Identifizierung zirkulierender Brustkrebszellen bei Frauen mit metastasiertem Brustkrebs

ZIELE:

Primär

• Vergleich der Identifizierung zirkulierender Brustkrebszellen (CBCCs) in Blut oder Pleura- oder Peritonealflüssigkeit durch eine neuartige Technik unter Verwendung von Stammzellmarker Retinaldehyddehydrogenase (ALDH) und Oberflächenantigenexpression (CD44+, CD24-) mit der Standardtechnik unter Verwendung des CellSearch®-Systems bei Frauen mit metastasiertem Brustkrebs.

Sekundär

• Um festzustellen, ob CBCCs das Potenzial haben, zu metastatischen Läsionen heranzuwachsen.

ÜBERBLICK: Patienten werden Probenentnahmen unterzogen, um bei der Entwicklung einer neuen Technik unter Verwendung von Stammzellmarker Retinaldehyddehydrogenase (ALDH) und Oberflächenantigenexpression (CD44+, CD24-) bei der Isolierung zirkulierender Brustkrebszellen (CBCCs) aus Blut und Pleura- oder Peritonealflüssigkeit zu helfen. Es kann auch Blut entnommen werden, um die Anzahl der zirkulierenden Tumorzellen unter Verwendung des Standard-CellSearch®-Systems zu messen.

Mononukleäre Zellen werden durch Dichtezentrifugation isoliert. Zellen werden gegen Oberflächenantigene gefärbt, die spezifische Expressionsmuster für CBCCs (CD44, CD24) liefern. Die Zellen werden auf einem fluoreszenzaktivierten Zellsortierungs(FACS)-Calibur-Durchflusszytometer analysiert und sequentiell gegattert (ALDHhoch → CD44+ vs. CD24–/niedrig oder CD44+ vs. CD24–/niedrig→ALDHhoch) zum Nachweis von CBCCs. Zur weiteren Bestätigung des epithelialen Ursprungs werden ALDHhighCD44+CD24-/low-Zellen unter Verwendung eines FACSAria-Durchflusssortierers isoliert, auf Glasobjektträger zytozentrifugiert und dann mit immunhistochemischen Standardtechniken auf die Expression der epithelialspezifischen Zytokeratine 5, 8, 14, 18 und 19 gefärbt. Unter Verwendung des Phänotyps, der am stärksten für Epithelzellen angereichert ist, werden Zellen durch FACS isoliert und auf klonogenes Wachstum getestet.