Identificación de células cancerosas de mama circulantes en mujeres con cáncer de mama metastásico

OBJETIVOS:

Primario

• Comparar la identificación de células de cáncer de mama circulantes (CBCC) en sangre o líquido pleural o peritoneal mediante una técnica novedosa que utiliza el marcador de células madre retinaldehído deshidrogenasa (ALDH) y la expresión de antígenos de superficie (CD44+, CD24-) con la técnica estándar que utiliza el sistema CellSearch® en mujeres con cáncer de mama metastásico.

Secundario

• Determinar si los CBCC tienen el potencial de convertirse en lesiones metastásicas.

ESQUEMA: Los pacientes se someten a la recolección de muestras para ayudar a desarrollar una nueva técnica que utiliza el marcador de células madre retinaldehído deshidrogenasa (ALDH) y la expresión de antígenos de superficie (CD44+, CD24-) para aislar células de cáncer de mama circulantes (CBCC) de sangre y líquido pleural o peritoneal. También se puede extraer sangre para medir la cantidad de células tumorales circulantes utilizando el sistema CellSearch® estándar.

Las células mononucleares se aíslan mediante centrifugación de densidad. Las células se tiñen contra antígenos de superficie que proporcionan patrones de expresión específicos para CBCC (CD44, CD24). Las células se analizan en un citómetro de flujo Calibur de clasificación de células activadas por fluorescencia (FACS) y se sincronizan secuencialmente (ALDHhigh→CD44+ vs CD24-/low o CD44+ vs CD24-/low→ALDHhigh) para la detección de CBCC. Para una mayor confirmación del origen epitelial, las células ALDHhighCD44+CD24-/low se aíslan utilizando un clasificador de flujo FACSAria, se citocentrifugan en portaobjetos de vidrio y luego se tiñen para determinar la expresión de citoqueratinas epiteliales específicas 5, 8, 14, 18 y 19 mediante técnicas inmunohistoquímicas estándar. Usando el fenotipo que se encuentra que enriquece más las células epiteliales, las células se aíslan mediante FACS y se ensaya el crecimiento clonogénico.