7 dagar) i veckan före baslinjen, vecka 1, 9, 17 och 25.

Veganska donatorer

De fekala donatorproverna kommer att samlas in, lyofiliseras ('frystorkade') och inkapslas (se avsnitt 6.8). Därefter kommer LFMT-kapslarna att förvaras vid -80°C. Donatorer kommer att undersökas omfattande för infektionssjukdomar.

Primärt resultat

För att visa att A. soehngenii kombinerat med pastöriserad A. muciniphila och B. animalis subsp. lactis, FOS och konditionerade veganska LFMT-kapslar minskar NASH som definieras av en förbättring av leverhistologi hos individer med NASH och fibros stadium 0-3, med förbättring definierad som minskning av steatohepatit med ≥1 SAF-A-punkt och ingen försämring av leverfibros, eller förbättring av leverfibros i ≥ 1 stadium och ingen försämring av steatohepatit.

Sekundära resultat

För att visa att den kombinerade behandlingen förbättras:

• icke-invasiva utfall av NAFLD, dvs multiparametrisk MRT av lever och omgivande subkutan fettvävnad (MRI-PDFF, MR-elastografi, korrigerad T1), FibroScan Elastography och kontrollerade dämpningsparametrar och plasmapanelen Enhanced Liver Fibrosis (ELF) panel, pro-C3 .
• förändring i blodmarkörer från baslinjen till slutet av behandlingen, nämligen: leverenzymer (dvs. alaninaminotransferas (ALT), aspartataminotransferas (AST), gammaglutamyltransferas (GGT), alkaliskt fosfatas (ALP)), inflammatoriska blodmarkörer (dvs. leukocyter, monocyter, CRP, Il-1(p), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-a, IFN-y, andra inflammatoriska markörer), SCFA (dvs. propionat, butyrat, acetat), laktat, etanol, plasmalipider (dvs. LDL, HDL, triglycerider, totalt kolesterol), albumin, kreatinin, hemoglobin, FGF-21, adiponektin, leptin, lipopolysackarider, östrogen, vitamin B12, folatsyra, zonulin och andra metabolomiska och lipodomiska resultat.
• mikrobiomavläsningar (sammansättning, engraftment, stamspårning) och metaboliter, fekal SCFA-sammansättning och fekalt albumin.
• glykemisk kontroll, insulinresistens, kroppsvikt/BMI, midjemått och procent kroppsfett
• MetSy-kriterier / %
• SCFA produktion och GLP1 release
• levergenexpressionsprofil: lipogena, inflammatoriska och fibrogena vägar.
• leverpatologi, histopatologiska egenskaper, immunfluorescens och bedömning av patofysiologiska proteiner.
• NAFLD-histologi bedömd med en djupt lärd algoritm som poängsätter hela diabilder av leverbiopsier.
• Kontinuerlig glukosövervakning (4x 7 dagar i följd)
• livskvalitet (allmänt (SF36) och NAFLD/NASH-specifik (CDLQ-NAFLD)).