Radiação, quimioterapia, vacina e células anti-MART-1 e anti-gp100 para pacientes com melanoma metastático

Fundo:

• Projetamos linfócitos do sangue periférico humano (PBLs) para expressar um receptor de células T (TCR) que reconhece epítopos restritos de antígenos leucocitários humanos (HLAA*0201) derivados do gp100 ou do antígeno de melanoma MART-1.
• Construímos vetores retrovirais únicos que contêm cadeias de receptores de células T alfa e beta (TCR) e podem mediar a transferência genética desse TCR com alta eficiência (maior que 30 por cento) sem a necessidade de realizar qualquer seleção.
• Em co-culturas com melanomas positivos para HLA-A*0201, essas células T transduzidas por TCR secretaram uma quantidade significativa de interferon-gama (IFN-y), mas nenhuma secreção significativa foi observada em co-culturas de controle.
• As células T transduzidas por TCR gp100:154-162 ou MART-1:27-35 TCR podem matar com eficiência tumores positivos para HLAA*0201. Houve pouco ou nenhum reconhecimento de fibroblastos normais.
• A transferência adotiva de qualquer um desses linfócitos do sangue periférico (PBL) modificados por genes transferidos por TCR após um regime de linfodepleção não mieloablativa pode mediar a regressão do tumor em 13-30 por cento dos pacientes com melanoma metastático, embora nenhuma resposta completa tenha sido observada.

Objetivos.

Objetivos primários:

• Nas coortes 1 e 2, para determinar se a administração de linfócitos do sangue periférico (PBL) anti-gp100:154-162 engenheirados por TCR e anti-MART-1:27-35 TCR, aldesleucina e gp100: 154-162 ou o peptídeo MART-1:26-35(27L) a pacientes após um regime preparativo de linfodepleção por quimiorradiação resultará em regressão completa do tumor em pacientes com melanoma metastático.
• Nas coortes 3 e 4, para determinar se a administração de linfócitos de sangue periférico (PBL) CD8+ anti-gp100:154-162 engenheirados por TCR e anti-MART-1:27-35 TCR, aldesleucina e gp100 :154-162 ou o peptídeo MART-1:26-35(27L) a pacientes após um regime preparativo de linfodepleção por quimiorradiação resultará em regressão completa do tumor em pacientes com melanoma metastático.
• Determine se a administração da vacina específica (o peptídeo gp100:154-162 ou o peptídeo MART-1:26-35(27L)) pode aumentar a persistência das células transferidas específicas (anti-gp100:154-162 TCR PBL, anti-gp100:154-162 TCR CD8+ PBL, o anti-MART-1:27-35 TCR PBL ou o anti-MART-1:27-35 TCR CD8+ PBL), respectivamente.

Objetivos secundários:

- Determinar o perfil de toxicidade deste regime de tratamento.

Elegibilidade:

Pacientes com HLA-A*0201 positivo e com 18 anos de idade ou mais devem ter:

• melanoma metastático com doença mensurável
• foi previamente tratado com IL-2 para melanoma;
• valores normais para valores laboratoriais básicos.

Os pacientes podem não ter:

• doenças médicas graves concomitantes;
• qualquer forma de imunodeficiência primária ou secundária;
• hipersensibilidade grave a qualquer um dos agentes utilizados neste estudo;
• contra-indicações para a administração de altas doses de aldesleucina.

Projeto:

• Na coorte 1 e 2:

  • Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) serão obtidas por leucaferese (aproximadamente 5 vezes 10(9) células) e cultivadas na presença de anti-CD3 (OKT3) e aldesleucina e alíquotas separadas serão transduzidas com o anti-gp100:154- 162 TCR e o vetor retroviral anti-MART-1:27-35 TCR.
  • A transdução é iniciada pela exposição de aproximadamente 10(8) a 5 vezes 10(8) células ao sobrenadante contendo os vetores retrovirais. Essas células transduzidas com gp100 e MART-1 TCR serão expandidas separadamente e testadas quanto à sua atividade antitumoral.
  • Uma vez demonstrado que os linfócitos modificados são biologicamente ativos de acordo com os critérios estritos descritos no Certificado de Análise, os pacientes receberão um regime preparativo de depleção de linfócitos por quimiorradiação que consiste em ciclofosfamida e fludarabina e irradiação corporal total de 600 cGy seguida de infusão intravenosa de tumor reativo ex vivo , células transduzidas pelos genes gp100 e MART-1 TCR mais aldesleucina IV (720.000 UI/kg q8h para um máximo de 15 doses).
  • Os pacientes serão randomizados para receber o peptídeo gp100:154-162 ou o peptídeo MART-1:26-35(27L) emulsificado em adjuvante incompleto de Freund.
  • Os pacientes serão submetidos a avaliação completa do tumor com exame físico, tomografia computadorizada (TC) de tórax, abdome e pelve e avaliação clínica laboratorial quatro a seis semanas após o tratamento e mensalmente por aproximadamente 3 a 4 meses ou até que os critérios fora do estudo sejam atendidos.
  • O estudo será conduzido usando um projeto ideal de fase II, onde inicialmente 21 pacientes avaliáveis ​​serão inscritos em cada uma das duas coortes. Se nenhum dos 21 pacientes por coorte apresentar uma resposta clínica completa, nenhum outro paciente será inscrito, mas se 1 ou mais dos primeiros 21 pacientes avaliáveis ​​inscritos nessa coorte tiverem uma resposta clínica completa, o acréscimo a essa coorte continuará até um total de 41 pacientes avaliáveis ​​foram inscritos nessa coorte.
  • As coortes 1 e 2 serão encerradas com a aprovação da emenda D.

• As coortes 3 e 4 serão iniciadas com a aprovação da emenda D.

  • Células mononucleares de sangue periférico (PBMC) serão obtidas por leucaferese (aproximadamente 5 vezes 10(9) células) e células CD8+ serão selecionadas das culturas, utilizando o aparelho Miltenyi CliniMACS, antes de serem estimuladas e transduzidas. Alíquotas separadas de células CD8+ serão transduzidas com os vetores retrovirais anti-gp100:154-162 TCR e anti-MART-1:27-35 TCR.
  • A transdução é iniciada pela exposição de aproximadamente 10(8) a 5 vezes 10(8) células CD8+ ao sobrenadante contendo os vetores retrovirais. Essas células transduzidas com gp100 e MART-1 TCR serão expandidas separadamente e testadas quanto à sua atividade antitumoral.
  • Uma vez demonstrado que os linfócitos modificados são biologicamente ativos de acordo com os critérios estritos descritos no Certificado de Análise, os pacientes receberão um regime preparativo de depleção de linfócitos de quimiorradiação que consiste em ciclofosfamida e fludarabina e irradiação corporal total de 600 cGy seguida de infusão intravenosa de tumor reativo ex vivo , gp100 e células CD8+ transduzidas pelo gene MART-1 TCR mais aldesleucina IV (720.000 UI/kg q8h para um máximo de 15 doses).
  • Os pacientes serão randomizados para receber o peptídeo gp100:154-162 (coorte 3) ou o peptídeo MART-1:26-35(27L) (coorte 4) emulsificado em adjuvante incompleto de Freund.
  • Os pacientes serão submetidos a avaliação completa do tumor com exame físico, TC de tórax, abdome e pelve e avaliação laboratorial clínica quatro a seis semanas após o tratamento e, em seguida, mensalmente por aproximadamente 3 a 4 meses ou até que os critérios do estudo sejam atendidos.
  • O estudo será conduzido usando um projeto ideal de fase II, onde inicialmente 21 pacientes avaliáveis ​​serão inscritos em cada uma das coortes 3 e 4. Se nenhum dos 21 pacientes por coorte apresentar uma resposta clínica completa, nenhum outro paciente será inscrito, mas se 1 ou mais dos primeiros 21 pacientes avaliáveis ​​inscritos nessa coorte tiverem uma resposta clínica completa, então o acréscimo a essa coorte continuará até que um total de 41 pacientes avaliáveis ​​tenham sido inscritos nessa coorte.