Transplantacja synbiotyków i mikroflory kałowej w leczeniu niealkoholowego stłuszczeniowego zapalenia wątroby (SYNCH)

Główny cel Zbadanie potencjału terapeutycznego A. soehngenii i pasteryzowanego A. muciniphila w połączeniu z B. animalis subsp. lactis i fruktooligosacharydy z kondycjonowanymi wegańskimi liofilizowanymi kapsułkami do przeszczepu mikroflory kałowej (LFMT) i bez nich w celu zmniejszenia NASH u pacjentów z NASH i zwłóknieniem NASH.

Cel drugorzędny Zbadanie mechanizmów A. soehngenii i pasteryzowanego A. muciniphila w połączeniu z B. animalis subsp. lactis i FOS z kondycjonowanymi wegańskimi kapsułkami LFMT i bez nich w zmniejszaniu NASH u pacjentów z NASH i zwłóknieniem NASH.

Projekt badania:

Randomizowane, kontrolowane placebo badanie interwencyjne z podwójnie ślepą próbą.

Badana populacja:

Pacjenci w wieku od 18 do 75 lat z NASH potwierdzonym biopsją uzyskanym do 32 tygodni przed badaniem przesiewowym na podstawie tandemowego odczytu dwóch ekspertów patologów wątroby: wynik SAF stłuszczenie ≥1, aktywność ≥2, zwłóknienie <4; 50% uczestników powinno mieć co najmniej 1, 2 lub 3 stopień zwłóknienia NASH zgodnie z systemem stopniowania zwłóknienia NASH CRN.

Kryteria wykluczenia to: Aktualne lub przebyte znaczne spożycie alkoholu przez okres dłuższy niż 3 kolejne miesiące w ciągu 1 roku przed badaniem przesiewowym (znaczne spożycie alkoholu definiuje się jako ponad 2 jednostki dziennie dla kobiet i ponad 3 jednostki międzynarodowe dziennie dla mężczyzn , średnio; 1 jednostka międzynarodowa zawiera ±14 gramów alkoholu), marskość wątroby lub rak wątrobowokomórkowy, wirusowe zapalenie wątroby typu B i/lub C, autoimmunologiczne zapalenie wątroby, choroba Wilsona, pierwotne stwardniające zapalenie dróg żółciowych, pierwotne zapalenie dróg żółciowych, niedobór alfa-1-antytrypsyny i hemochromatoza, przebyty przeszczep wątroby, aktualna pozycja na liście przeszczepów wątroby, stosowanie pre-, pro- lub synbiotyków, stosowanie antybiotyków ogólnoustrojowych 3 miesiące przed randomizacją, stosowanie tamoksyfenu, metotreksatu lub amiodaronu, przebyta lub planowana operacja bariatryczna, cukrzyca z leczeniem aktywnymi agonistami receptora GLP-1, skaza krwotoczna, międzynarodowy współczynnik znormalizowany (INR) czasu protrombinowego >1,4 lub liczba płytek krwi <50 109/l w badaniu przesiewowym, stosowanie leków przeciwpłytkowych/zakrzepowych, których nie można czasowo przerwać, jakiekolwiek poważny incydent sercowo-naczyniowy w ciągu 6 miesięcy przed badaniem przesiewowym (np. zawał mięśnia sercowego, incydent naczyniowo-mózgowy), przedłużona obniżona odporność (np. niedawno przebyta chemioterapia cytotoksyczna, zakażenie wirusem HIV z liczbą CD4 < 240), czynny lub wcześniejszy inwazyjny nowotwór złośliwy (z wyjątkiem leczonych leczonych raków in situ [np. szyjki macicy] lub nieczerniakowy rak skóry), chyba że uzyskano całkowitą remisję, zaplanowanych na czas trwania badania, z wyjątkiem drobnych zabiegów chirurgicznych w opinii badacza, kobiet w ciąży lub karmiących piersią, wszelkich stanów, które w opinii badacza mogą zagrozić bezpieczeństwu uczestników lub przestrzeganiu protokołu oraz udziału w innym towarzyszącym badaniu klinicznym test.

W sumie 48 pacjentów otrzyma leczenie synbiotyczne A. soehngenii, pasteryzowaną A. muciniphila, B. animalis subsp. lactis i fruktooligosacharydów i zostaną losowo przydzieleni w stosunku 1:1 do leczenia FMT lub placebo, stratyfikowani pod kątem stosowania inhibitora pompy protonowej, stosowania metforminy i wyniku histopatologicznego zwłóknienia.

Interwencja:

Odbiorcy Od dnia -3 przed pierwszym FMT do zakończenia badania wszyscy uczestnicy otrzymujący będą otrzymywać doustnie pojedynczą dawkę dzienną 5 g FOS. Następnie uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do grupy przyjmującej kapsułki FMT od szczupłych dawców (dawcy kondycjonowani za pomocą WholeFiber) lub placebo (zaślepiony projekt)1.

Na początku badania (dzień 0) oraz w tygodniu 8 (dzień 56) i tygodniu 16 (dzień 112) uczestnicy przyjmą 21 kapsułek LFMT lub placebo. Wizyty studyjne będą odbywać się co 8 tygodni, chociaż wprowadza się margines od -3 dni do +3 dni, aby uwzględnić harmonogram i dostępność uczestników. Ponadto uczestnicy będą codziennie przyjmować 2 kapsułki LFMT lub placebo przez cały okres badania (24 tygodnie).

Badacze zaobserwowali wcześniej, że skład mikroflory jelitowej u biorcy zmienia się do 8-12 tygodni po FMT1 dawcy, więc to okno czasowe zapewnia stabilny skład mikroflory jelitowej dawcy podczas badania.

Podczas 24-tygodniowego okresu interwencji wszyscy uczestnicy będą przyjmować dzienne dawki 109 komórek A. soehngenii CH-106 (dawkowanie oparte na wcześniejszych badaniach, w tym badaniu toksykologicznym)2,3, 1010 B. animalis subsp. lactis BLC1 (dobrze przebadany szczep sprzedawany jako probiotyk przez Sacco SRL) i 3x1010 pasteryzowanych komórek A. muciniphila ATCC BAA-835T (dawkowanie oparte na zatwierdzeniu EFSA i uzyskane z A-Mansia Biotech).

Przezskórne biopsje wątroby będą wykonywane jako część badań przesiewowych, gdy uczestnicy teoretycznie kwalifikują się do udziału, chyba że biopsja wątroby została przeprowadzona w ciągu ostatnich 36 tygodni. Odczyt tandemowy przez dwóch patologów zajmujących się wątrobą, zaślepionych na jakiekolwiek inne wyniki, określi, czy pacjenci zostaną włączeni do badania. Po 24 tygodniach zostanie przeprowadzona kolejna biopsja wątroby w celu zbadania wpływu FMT, która zostanie również oceniona przez dwóch patologów wątroby (ponownie zaślepionych na jakiekolwiek inne wyniki). Klasyfikacja NASH-CRN zostanie oceniona na szkiełkach H&E pod kątem stłuszczenia, stanu zapalnego i balonowatości oraz na szkiełku barwionym na czerwono Syriuszem w celu oceny zwłóknienia. RNA do sekwencjonowania RNA zostanie wyizolowane.

Zróżnicowana ekspresja genów zostanie oceniona w czasie (wartość wyjściowa i 24 tygodnie) oraz przez przydział leczenia (wegański dawca FMT w porównaniu z placebo).

Kał będzie zbierany na początku badania oraz po 2, 8, 10, 16, 18 i 24 tygodniu w celu zbadania zmian w mikrobiomie jelitowym. Ocenione zostaną również markery funkcji bariery jelitowej.

Krew zostanie pobrana na początku badania oraz po 8, 16 i 24 tygodniach w celu zbadania typowych enzymów wątrobowych, wskaźników kontroli glikemii, lipidów oraz ogólnych i bardziej specyficznych dla NASH parametrów stanu zapalnego.

Wieloparametryczne MRI wątroby (MRI-PDFF, elastografia MR, skorygowany T1) oraz trzewnej i podskórnej tkanki tłuszczowej zostanie wykonane na początku badania i po 24 tygodniach w celu oszacowania objętości depot trzewnej i podskórnej tkanki tłuszczowej, zawartości tłuszczu w wątrobie oraz zwłóknienia wątroby i zapalenie.

Ciągłe pomiary glukozy będą wykonywane w domu za pomocą urządzeń przenośnych, przez kolejny okres 1 tygodnia (7 dni) w tygodniu przed punktem wyjściowym, w 1., 9., 17. i 25. tygodniu.

Darczyńcy wegańscy

Próbki kału dawcy zostaną pobrane, liofilizowane („liofilizowane”) i kapsułkowane (zob. pkt 6.8). Następnie kapsułki LFMT będą przechowywane w -80°C. Dawcy zostaną dokładnie przebadani pod kątem chorób zakaźnych.

Podstawowy wynik

Aby wykazać, że A. soehngenii w połączeniu z pasteryzowaną A. muciniphila i B. animalis subsp. lactis, FOS i kondycjonowane wegańskie kapsułki LFMT redukują NASH definiowaną jako poprawa histologii wątroby u osób z NASH i zwłóknieniem w stopniu 0-3, z poprawą definiowaną jako zmniejszenie stłuszczeniowego zapalenia wątroby o ≥1 punkt SAF-A i brak pogorszenia zwłóknienia wątroby, lub poprawa w ≥ 1. stadium zwłóknienia wątroby i brak pogorszenia stłuszczeniowego zapalenia wątroby.

Wyniki drugorzędne

Aby wykazać, że leczenie skojarzone poprawia:

• nieinwazyjne wyniki NAFLD, tj. wieloparametryczny MRI wątroby i otaczającej podskórnej tkanki tłuszczowej (MRI-PDFF, elastografia MR, skorygowana T1), elastografia FibroScan i parametry kontrolowanego tłumienia oraz panel osocza, panel Enhanced Liver Fibrosis (ELF), pro-C3 .
• zmiana markerów krwi od stanu początkowego do końca leczenia, a mianowicie: aktywność enzymów wątrobowych (tj. aminotransferaza alaninowa (ALT), aminotransferaza asparaginianowa (AST), gamma-glutamylotransferaza (GGT), fosfataza alkaliczna (ALP)), markery zapalne krwi (tj. leukocyty, monocyty, CRP, Il-1(β), Il-6, Il-11, Il-17, Il-32, TNF-α, IFN-γ, inne markery stanu zapalnego), SCFA (tj. propionian, maślan, octan), mleczan, etanol, lipidy osocza (tj. LDL, HDL, triglicerydy, cholesterol całkowity), albuminy, kreatyniny, hemoglobiny, FGF-21, adiponektyny, leptyny, lipopolisacharydów, estrogenu, witaminy B12, kwasu foliowego, zonuliny i innych efektów metabolicznych i lipodomicznych.
• odczyty mikrobiomu (skład, wszczepienie, śledzenie szczepu) i metabolity, skład SCFA w kale i albumina w kale.
• kontrola glikemii, insulinooporność, masa ciała/BMI, obwód talii i procent tkanki tłuszczowej
• Kryteria MetSy / %
• Produkcja SCFA i wydanie GLP1
• profil ekspresji genów wątroby: szlaki lipogenne, zapalne i fibrogeniczne.
• patologia wątroby, cechy histopatologiczne, immunofluorescencja i ocena białek patofizjologicznych.
• Histologia NAFLD oceniana za pomocą dogłębnie wyuczonego algorytmu oceniającego całe slajdy z biopsji wątroby.
• Ciągłe monitorowanie glikemii (4x 7 kolejnych dni)
• jakość życia (ogólna (SF36) i specyficzna dla NAFLD/NASH (CDLQ-NAFLD)).