Identificação de células circulantes de câncer de mama em mulheres com câncer de mama metastático

OBJETIVOS:

primário

• Comparar a identificação de células circulantes de câncer de mama (CBCCs) no sangue ou líquido pleural ou peritoneal por uma nova técnica usando marcador de células-tronco retinaldeído desidrogenase (ALDH) e expressão de antígeno de superfície (CD44+, CD24-) com a técnica padrão usando o sistema CellSearch® em mulheres com câncer de mama metastático.

Secundário

• Para determinar se os CBCCs têm o potencial de crescer em lesões metastáticas.

ESBOÇO: Os pacientes passam por coleta de amostras para ajudar a desenvolver uma nova técnica usando marcador de células-tronco retinaldeído desidrogenase (ALDH) e expressão de antígeno de superfície (CD44+, CD24-) no isolamento de células circulantes de câncer de mama (CBCCs) do sangue e líquido pleural ou peritoneal. O sangue também pode ser coletado para medir o número de células tumorais circulantes usando o sistema padrão CellSearch®.

As células mononucleares são isoladas por centrifugação de densidade. As células são coradas contra antígenos de superfície que fornecem padrões de expressão específicos para CBCCs (CD44, CD24). As células são analisadas em um citômetro de fluxo Calibur de separação de células ativadas por fluorescência (FACS) e controladas sequencialmente (ALDHhigh→CD44+ vs CD24-/low ou CD44+ vs CD24-/low→ALDHhigh) para detecção de CBCCs. Para confirmação adicional da origem epitelial, as células ALDHhighCD44+CD24-/low são isoladas usando um classificador de fluxo FACSAria, citocentrifugadas em lâminas de vidro e então coradas para a expressão de citoqueratinas específicas epiteliais 5, 8, 14, 18 e 19 por técnicas imuno-histoquímicas padrão. Usando o fenótipo que é encontrado para enriquecer mais altamente para células epiteliais, as células são isoladas por FACS e testadas para crescimento clonogênico.