Simbiotici e trapianto di microbiota fecale per il trattamento della steatoepatite non alcolica (SYNCH)

Obiettivo principale Studiare il potenziale terapeutico di A. soehngenii e A. muciniphila pastorizzato in combinazione con B. animalis subsp. lactis e frutto-oligosaccaridi con e senza capsule di trapianto di microbiota fecale liofilizzato vegano condizionato (LFMT) per ridurre la NASH nei pazienti con NASH e NASH-fibrosi.

Obiettivo secondario Studiare i meccanismi di A. soehngenii e A. muciniphila pastorizzato combinati con B. animalis subsp. lactis e FOS con e senza capsule LFMT vegane condizionate nella riduzione della NASH in pazienti con NASH e NASH-fibrosi.

Disegno dello studio:

Studio di intervento controllato con placebo randomizzato in doppio cieco.

Popolazione studiata:

Pazienti di età compresa tra 18 e 75 anni con NASH comprovata da biopsia ottenuti fino a 32 settimane prima dello screening sulla base della lettura in tandem di due patologi epatici esperti: SAF Steatosis score ≥1, Activity ≥2, Fibrosis <4; Il 50% dei partecipanti dovrebbe avere almeno lo stadio 1, 2 o 3 della fibrosi NASH secondo il sistema di stadiazione della fibrosi NASH CRN.

I criteri di esclusione sono: Attualità o storia di consumo significativo di alcol per un periodo superiore a 3 mesi consecutivi entro 1 anno prima dello screening (il consumo significativo di alcol è definito come superiore a 2 unità/giorno per le donne e più di 3 unità internazionali/giorno per i maschi , in media; 1 unità internazionale contiene ±14 grammi di alcol), cirrosi epatica o carcinoma epatocellulare, epatite B e/o C, epatite autoimmune, morbo di Wilson, colangite sclerosante primitiva, colangite biliare primitiva, deficit di alfa-1-antitripsina ed emocromatosi, anamnesi di trapianto di fegato, inserimento attuale in una lista di trapianti di fegato, uso di pre-, pro- o simbiotici, uso di antibiotici sistemici 3 mesi prima della randomizzazione, uso di tamoxifene, metotrexato o amiodarone, chirurgia bariatrica precedente o pianificata, diabete mellito con trattamento attivo con agonisti del recettore del GLP-1, disturbo della coagulazione, rapporto internazionale normalizzato (INR) del tempo di protrombina >1,4 o conta piastrinica <50 109/L allo screening, uso di terapia antipiastrinica/coagulante che non può essere temporaneamente interrotta, qualsiasi evento cardiovascolare maggiore nei 6 mesi precedenti lo screening (ad es. infarto miocardico, accidente cerebrovascolare), immunità compromessa prolungata (ad es. recente chemioterapia citotossica, infezione da HIV con conta dei CD4 < 240), storia attiva o precedente di tumore maligno invasivo (ad eccezione dei carcinomi in situ trattati curativamente [ad es. programmato per il periodo di durata dello studio, ad eccezione di procedure chirurgiche minori secondo il parere dello sperimentatore, donne in gravidanza o che allattano, qualsiasi condizione che, secondo il parere dello sperimentatore, potrebbe mettere a repentaglio la sicurezza dei partecipanti o il rispetto del protocollo e la partecipazione a un'altra clinica concomitante prova.

Un totale di 48 pazienti riceveranno un trattamento sinbiotico con A. soehngenii, A. muciniphila pastorizzato, B. animalis subsp. lactis e frutto-oligosaccaridi, e saranno randomizzati 1:1 al trattamento con FMT o placebo, stratificati per uso di inibitori della pompa protonica, uso di metformina e punteggio di fibrosi istopatologica.

Intervento:

Partecipanti destinatari Dal giorno -3 prima del primo FMT fino al completamento dello studio, tutti i partecipanti riceveranno una singola dose orale giornaliera di 5 g di FOS. Successivamente, i partecipanti saranno randomizzati a capsule FMT da donatore magro (donatori condizionati con WholeFiber) o placebo (design in cieco)1.

Al basale (giorno 0) e alla settimana 8 (giorno 56) e alla settimana 16 (giorno 112) i partecipanti ingeriranno 21 LFMT o capsule di placebo. Le visite di studio avranno una distanza di 8 settimane, sebbene venga implementato un margine da -3 giorni a +3 giorni per tenere conto del programma e della disponibilità dei partecipanti. Inoltre, i partecipanti assumeranno giornalmente 2 capsule di LFMT o placebo durante l'intero periodo di studio (24 settimane).

I ricercatori hanno precedentemente osservato che la composizione del microbiota intestinale nel ricevente è influenzata fino a 8-12 settimane dopo l'FMT1 del donatore, quindi questa finestra temporale garantisce una composizione stabile del microbiota intestinale del donatore durante lo studio.

Durante il periodo di intervento di 24 settimane, tutti i partecipanti assumeranno dosi giornaliere di 109 cellule A. soehngenii CH-106 (dosaggio basato su studi precedenti incluso lo studio tossicologico)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (un ceppo ben studiato commercializzato come probiotico da Sacco SRL) e 3x1010 cellule A. muciniphila ATCC BAA-835T pastorizzate (dosaggio basato sull'approvazione dell'EFSA e ottenuto da A-Mansia Biotech).

Le biopsie epatiche percutanee verranno eseguite come parte dello screening quando i partecipanti sono teoricamente idonei alla partecipazione, a meno che non sia stata eseguita una biopsia epatica nelle precedenti 36 settimane. Una lettura in tandem da parte di due patologi del fegato ciechi rispetto a qualsiasi altro risultato determinerà se i pazienti saranno inclusi nello studio. A 24 settimane, verrà eseguita un'altra biopsia epatica per esaminare l'effetto dell'FMT, che sarà anche esaminato da due patologi epatici (di nuovo all'oscuro di qualsiasi altro risultato). La classificazione NASH-CRN sarà valutata su vetrini H&E, per steatosi, infiammazione e mongolfiera, e con un vetrino colorato con rosso Sirius per la valutazione della fibrosi. L'RNA per il sequenziamento dell'RNA sarà isolato.

L'espressione genica differenziale sarà valutata nel tempo (basale e 24 settimane) e in base all'allocazione del trattamento (FMT da donatore vegano rispetto a placebo).

Le feci saranno raccolte al basale e dopo la settimana 2, 8, 10, 16, 18 e 24, al fine di studiare i cambiamenti nel microbioma intestinale. Inoltre, saranno valutati i marcatori della funzione della barriera intestinale.

Il sangue verrà raccolto al basale ea 8, 16 e 24 settimane per studiare i comuni enzimi epatici, gli indicatori del controllo glicemico, i lipidi e i parametri di infiammazione generali e più specifici della NASH.

Una risonanza magnetica multiparametrica del fegato (MRI-PDFF, RM elastografia, T1 corretto) e del grasso viscerale e sottocutaneo verrà eseguita al basale e dopo 24 settimane per stimare il volume del deposito di tessuto adiposo viscerale e sottocutaneo, il contenuto di grasso epatico così come la fibrosi epatica e infiammazione.

Le misurazioni continue del glucosio verranno eseguite a casa utilizzando dispositivi portatili, durante un periodo consecutivo di 1 settimana (7 giorni) nella settimana prima del basale, settimana 1, 9, 17 e 25.

Donatori vegani

I campioni di donatori fecali saranno raccolti, liofilizzati ("liofilizzati") e incapsulati (vedi paragrafo 6.8). Successivamente, le capsule LFMT saranno conservate a -80°C. I donatori saranno ampiamente sottoposti a screening per le malattie infettive.

Il risultato principale

Per dimostrare che A. soehngenii combinato con A. muciniphila pastorizzato e B. animalis subsp. lactis, FOS e le capsule LFMT vegane condizionate riducono la NASH come definito da un miglioramento dell'istologia epatica in individui con NASH e stadio di fibrosi 0-3, con miglioramento definito come riduzione della steatoepatite di ≥1 punto SAF-A e nessun peggioramento della fibrosi epatica, o miglioramento della fibrosi epatica ≥ 1 stadio e nessun peggioramento della steatoepatite.

Esiti secondari

Per dimostrare che il trattamento combinato migliora:

• esiti non invasivi di NAFLD, ovvero MRI multiparametrica del fegato e del tessuto adiposo sottocutaneo circostante (MRI-PDFF, RM elastografia, T1 corretto), FibroScan Elastography e Controlled Attenuation Parameters e pannello al plasma Pannello Enhanced Liver Fibrosis (ELF), pro-C3 .
• variazione dei marcatori ematici dal basale alla fine del trattamento, vale a dire: enzimi epatici (es. alanina amino transferasi (ALT), aspartato amino transferasi (AST), gamma glutamil transferasi (GGT), fosfatasi alcalina (ALP)), marcatori ematici infiammatori (es. leucociti, monociti, CRP, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-α, IFN-γ, altri marcatori infiammatori), SCFA (es. propionato, butirrato, acetato), lattato, etanolo, lipidi plasmatici (es. LDL, HDL, trigliceridi, colesterolo totale), albumina, creatinina, emoglobina, FGF-21, adiponectina, leptina, lipopolisaccaridi, estrogeni, vitamina B12, acido folico, zonulina e altri esiti metabolomici e lipodomici.
• letture del microbioma (composizione, attecchimento, tracciamento del ceppo) e metaboliti, composizione SCFA fecale e albumina fecale.
• controllo glicemico, insulino-resistenza, peso corporeo/BMI, circonferenza vita e percentuale di grasso corporeo
• Criteri MetSy / %
• Produzione SCFA e rilascio GLP1
• profilo di espressione genica epatica: vie lipogeniche, infiammatorie e fibrogeniche.
• patologia epatica, caratteristiche istopatologiche, immunofluorescenza e valutazione delle proteine ​​fisiopatologiche.
• Istologia NAFLD valutata con un algoritmo approfondito che valuta intere immagini di diapositive di biopsie epatiche.
• Monitoraggio continuo del glucosio (4x 7 giorni consecutivi)
• qualità della vita (generale (SF36) e specifica per NAFLD/NASH (CDLQ-NAFLD)).