Bestrahlung, Chemotherapie, Impfstoff und Anti-MART-1- und Anti-gp100-Zellen für Patienten mit metastasierendem Melanom

Hintergrund:

• Wir haben humane periphere Blutlymphozyten (PBLs) entwickelt, um einen T-Zell-Rezeptor (TCR) zu exprimieren, der humane Leukozyten-Antigene (HLAA*0201)-eingeschränkte Epitope erkennt, die von gp100 oder dem MART-1-Melanom-Antigen stammen.
• Wir konstruierten einzelne retrovirale Vektoren, die sowohl Alpha- als auch Beta-T-Zellrezeptor (TCR)-Ketten enthalten und den genetischen Transfer dieses TCR mit hoher Effizienz (mehr als 30 Prozent) vermitteln können, ohne dass eine Selektion durchgeführt werden muss.
• In Co-Kulturen mit HLA-A*0201-positiven Melanomen sezernierten diese TCR-transduzierten T-Zellen eine signifikante Menge an Interferon-gamma (IFN-γ), aber in Kontroll-Co-Kulturen wurde keine signifikante Sekretion beobachtet.
• gp100:154-162 TCR oder MART-1:27-35 TCR transduzierte T-Zellen könnten HLAA*0201-positive Tumore effizient abtöten. Es gab wenig oder keine Erkennung von normalen Fibroblasten.
• Der adoptive Transfer eines dieser TCR-übertragenen genmodifizierten peripheren Blutlymphozyten (PBL) nach einer nichtmyeloablativen lymphodepletierenden Behandlung konnte bei 13-30 Prozent der Patienten mit metastasierendem Melanom eine Tumorregression vermitteln, obwohl kein vollständiges Ansprechen beobachtet wurde.

Ziele:

Hauptziele:

• In Kohorte 1 und 2, um zu bestimmen, ob die Verabreichung sowohl der anti-gp100:154-162 TCR-modifizierten als auch der anti-MART-1:27-35 TCR-modifizierten peripheren Blutlymphozyten (PBL), Aldesleukin und entweder gp100: 154-162-Peptid oder das MART-1:26-35(27L)-Peptid an Patienten, die einem präparativen Therapieschema zur Chemoradiation-Lymphodepletion folgen, führt zu einer vollständigen Tumorregression bei Patienten mit metastasierendem Melanom.
• In Kohorte 3 und 4, um festzustellen, ob die Verabreichung sowohl der anti-gp100:154-162 TCR-konstruierten als auch der anti-MART-1:27-35 TCR-konstruierten CD8+ peripheren Blutlymphozyten (PBL), Aldesleukin und entweder gp100 :154-162-Peptid oder das MART-1:26-35(27L)-Peptid an Patienten, die einer präparativen Chemo-Radiotherapie-Lymphodepletionsbehandlung folgen, führt zu einer vollständigen Tumorregression bei Patienten mit metastasierendem Melanom.
• Bestimmen Sie, ob die Verabreichung des spezifischen Impfstoffs (des gp100:154-162-Peptids oder des MART-1:26-35(27L)-Peptids) die Persistenz der spezifischen übertragenen Zellen (anti-gp100:154-162 TCR PBL, Anti-gp100:154-162 TCR CD8+ PBL, Anti-MART-1:27-35 TCR PBL bzw. Anti-MART-1:27-35 TCR CD8+ PBL).

Sekundäre Ziele:

- Bestimmung des Toxizitätsprofils dieser Behandlungsschemata.

Teilnahmeberechtigung:

Patienten, die HLA-A*0201-positiv sind und 18 Jahre oder älter sind, müssen Folgendes haben:

• metastasierendes Melanom mit messbarer Erkrankung
• zuvor mit IL-2 gegen Melanom behandelt worden sind;
• Normalwerte für grundlegende Laborwerte.

Patienten haben möglicherweise nicht:

• gleichzeitige schwere medizinische Erkrankungen;
• jede Form von primärer oder sekundärer Immunschwäche;
• schwere Überempfindlichkeit gegen einen der in dieser Studie verwendeten Wirkstoffe;
• Kontraindikationen für die Verabreichung von hochdosiertem Aldesleukin.

Design:

• In Kohorte 1 und 2:

  • Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden durch Leukapherese (ungefähr 5 mal 10(9) Zellen) gewonnen und in Gegenwart von Anti-CD3 (OKT3) und Aldesleukin kultiviert und getrennte Aliquots werden mit Anti-gp100 transduziert:154- 162 TCR und der anti-MART-1:27-35 TCR retrovirale Vektor.
  • Die Transduktion wird initiiert, indem ungefähr 10(8) bis 5 mal 10(8) Zellen einem Überstand ausgesetzt werden, der die retroviralen Vektoren enthält. Diese gp100- und MART-1-TCR-transduzierten Zellen werden separat expandiert und auf ihre Antitumoraktivität getestet.
  • Sobald die biologische Aktivität der gentechnisch hergestellten Lymphozyten gemäß den strengen Kriterien des Analysezertifikats nachgewiesen wurde, erhalten die Patienten eine präparative Therapie zur Lymphozytendepletion durch Radiochemotherapie, bestehend aus Cyclophosphamid und Fludarabin und einer Ganzkörperbestrahlung mit 600 cGy, gefolgt von einer intravenösen Infusion von Ex-vivo-Tumorreaktivem , gp100 und MART-1 TCR-Gen-transduzierte Zellen plus i.v. Aldesleukin (720.000 IE/kg alle 8 h für maximal 15 Dosen).
  • Die Patienten werden randomisiert, um entweder das gp100:154-162-Peptid oder das MART-1:26-35(27L)-Peptid, emulgiert in unvollständigem Freund-Adjuvans, zu erhalten.
  • Die Patienten werden vier bis sechs Wochen nach der Behandlung und dann monatlich für etwa 3 bis 4 Monate oder bis die Kriterien außerhalb der Studie erfüllt sind, einer vollständigen Untersuchung des Tumors mit körperlicher Untersuchung, Computertomographie (CT) von Brust, Bauch und Becken und klinischer Laboruntersuchung unterzogen.
  • Die Studie wird unter Verwendung eines optimalen Phase-II-Designs durchgeführt, bei dem zunächst 21 auswertbare Patienten in jede von zwei Kohorten aufgenommen werden. Wenn keiner der 21 Patienten pro Kohorte ein vollständiges klinisches Ansprechen erfährt, werden keine weiteren Patienten aufgenommen, aber wenn 1 oder mehr der ersten 21 auswertbaren Patienten, die in diese Kohorte aufgenommen wurden, ein vollständiges klinisches Ansprechen aufweisen, wird diese Kohorte bis zum 21 Insgesamt wurden 41 auswertbare Patienten in diese Kohorte aufgenommen.
  • Die Kohorten 1 und 2 werden mit der Genehmigung von Änderung D geschlossen.

• Die Kohorten 3 und 4 werden mit Genehmigung von Änderung D eingeleitet.

  • Periphere mononukleäre Blutzellen (PBMC) werden durch Leukapherese (ungefähr 5 mal 10(9) Zellen) gewonnen und CD8+-Zellen werden aus den Kulturen unter Verwendung des Miltenyi CliniMACS-Geräts selektiert, bevor sie stimuliert und transduziert werden. Separate Aliquots von CD8+-Zellen werden mit den retroviralen Anti-gp100:154-162-TCR- und Anti-MART-1:27-35-TCR-Vektoren transduziert.
  • Die Transduktion wird initiiert, indem ungefähr 10(8) bis 5 mal 10(8) CD8+-Zellen einem Überstand ausgesetzt werden, der die retroviralen Vektoren enthält. Diese gp100- und MART-1-TCR-transduzierten Zellen werden separat expandiert und auf ihre Antitumoraktivität getestet.
  • Sobald die biologische Aktivität der gentechnisch hergestellten Lymphozyten gemäß den strengen Kriterien des Analysezertifikats nachgewiesen wurde, erhalten die Patienten eine präparative Therapie zur Lymphozytendepletion durch Radiochemotherapie, bestehend aus Cyclophosphamid und Fludarabin und einer Ganzkörperbestrahlung mit 600 cGy, gefolgt von einer intravenösen Infusion von Ex-vivo-Tumorreaktivem , gp100 und MART-1 TCR-Gen-transduzierte CD8+-Zellen plus i.v. Aldesleukin (720.000 IE/kg alle 8 h für maximal 15 Dosen).
  • Die Patienten werden randomisiert, um entweder das gp100:154-162-Peptid (Kohorte 3) oder das MART-1:26-35(27L)-Peptid (Kohorte 4) zu erhalten, das in inkomplettem Freund-Adjuvans emulgiert ist.
  • Die Patienten werden vier bis sechs Wochen nach der Behandlung und dann monatlich für etwa 3 bis 4 Monate oder bis die Kriterien außerhalb der Studie erfüllt sind, einer vollständigen Beurteilung des Tumors mit körperlicher Untersuchung, CT von Brust, Bauch und Becken und einer klinischen Laboruntersuchung unterzogen.
  • Die Studie wird unter Verwendung eines optimalen Phase-II-Designs durchgeführt, bei dem zunächst 21 auswertbare Patienten in jede der Kohorten 3 und 4 aufgenommen werden. Wenn keiner der 21 Patienten pro Kohorte ein vollständiges klinisches Ansprechen erfährt, werden keine weiteren Patienten aufgenommen, aber wenn 1 oder mehr der ersten 21 auswertbaren Patienten, die in diese Kohorte aufgenommen wurden, haben ein vollständiges klinisches Ansprechen, dann wird die Zuwachsrate für diese Kohorte fortgesetzt, bis insgesamt 41 auswertbare Patienten in diese Kohorte aufgenommen wurden.