Trasplante de simbióticos y microbiota fecal para el tratamiento de la esteatohepatitis no alcohólica (SYNCH)

Objetivo principal Investigar el potencial terapéutico de A. soehngenii y A. muciniphila pasteurizada combinada con B. animalis subsp. lactis y fructooligosacáridos con y sin cápsulas de trasplante de microbiota fecal liofilizada vegana condicionada (LFMT) para reducir la NASH en pacientes con NASH y NASH-fibrosis.

Objetivo secundario Investigar los mecanismos de A. soehngenii y A. muciniphila pasteurizada combinada con B. animalis subsp. lactis y FOS con y sin cápsulas veganas de LFMT condicionadas para reducir la NASH en pacientes con NASH y NASH-fibrosis.

Diseño del estudio:

Estudio de intervención controlado con placebo, aleatorizado, doble ciego.

Población de estudio:

Pacientes de 18 a 75 años de edad con EHNA comprobada por biopsia obtenida hasta 32 semanas antes de la selección según la lectura en tándem de dos patólogos expertos en hígado: puntuación de esteatosis SAF ≥1, actividad ≥2, fibrosis <4; El 50 % de los participantes debe tener al menos NASH fibrosis en estadio 1, 2 o 3 según el sistema de estadificación de fibrosis NASH CRN.

Los criterios de exclusión son: Actual o historial de consumo significativo de alcohol durante un período de más de 3 meses consecutivos dentro de 1 año antes de la selección (el consumo significativo de alcohol se define como más de 2 unidades/día para mujeres y más de 3 unidades internacionales/día para hombres) , en promedio, 1 unidad internacional contiene ±14 gramos de alcohol), cirrosis hepática o carcinoma hepatocelular, hepatitis B y/o C, hepatitis autoinmune, enfermedad de Wilson, colangitis esclerosante primaria, colangitis biliar primaria, deficiencia de alfa-1-antitripsina y hemocromatosis, antecedentes de trasplante de hígado, ubicación actual en una lista de trasplante de hígado, uso de pre, pro o simbióticos, uso de antibióticos sistémicos 3 meses antes de la aleatorización, uso de tamoxifeno, metotrexato o amiodarona, cirugía bariátrica previa o planificada, diabetes mellitus con tratamiento agonista activo del receptor de GLP-1, trastorno hemorrágico, índice internacional normalizado (INR) de tiempo de protrombina >1,4 o recuento de plaquetas <50 109/l en la selección, uso de terapia antiplaquetaria/coagulante que no se puede suspender temporalmente, cualquier evento cardiovascular importante en los 6 meses anteriores a la selección (p. infarto de miocardio, accidente cerebrovascular), inmunidad comprometida prolongada (p. quimioterapia citotóxica reciente, infección por VIH con un recuento de CD4 < 240), antecedentes activos o previos de malignidad invasiva (excepto carcinomas in situ tratados curativamente [p. ej., cuello uterino] o cáncer de piel no melanoma) a menos que se logre una remisión completa, cirugía programadas para el período de duración del ensayo, excepto procedimientos quirúrgicos menores a juicio del investigador, mujeres embarazadas o lactantes, cualquier condición que, a juicio del investigador, pueda poner en peligro la seguridad de los participantes o el cumplimiento del protocolo, y la participación en otro tratamiento clínico concomitante. ensayo.

Un total de 48 pacientes recibirán tratamiento simbiótico con A. soehngenii, A. muciniphila pasteurizada, B. animalis subsp. lactis y fructooligosacáridos, y serán aleatorizados 1:1 al tratamiento con FMT o placebo, estratificados por uso de inhibidores de la bomba de protones, uso de metformina y puntuación de fibrosis histopatológica.

Intervención:

Participantes receptores Desde el día -3 antes del primer FMT hasta la finalización del estudio, todos los participantes receptores recibirán una dosis única oral diaria de 5 g de FOS. Posteriormente, los participantes serán asignados aleatoriamente a cápsulas de FMT de donantes magros (donantes acondicionados con WholeFiber) o placebo (diseño ciego)1.

Al inicio del estudio (día 0) y en la semana 8 (día 56) y la semana 16 (día 112), los participantes ingerirán 21 cápsulas de LFMT o placebo. Las visitas de estudio tendrán una diferencia de 8 semanas, aunque se implementa un margen de -3 días a +3 días para tener en cuenta el horario y la disponibilidad de los participantes. Además, los participantes tomarán diariamente 2 cápsulas de LFMT o placebo durante todo el período de estudio (24 semanas).

Los investigadores observaron previamente que la composición de la microbiota intestinal en el receptor se ve afectada hasta 8-12 semanas después del FMT1 del donante, por lo que esta ventana de tiempo garantiza una composición estable de la microbiota intestinal del donante durante el estudio.

Durante el período de intervención de 24 semanas, todos los participantes tomarán dosis diarias de 109 células CH-106 de A. soehngenii (dosis basada en estudios previos, incluido el estudio de toxicología)2,3, 1010 de B. animalis subsp. lactis BLC1 (una cepa bien estudiada comercializada como probiótico por Sacco SRL) y 3x1010 células A. muciniphila ATCC BAA-835T pasteurizadas (dosificación basada en la aprobación de la EFSA y obtenida de A-Mansia Biotech).

Las biopsias hepáticas percutáneas se realizarán como parte de la evaluación cuando los participantes sean teóricamente elegibles para participar, a menos que se haya realizado una biopsia hepática en las 36 semanas anteriores. Una lectura en tándem realizada por dos patólogos hepáticos ciegos a cualquier otro resultado determinará si los pacientes se incluirán en el estudio. A las 24 semanas, se realizará otra biopsia hepática para examinar el efecto del FMT, que también será revisada por dos patólogos hepáticos (otra vez cegados a cualquier otro resultado). La clasificación NASH-CRN se evaluará en portaobjetos H&E, para esteatosis, inflamación y balonización, y con un portaobjetos teñido con rojo Sirius para la evaluación de fibrosis. Se aislará el ARN para la secuenciación del ARN.

La expresión génica diferencial se evaluará a lo largo del tiempo (línea de base y 24 semanas) y por asignación de tratamiento (FMT de donante vegano versus placebo).

Las heces se recolectarán al inicio y después de las semanas 2, 8, 10, 16, 18 y 24 para investigar los cambios en el microbioma intestinal. Además, se evaluarán los marcadores de la función de barrera intestinal.

Se recolectará sangre al inicio y a las 8, 16 y 24 semanas para investigar enzimas hepáticas comunes, indicadores de control glucémico, lípidos y parámetros de inflamación generales y más específicos de NASH.

Se realizará una resonancia magnética multiparamétrica del hígado (RM-PDFF, elastografía por RM, T1 corregida) y de la grasa visceral y subcutánea al inicio y después de 24 semanas para estimar el volumen de depósito de tejido adiposo visceral y subcutáneo, el contenido de grasa hepática, así como la fibrosis hepática y inflamación.

Las mediciones continuas de glucosa se realizarán en casa mediante dispositivos portátiles, durante un período consecutivo de 1 semana (7 días) en la semana anterior al inicio, semana 1, 9, 17 y 25.

donantes veganos

Las muestras de donantes fecales serán recolectadas, liofilizadas ("liofilizadas") y encapsuladas (ver párrafo 6.8). Posteriormente, las cápsulas de LFMT se almacenarán a -80 °C. Los donantes serán examinados exhaustivamente para detectar enfermedades infecciosas.

Resultado primario

Demostrar que A. soehngenii combinada con A. muciniphila y B. animalis subsp. lactis, FOS y las cápsulas veganas acondicionadas de LFMT reducen la EHNA definida por una mejora de la histología hepática en personas con EHNA y fibrosis en estadio 0-3, con una mejora definida como la reducción de la esteatohepatitis en ≥1 punto SAF-A y sin empeoramiento de la fibrosis hepática, o mejoría en ≥ 1 etapa de fibrosis hepática y sin empeoramiento de la esteatohepatitis.

Resultados secundarios

Demostrar que el tratamiento combinado mejora:

• resultados no invasivos de NAFLD, es decir, MRI multiparamétrica del hígado y el tejido adiposo subcutáneo circundante (MRI-PDFF, elastografía por RM, T1 corregido), elastografía FibroScan y parámetros de atenuación controlada, y panel de plasma Panel de fibrosis hepática mejorada (ELF), pro-C3 .
• cambio en los marcadores sanguíneos desde el inicio hasta el final del tratamiento, a saber: enzimas hepáticas (es decir, alanina amino transferasa (ALT), aspartato amino transferasa (AST), gamma glutamil transferasa (GGT), fosfatasa alcalina (ALP)), marcadores sanguíneos inflamatorios (es decir, leucocitos, monocitos, CRP, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-α, IFN-γ, otros marcadores inflamatorios), SCFA (es decir, propionato, butirato, acetato), lactato, etanol, lípidos plasmáticos (es decir, LDL, HDL, triglicéridos, colesterol total), albúmina, kreatinina, hemoglobina, FGF-21, adiponectina, leptina, lipopolisacáridos, estrógeno, vitamina B12, ácido fólico, zonulina y otros resultados metabolómicos y lipodómicos.
• lecturas de microbioma (composición, injerto, seguimiento de tensión) y metabolitos, composición de SCFA fecal y albúmina fecal.
• control glucémico, resistencia a la insulina, peso corporal/IMC, circunferencia de la cintura y porcentaje de grasa corporal
• Criterios MetSy / %
• Producción de SCFA y liberación de GLP1
• perfil de expresión de genes hepáticos: vías lipogénicas, inflamatorias y fibrogénicas.
• patología hepática, rasgos histopatológicos, inmunofluorescencia y valoración de proteínas fisiopatológicas.
• Histología de NAFLD evaluada con un algoritmo de aprendizaje profundo que califica imágenes de diapositivas completas de biopsias de hígado.
• Monitorización continua de glucosa (4x 7 días consecutivos)
• calidad de vida (general (SF36) y específica de NAFLD/NASH (CDLQ-NAFLD)).